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RhoE表达上调对U87细胞NF-κB活性的影响

RhoE是Rho蛋白亚家族Rnd成员之一,能够抑肿瘤分子治疗靶点的可能性,本研究具体分析了制RhoA下游重要的效应分子ROCKⅠ的活性,从而抑RhoE表达上调对U87细胞NF-κB活性的影响。研制细胞骨架蛋白重组,影响细胞的极化和运动[1]。究发现,持续活化的NF-κB在胶质瘤的形成和高级RhoE蛋白在肿瘤的发生、发展中的作用也被越来越别胶质瘤的转变过程中起重要作用[6]。多的学者所研究,在前列腺、直肠癌、肝癌和乳腺癌中1材料与方法发现,RhoE均表达下调[2],在黑色素瘤、非小细胞肺癌中表达上调[3]1.1。我们的前期研究发现,RhoE在胶主要试剂胶质瘤U87细胞系由第四军医大学分子生物实验室提供。携带全长RhoE、巨细胞病质瘤细胞系和活体标本中表达下调,并且随着胶质瘤毒启动子(promoter of cytomegalovirus,pC MV)和Flag病理级别的增加而降低[4],说明该蛋白的表达下调在标签的质粒(pC MV...  (本文共3页) 阅读全文>>

山东师范大学
山东师范大学

P49/STRAP调控Myocardin-SRF介导血管平滑肌细胞收缩基因转录的机制研究

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)引发的心肌梗塞、中风和外周动脉疾病等临床并发症已成为当今社会重大的公共卫生问题。血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)由分化(收缩)表型转换成去分化(合成)表型是动脉粥样硬化或动脉损伤血管狭窄的重要细胞学事件,是血管重塑和闭塞的主要原因,因此探究VSMCs表型转换的分子机制具有重要的理论和现实意义。心肌素(Myocardin,MYOCD)是血清反应因子(serum response factor,SRF)共转录激活因子。SRF是一种能专一结合在靶基因CArG box上的转录因子,可激活目标基因的表达。MYOCD通过Q-rich domain与SRF N末端MADS box相互作用,与SRF共同结合在靶基因的CArG box上,形成MYOCD-SRF-CArG box复合体,激活心脏或平滑肌细胞收缩基因如SMα-actin,Mhc1...  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物学通报》2008年02期
生物学通报

如何降低免疫印迹实验的成本

随着我国高校教学条件的不断改善,也为了适应目前生命科学发展的需要,近年来国内一些高校的生物学院系,相继开设了分子生物学的实验课程。上海交通大学生命科学技术学院从2003年为本科生开设“分子生物学技术综合实验”课程以来,到现在已经有4个教学周期。该课程从一开始就开设了免疫印迹的实验内容,经过几年来的摸索,笔者积累了一些经验。在这里向大家介绍如何降低免疫印迹实验成本。免疫印迹(westem blotting)是分子生物学常用的技术,用于检测生物样品中特定蛋白的存在与其相对的含量。在高校中为本科生或研究生开展免疫印迹实验,如果不考虑仪器设备条件(电泳仪、垂直电泳槽、转移电泳槽)投人的话,主要的困难就在于实验的耗材过于昂贵,其中花销最大的就是特异性抗体(一抗)和硝酸纤维素滤膜(NC膜)这2项。酶标抗体(二抗)虽然也比较贵,但现在国内各公司出售的产品(一般是进口分装的)质量都非常高,通常可以稀释数千至数万倍,所以实际上的费用并不是很大。如...  (本文共2页) 阅读全文>>

《细胞与分子免疫学杂志》1999年04期
细胞与分子免疫学杂志

三株肝癌单克隆抗体的Western免疫印迹实验

A10、E5和F11是3株抗人肝细胞癌的单克隆抗体(mAb)。经ABC免疫组化染色法证实,这些mAb针对的抗原在8例肝癌组织中呈高表达,A10、E5和F11分别为6/8,5/8和6/8;而在肝炎中呈低表达,分别为2/11、0/11和1/11[1]。故这几株mAb所针对的相应抗原可能是肝癌相关抗原。作为筛选肝癌细胞表达文库的候选抗体,通过Western免疫印迹反应可了解其相应抗原的一些性质及确定mAb对变性抗原的识别能力。1 材料和方法1-1 细胞株和mAb 肝癌细胞株SMMC7721与HHCC,引自中国科学院上海细胞所,本室保存。抗肝癌mAbA10、E5和F11,为制备的小鼠腹水经快速蛋白液相色谱系统(FPLC)纯化后获得,以SDSPAGE及薄层扫描仪扫描验证,纯度∧95%。1-2 肝癌细胞的裂解 肝癌细胞长满单层后,加入单去污剂裂解缓冲液[2],置冰浴中裂解30min。将裂解液转移至微量离心管中,于12000g4℃离心5m...  (本文共2页) 阅读全文>>

华中农业大学
华中农业大学

鲤春病毒血症病毒G蛋白单抗和多抗的制备及特性鉴定

鲤春病毒血症(Spring viremia of carp, SVC)是一种急性、出血性传染病,主要感染鲤科鱼类,在春季大规模爆发时,患病的幼鱼死亡率达到30%-70%,国际动物卫生组织的《水生生物法典》将其列为必须申报的疫病之一。该病最早在欧洲爆发并引起严重的经济损失。目前,在中东、美国、巴西、加拿大以及中国均有检测到鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus, S VC V)的报道。本实验利用PCR方法扩增鲤春病毒血症病毒糖蛋白G的部分基因序列,即全基因组序列上第3094位到4170位的碱基,将扩增产物克隆至表达载体pGEX-KG中,构建重组质粒SVCV-g-KG。将重组质粒转化感受态细胞BL21,经IPTG诱导后,表达了与预期大小相符的约66KDa的融合蛋白,可溶性分析表明该蛋白主要表达在包涵体中。初步纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,4次免疫后,将小鼠脾脏细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇的作用下融...  (本文共57页) 本文目录 | 阅读全文>>

《国外医学.输血及血液学分册》2005年03期
国外医学.输血及血液学分册

泰国北方献血者丙肝感染的风险因素

背景泰国北方献血者中丙型肝炎病毒(HCV)感染的流 行病学,病毒学和风险因素还未得到广泛的调查。研究设计与 方法作者对HCV检测阳性并为重组免疫印迹实验或者核酸 实验所确认的供者进行了前瞻性个例匹配一对照研究。l名感染 丙肝供者匹配4名性别相同、年龄士五岁、在该HCV阳性供者 献血后15天内同一地点献血的未感染供者。对于已婚的供血 者,让其带配偶来进行HCV测试。结果在1“组匹配者中, 有静脉药瘾史(I DU)者有58名HCV感染(35.5%)供者,2例 HCV阴性供者,为HCV感染强相关因素(相对危险性「OR口, 工。7.6;95%的置信区间...  (本文共1页) 阅读全文>>