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一种快速大量提取禾谷类作物幼苗期总RNA的方法

提取不同组织的总RNA是分子生物学操作中常用的技术,获得高质量和足够数量的RNA是RT-PCR、Northern杂交等研究的基础[1,2]。传统提取禾谷类作物玉米、小麦和水稻RNA的方法很多,如热酚法等[3,4]。热酚法是一种简单经济的提取方法,但对于一些多糖和次生代谢物质含量多的组织利用该方法获得的RNA质量不高[5,6]。本实验采用改良的热酚法提取禾谷类作物不同组织中的总RNA,优化了提取步骤,改良了提取方法,使获得的RNA质量更好。在RNA提取中获得足够多的样品也非常重要。笔者采用在实验室中用培养液培养获得的植物幼苗,仅需要15 d就能获得足够的试验样品,提取的RNA数量和质量完全可以满足后续分子操作的需要。1材料与方法1.1材料及预处理试验材料为玉米、小麦和水稻。取以上3种作物的籽粒,用70%乙醇表面灭菌5 min后放到铺有湿润滤纸的培养皿中发芽(温度20~25℃,湿度75%),待幼苗长出3~5条根后将幼苗置于盛有MS培...  (本文共4页) 阅读全文>>

《安徽农学通报》2007年07期
安徽农学通报

核果类果树总RNA的快速提取方法

提取纯度高、完整性好的总RNA是开展cDNA文库构建、RT-PCR、Northern杂交等分子生物学研究的基础。与其它木本植物一样,核果类果树组织内富含多酚、蛋白质、多糖等干扰物质,这些物质不仅影响RNA的提取效率,而且严重干扰后续的逆转录反应和PCR扩增[1]。因此,能否有效地去除这些物质和抑制RNA酶活性,是RNA提取成功与否的关键。真核生物总RNA的提取已有许多较为成熟的方法,如热酚法、CTAB法、异硫氰酸胍法和Trizol法等[2]。目前,专门针对核果类果树总RNA提取的有效方法报道较少,这在很大程度上制约了相关研究的深入开展。本研究对SDS法进行了改良,并采用2种改良方法分别提取核果类果树的总RNA,均取得很好的效果。现将研究结果报道如下。1材料与方法1·1材料1·1·1试验材料采集核果类果树(桃、李、杏、扁桃)当年生或1年生的枝条、叶片,地点在新疆轮台国家资源圃。1·1·2主要试剂琼脂糖为西班牙分装产品,DEPC为B...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国组织工程研究与临床康复》2007年19期
中国组织工程研究与临床康复

RNA干预法特异性抑制核激活因子受体配体诱导破骨细胞的形成

0引言多种骨吸收性疾病,包括骨质疏松,牙周疾病,炎症性骨病,骨转移癌等等,都是破骨细胞功能增强,破骨活动强于成骨活动而导致的。成骨细胞/骨髓基质细胞表面的核激活因子受体配体基因(receptor activator of NF-κBLigand,RANKL),又称骨保护素配体/破骨细胞分化因子,是破骨细胞分化和发挥功能的关键基因[1-10]。核激活因子受体配体与破骨细胞表面的核激活因子受体(receptor activator ofNF-κB,RANK)结合后,刺激破骨细胞前体细胞向成熟破骨细胞分化,也刺激了成熟破骨细胞发挥骨吸收功能[11-18]。已有文献报道,在大鼠模型中使用核激活因子受体配体的天然假性受体骨保护素阻断核激活因子受体配体与核激活因子受体结合可以阻止绝经后的骨质疏松以及癌症转移而导致的骨流失[18-26]。RNA干预(RNA interference)属于转录后基因沉寂,它可以高效、高特异性的降解细胞内同源的m...  (本文共4页) 阅读全文>>

《黑龙江农业科学》2007年05期
黑龙江农业科学

甘蓝型油菜籽粒RNA提取方法的探讨

植物细胞壁较厚且成分复杂,细胞内富含色素、单宁、多酚等次生代谢产物以及蛋白质、多糖等生物大分子,这些物质不但影响RNA得率,而且干扰之后的逆转录,酶切实验操作[1]。甘蓝型油菜种子(特别是成熟的种子)中蛋白质等含量高,而且RNA含量低[2],而且由于甘蓝型油菜为多倍体植物,在进化过程中有相对于拟南芥的三倍化现象,很多基因在甘蓝型油菜中为多基因家族,一般有6个左右的成员[3]。因此提取纯度高、代表性强、完整性好的籽粒RNA是进行种皮发育相关基因克隆、表达分析和功能验证的前提[4]。由于甘蓝型油菜籽粒中富含油菜种子属脂肪质种子,含有大量的脂质、蛋白质、多糖、矿物质、维生素、色素、植物固醇、酶类及多酚和植酸等,它们容易与RNA共沉淀,对总RNA的完整性、产率和质量均有影响[5]。虽然目前有很多种提取植物RNA的方法,这些方法的主要目的在于抑制RNA提取过程RNase的活性,清除蛋白、多糖、多酚等杂质污染。但由于成熟的甘蓝型油菜的籽粒中...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国自然医学杂志》2007年04期
中国自然医学杂志

深圳地区丙型肝炎抗体阳性与病毒RNA水平的关联分析

丙型肝炎病毒(HCV)感染呈世界性分布,据估计现全球HCV感染者达1.3亿。HCV感染人体后极易慢性化,且与肝硬化肝癌关系密切,对人类健康危害甚大。丙型肝炎抗体阳性是丙型肝炎的重要实验室诊断依据,HCV RNA病毒水平是检测干扰素疗效的有效手段。丙型肝炎抗体阳性,其病毒RNA水平不一定高或病毒NRA检测结果为阴性。本研究以深圳地区丙型肝炎抗体阳性者为研究对象,探讨其病毒RNA水平的多样性,并与国内外相关报道结果进行比对。1材料和方法1.1丙肝病毒抗体(抗HCV)阳性血清共89份,其中78份为深圳市东湖医院肝病研究所病人血清,11份为深圳市血液中心无偿献血者血清。年龄最小12岁,最大73岁;男性63份,女性26份,全部血清分装置-20℃冻存,一次性检测。1.2试剂和仪器所有血清均经抗HCV第3代EIA试剂盒(美国Chiron公司重组HCV抗原包被)检测证实。试剂批号为EXE118。PCR荧光定量检测试剂盒为深圳匹基公司生产,批号为...  (本文共2页) 阅读全文>>

《眼视光学杂志》2007年06期
眼视光学杂志

RNA干扰抑制视网膜母细胞瘤血管内皮生长因子基因的表达

视网膜母细胞瘤(retinoblastomea,RB)是婴幼儿常见的眼内恶性肿瘤。目前对视网膜母细胞瘤的治疗大多采用患眼眼球摘除术、放疗和化疗,尽管有较好的疗效,但同时存在患眼视功能完全丧失、影响面部发育和外观、引发第二肿瘤等不良后果。随着分子生物学及基因工程技术的迅速发展,基因治疗已成为肿瘤治疗研究的热点[1]。血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)具有多种生物学功能,与肿瘤的生长和转移密切相关。研究[2]显示,VEGF在视网膜母细胞瘤中异常高表达,对于确定RB的组织特性和生物学行为具有重要意义。然而,利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制VEGF治疗视网膜母细胞瘤的研究鲜见报道。因此,本研究依据RNA干扰技术[3],以VEGF基因为靶点,用VEGF高表达的视网膜母细胞瘤细胞为研究对象,设计、构建、筛选靶向VEGF基因的小干扰RNA(small...  (本文共4页) 阅读全文>>