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大鼠骨髓间充质干细胞定向诱导为血管内皮样细胞

间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)主要存在于骨髓中,是多潜能干细胞。MSCs具有独特的免疫特性,在异体环境内长期存在,使其临床应用前景更为广泛。目前,MSCs的分离培养、诱导分化及鉴定体系已趋成熟,理论上可分化为所有中胚层来源的细胞,我们参照国内外的文献[1,2],将MSCs从骨髓血中分离出来并加以纯化,以进一步观察体外定向诱导分化血管内皮样细胞的情况,旨在探讨为组织工程血管构建提供种子细胞的可能性。1材料与方法1.1材料1.1.1动物。健康SD大鼠,雄性,清洁级,体重180~250g(本院实验动物中心提供)。1.1.2试剂。培养液:DMEM培养基(GIBCO公司),胎牛血清(杭州四季青公司);血管内皮细胞生长因子(VEGF,PeproTech公司);兔抗人八因子相关抗原多克隆抗体(北京中山生物技术有限公司);PV-9000试剂盒(北京中山生物技术有限公司)。1.1.3仪器和设备。CO2培养箱(F...  (本文共3页) 阅读全文>>

辽宁中医药大学
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独参汤联合骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗死大鼠的相关研究

第一部分:大鼠骨髓间充质干细胞体外分离、培养及鉴定背景:干细胞是一门新兴的技术,其在体外具有自我更新及多向分化的潜能,采用细胞移植的方法干细胞可以用于治疗多种难治性疾病。骨髓间充质干细胞是目前研究最多的干细胞,但它在骨髓中的含量极低,约每100,000个单核细胞中仅含有2-5个,这使科学研究受到极大限制,要想为实验研究提供所需数量及纯度的骨髓间充质干细胞,就需要对其进行有效的体外扩增。因此,使用有效的分离、纯化、培养的方法尤显重要。目的:目前对骨髓间充质干细胞分离、纯化、扩增比较常用的方法有以下几种:贴壁培养法、密度梯度离心法、流式细胞仪分选法、免疫磁珠分离法、特制培养板筛选法和渗透压筛选法,且各有其优缺点。依据各方法之特点,结合研究需要,通过实验探索并验证行之有效的体外细胞分离、纯化、培养的方法。方法:采用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合的方法对骨髓间充质干细胞进行体外培养。1.每次取Wistar雄性大鼠1只,断颈处死,浸于体...  (本文共94页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
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骨髓间充质干细胞构建小口径组织工程化血管的实验研究

第一部分 成人骨髓间充质干细胞的分离和鉴定目的 本实验拟通过体外细胞培养的方法,将间充质干细胞自骨髓血中分离出来,并加以纯化、鉴定,进一步在体外的培养条件下研究其增殖及生长的特性,从而探讨为组织工程化血管研究提供种子细胞的可能性。方法 收集成人骨髓血,采用密度梯度离心和贴壁生长的方式,提取单个核细胞进行体外培养;收集第2~3代(P_2~P_3)细胞行流式细胞仪检测细胞抗原表达(CD34、CD45、CD11a,CD14、KDR、CD105、HLADR);采用细胞计数的方法,绘制原代培养和传代培养细胞的生长曲线。结果 通过密度梯度离心和贴壁生长的方法,可以获取具有一定形态特点、贴壁生长、增殖活跃的骨髓间充质干细胞;该细胞表达KDR、CD105,但不表达CD34、CD45、CD11a,CD14、HLADR等;原代培养曲线显示,第2~6d为生长潜伏期,第7~8d开始,贴壁细胞已形成大小不一的多个细胞克隆,第8~10d进入对数增长期;第1...  (本文共108页) 本文目录 | 阅读全文>>

广州中医药大学
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补肾益精法对骨髓间充质干细胞增殖的影响及机理研究

研究目的在“干细胞具先天之精的属性,是先天之精在细胞层次的存在形式”、“精血同源”等理论的指导下,本研究运用补精生血法、补精滋阴法、补精壮阳法、补气化髓生血法来探讨补肾益精法对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响。把中医药与干细胞研究相结合,为体外培养、扩增MSCs提供新的思路,为中医药干预临床干细胞移植治疗疾病提供有力的实验依据。在药物筛选的基础上,观察对MSCs增殖确有促进作用的中药单体、有效成分及含药血清对细胞因子表达的影响,分析它们可能的作用途径,为阐释其促进MSCs增殖的作用机理提供实验依据,将补肾益精法对MSCs增殖影响的研究深入到分子水平,也为“精”的干细胞学说提供了更充分的科学依据。研究方法1.运用全骨髓贴壁法分离、培养MSCs;通过形态学、流式细胞仪检测表面标志物鉴定MSCs。2.运用MTT法筛选对MSCs增殖具有促进作用的益精中药的单体、有效成分及含药血清,并研究其最佳促增殖时间、浓度。3.用黄芪多糖(AP...  (本文共176页) 本文目录 | 阅读全文>>

南方医科大学
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受体骨髓间充质干细胞输注在大鼠原位肝移植中的作用

肝移植是治疗终末期肝病的最佳选择,但术后排斥反应仍是影响患者生存的主要障碍。其中急性排斥反应则较为常见,约70%的肝移植患者有不同程度的急性排斥,是肝移植术后早期肝功能障碍的主要原因。急性排斥反应又称细胞性排斥,是由受体T淋巴细胞被供肝树突状细胞的异源性抗原激活后,受体T淋巴细胞活化聚集于供肝树突状细胞周围,通过分泌细胞因子引起的胆管上皮及静脉内皮细胞损伤。其免疫学表现为Th1细胞产生白介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)等细胞因子分泌增加,病理学表现为汇管区混合细胞浸润,小胆管及静脉内皮坏死、脱落等,以术后7-14天最为明显。CD4+Th细胞可分化为Th1和Th2细胞亚群,其中Th1细胞因子通过促进同种抗原特异的细胞毒T细胞和迟发型过敏反应启动排斥反应,Th2细胞因子通过刺激B细胞增殖并产生特异性抗体在慢性移植物排斥反应中发挥作用。Th1/Th2两类细胞所分泌的细胞因子变化是免疫反应的指标,Th1细胞因子高表达可以诱...  (本文共116页) 本文目录 | 阅读全文>>

南方医科大学
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Galectin-3诱导大鼠骨髓间充质干细胞肝样分化的作用及机制研究

第一章 Galectin-3在诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化中的作用目的通过单独应用Galectin-3、肝细胞生长因子(HGF)以及联合Galectin-3、HGF对BMSCs进行诱导培养,以研究Galectin-3对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向肝样细胞诱导分化的作用。方法对大鼠股骨骨髓间充质干细胞进行提取,分离,传代培养及鉴定。取第4代细胞进行诱导培养,分组:A组:SD大鼠BMSCs;B组:SD大鼠BMSCs+0.5μg/ml Gal-3;CC组:SD大鼠BMSCs+20ng/mlHGF;D组:SD大鼠BMSCs+0.5μg/ml Gal-3+20ng/ml HGF;E组:大鼠肝细胞。分别在诱导后7、14、21、28d进行细胞形态学观察、糖原染色观察,并行实时定量PCR以及Western blot检测,鉴定其分化情况。结果大鼠股骨骨髓分离出的细胞符合骨髓间充质干细胞特性。诱导后,B、C、D组BMSCs形态逐渐...  (本文共78页) 本文目录 | 阅读全文>>