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抗阿尔茨海默病重组蛋白疫苗的克隆、表达和免疫学鉴定

阿尔茨海默病(A lzheimer’s d isease,AD)是一种神经退行性疾病[1],缺乏行之有效的治疗方法[2]。神经病理研究表明,β-淀粉样蛋白42肽(Aβ1-42)的形成和聚集以及以其为核心形成的老年斑是AD发病的关键[2]。用人Aβ1-42肽免疫转基因小鼠模型引发的针对Aβ的自身免疫反应能有效减轻脑内Aβ的沉积,阻止老年斑的形成,明显改善记忆、认知和行为能力[3]。其临床研究也显示出良好的疗效,但有受试者出现中枢神经炎症状。Leverone等[4]证明N端15肽(Aβ1-15,DAEFRHDSGYEVHHQ)是Aβ1-42的B细胞表位,以其作为免疫原能够避免全肽免疫导致的不良反应,但是其免疫原性很弱,不利于诱导老年患者产生保护性免疫反应。提高B细胞表位的免疫原性是AD疫苗设计的关键[5]。大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(L-asparaginaseⅡ,AnsB)是由4个相同亚基组成的蛋白酶。我们曾用来源于破伤风毒素的辅助...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国新药杂志》2015年09期
中国新药杂志

氢氧化铝吸附重组肺炎蛋白疫苗解吸附方法

4组分重组肺炎蛋白疫苗(PBPV)主要成分为3种不同菌株来源的肺炎球菌表面蛋白A(即Psp A-5668,Psp A-3296和Psp A-RX-1 3种蛋白)[1]和肺炎链球菌溶菌素突变体(Ply LD),所用佐剂为氢氧化铝(AH)。蛋白与佐剂之间的静电引力、基团交换、范德华力等作用较强,结合紧密。实际研究中,需对吸附原液、半成品及疫苗制剂中抗原检测、分析,但佐剂的存在给直接检测带来了一定难度。PBPV作为一种新型疫苗,尚未建立成熟的分析方法。其他疫苗采用的普遍方法是,先将抗原从佐剂上解吸附再进行后续检测。如Katz[2]用1.2 mo L·L-1磷酸钾洗脱氢氧化铝佐剂吸附的猪细小病毒抗原。Egan等[3]认为乙肝表面抗原的氢氧化铝吸附原液加入氟化物或磷酸盐后,后者与抗原表面磷酸基团竞争铝佐剂表面羟基,使抗原解吸附。杜琳等[4]用碱溶含铝佐剂的疫苗,再用含金属螯合剂的酸性试剂中和的方法使抗原和铝佐剂解吸附。另有报道柠檬酸、依替...  (本文共5页) 阅读全文>>

《国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册》2001年05期
国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册

孕前接种CMV糖蛋白疫苗对先天性CMV感染豚鼠模型的保护作用

作者采用先天性巨细胞病毒 ( CMV)感染的豚鼠模型 ,评估了孕前免疫接种豚鼠CMV ( gp CMV )糖蛋白疫苗对妊娠晚期gp CMV攻击的防御作用。  将 gp CMV血清抗体阴性的雌豚鼠分为实验组 ( 2 2只 )和对照组 ( 2 0只 )。糖蛋白疫苗从感染 gp CMV的原代胎鼠 ( FGP)细胞单层中提取并经凝集素柱纯化制备。对照疫苗从未感染的 FGP细胞单层以相同方式获得。两组豚鼠分别于双侧后足垫接种加完全弗氏佐剂的 50 μg gp CMV糖蛋白疫苗和对照疫苗。免疫后 1和 4个月 ,再分别用加有不完全弗氏佐剂的 50 μg糖蛋白疫苗和对照疫苗背部皮下加强接种。在每次加强接种后两周 ,取动物血清 ,评价疫苗的免疫原性。在第 3次接种...  (本文共2页) 阅读全文>>

《国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册》2001年05期
国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册

imiquimod单独或与糖蛋白疫苗联合使用减少复发性HSV病

本文评价了免疫调节子 imiquimod(咪唑喹啉类似物 )对减少和延缓原发 2型单纯疱疹病毒 ( HSV- 2 )生殖道感染豚鼠模型复发的效果。  将 0 .1 ml HSV- 2 ( 5× 1 0 5pfu)接种于 350~ 450 g雌性豚鼠阴道内以建立原发生殖道感染模型 ,待豚鼠的原发疾病于第 1 5天恢复后将其随机分成三组 (每组 1 5只 ) : 组为盐水佐剂 + PBS疫苗 ; 组为 imiquimod佐剂+ PBS疫苗 ; 组为 imiquimod佐剂 + HSV糖蛋白疫苗。在 HSV- 2生殖道接种后 1 6天和 37天足垫接种 PBS或糖蛋白疫苗 ( 2 5mg/次 ) ,从第 1 6至 37天每天于远离疫苗接种部位的肩部皮下注射盐水或 3% imiquimod盐溶液佐剂 0 .5mg/kg。从第 1 6至...  (本文共1页) 阅读全文>>

南京大学
南京大学

宫颈癌HPV蛋白疫苗和肿瘤SP细胞的研究

本论文主要围绕宫颈癌蛋白疫苗和肿瘤SP细胞方面开展研究。宫颈癌(cervical cancer,CC)是全世界女性易患的第二大癌症。研究表明人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染是产生宫颈癌的最主要因素。E6和E7是HPV相关的两类重要的癌蛋白,对于病毒的进入和细胞转化非常重要,在多数HPV相关的肿瘤中均有表达。目前重组载体疫苗、核酸疫苗、多肽疫苗及蛋白疫苗等均以E6和/或E7作为靶标。由于蛋白质疫苗既不受人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)限制性,又避免了病毒载体或DNA疫苗潜在的安全隐患,是目前公认最安全、有效的疫苗。在宫颈癌蛋白疫苗研究中,我们采用了小鼠宫颈癌模型——TC-1细胞模型,探讨了 HPV16 E6、E7相关蛋白诱导肿瘤细胞特异性免疫反应,抑制TC-1细胞在体内的生长情况,具备潜在的临床应用价值。从人宫颈癌细胞中克隆、构建HPV16E6、E7原核表...  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

hCGβ-C3d3融合蛋白疫苗的体液免疫效应及其抗生育潜能

目的:构建带有 6 个组氨酸(6His)纯化标签的 hCGβ-C3d3 融合蛋白和 hCGβ蛋白的分泌型真核表达质粒,体外稳定表达与纯化具有生物学活性的 hCGβ-C3d3融合蛋白和 hCGβ 蛋白。通过融合分子佐剂 C3d3,增强 hCGβ 蛋白抗原在不同品系小鼠的免疫原性,实现 hCGβ 蛋白疫苗的 Th2 型体液免疫优势效应,并增强hCGβ-C3d3 融合蛋白疫苗抗血清中和 hCG 生物学活性的能力。方法:以带有信号肽的 hCGβ 为模板,经 PCR 反应在 hCGβ 的氨基端加上 6个组氨酸(6His)纯化标签,将其构建入高效真核表达载体 phCMV1 即得phCMV1-6His-hCGβ。将 C3d3 与 hCGβ 进行基因融合,并构建入 phCMV1 即得phCMV1-6His-hCGβ-C3d3 。 脂 质 体 法 介 导 phCMV1-6His-hCGβ-C3d3 、phCMV1-6His-hCGβ、pcDNA3...  (本文共87页) 本文目录 | 阅读全文>>