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抗肝吸虫成虫单抗的制备及其在感染豚鼠血、尿循环抗原检测中的初步应用

本研究以肝吸虫成虫水溶性抗原免疫 BALB/c小鼠 ,制备杂交瘤细胞 ,建立了 4株稳定分泌、敏感的、特异的抗肝吸虫成虫单克隆抗体 (单抗 )的杂交瘤细胞株 ,对其单抗进行了初步鉴定 ,并用其中 3种单抗以 ELISA双抗夹心法分别检测了肝吸虫感染豚鼠血、尿中的循环抗原 (CAg) ,并进行比较。1 材料和方法1 .1 分泌抗肝吸虫成虫单抗的杂交瘤细胞系的建立取 1 .0 2 g/L的肝吸虫成虫水溶性抗原 0 .1 ml与等量福氏完全佐剂混合 ,经腹腔注射免疫 8周龄BALB/C雌性小鼠。2周后以同浓度肝吸虫成虫水溶性抗原 0 .1 ml与等量福氏不全佐剂混合 ,腹腔注射再次免疫小鼠。融合前 3天再加 0 .2 ml同种抗原腹腔注射加强免疫。3天后取小鼠脾细胞与 SP2 /0细胞在 5 0 %聚乙二醇作用下融合。1 .2 抗肝吸虫成虫单抗的大量制备取成年雌性 BALB/c小鼠 ,腹腔内注射液体石蜡 0 .5 ml,1周后每只小鼠...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》1990年10期
中国寄生虫学与寄生虫病杂志

检测日本血吸虫感染兔尿中循环抗原的研究

检测血中的日本血吸虫循环抗原(CSA),用于血吸虫病诊断和疗效考核的研究,国内已有不少报道。而测定尿液中的CSA可不抽血,无损伤性,受到不少学者的重视。自建立克隆技术后,国外曾运用尿液中趋阴极循环抗原(CCA)检测对曼氏血吸虫流行区进行流行病学研究[1],国内陆萍等[2]用荷兰莱登大学提供的两株曼氏血吸虫杂交瘤分泌的特异单抗为探针,检测日本血吸虫病患者尿液中的CCA,表明有属的特异性,但检出率较低。为此,我们设想,用感染日本血吸虫的兔尿中的抗原免疫小鼠,制备抗兔尿液中血吸虫循环抗原的特异单抗,并以该单抗为探针检测感染日本血吸虫尾蚴兔尿中的循环抗原,以期获得针对性更直接更特异的结果。*本研究为国家自然科学基金资助课题No.39570644和上海市科委自然科学基金资助课题No.954119010材料与方法1单克隆抗体制备按常规方法进行细胞融合,筛选阳性克隆,几次亚克隆后,将阳性克隆扩大培养,诱生腹水。所获阳性单克隆抗体进行特性鉴定。...  (本文共4页) 阅读全文>>

《国外兽医学.畜禽疾病》1996年02期
国外兽医学.畜禽疾病

寄生虫病循环抗原的研究现状与展望

1循环抗原检测在诊断上的价值 循环抗原检测在临床诊断上具有重要的价值[lJ.在旋毛虫病和囊虫病等已查明,初诊患者同步进行循环抗原和抗体两项检测,结果可以相互补充,减少漏诊。Rodrigue:等(2 956)[,〕用微量ELISA方法在小鼠感染旋毛虫后6小时到15夭,可测出循环抗原;大部分小鼠在感染12小时内,最迟第5天开始出现循环扰原;而抗体一般在感染后2周才能检出。翟春生等闭对人工感染囊虫病猪系列血清的检测结果表明,循环抗原的检出时机比扰体早一周以上,有利于早期诊断.我们在实际应用中也发现,有的旋毛虫病早期患者抗体检测呈阴性,而循环抗原检测已显示阳性结果。 寄生虫病患者的循环抗原在血液中的浓度通常很低,需要高度敏感的技术来测定。当前,大多数检测方法是直接检测血清的,这实际上是把循环抗原看成一种独立成分。但是,循环抗原作为一种“异物”,机体免疫系统必然要对其作出相应的免疫应答,而产生的抗体又会与循环抗原结合,形成免疫复合物(IC...  (本文共2页) 阅读全文>>

《上海医学》1987年03期
上海医学

日本血吸虫病可溶性虫卵循环抗原的实验研究

日本血吸虫病可溶性虫卵抗原(Schist冬soma jaPonieum soluble egg antigen,简称sEA)和抗体的检测一直是感兴趣的课题,比之相应抗体的测定,循环抗原的检测具有更直接、更有效的临床诊断意义。1.982年Long等‘”肯定了SEA中的主要血清学抗原为糖蛋白组分,而其中特异性和敏感性较高的是疏水性糖蛋白部分,他们同时分离、纯化了这些糖蛋白组分,并用双抗体固相酶联免疫吸附法(ELISA)测定了血吸虫病患者血清中的SEA抗体,获得了较满意的结果。1985年,Tracy等【,,进行了同样的试验,其结果符合率达97 .5帕,抗血清滴度1:1,280,且具有极高的特异性。1983年,钱字平等【3,用双抗体ELIsA法测定了不同感染度家兔体内的sEA含量,能较好地反映出动物体内活虫的数量。我们于1985年开始作SEA研究,包括SEA糖蛋白和疏水性糖蛋白的分离、纯化,相应抗血清的制备;相应抗血清中IgG的纯化及检...  (本文共4页) 阅读全文>>

《免疫学杂志》1988年01期
免疫学杂志

ABC-抗CSA系统作为检测日本血吸虫病循环抗原探针建立和初步应用

检出日本血吸虫循环抗原是宿主体内有活虫寄生的标志,在血吸虫病诊断和疗效考核上均有重要价值。自Okabe~¨1958首先发现日本血吸虫病人的尿液中存在循环抗原后,Berggr。en(。’等也从感染小鼠血清中检出循环抗原。近十多年来,国内外许多学者对循环抗原进行了研究,但仍在实验探索阶段,以期寻找更敏感、特异的检测方法【。’。作者等曾进一步证明了在日本血吸虫宿主体内存在多种成份的抗原谱【.’除了主要来自成虫肠上皮细胞的虫源性循环多糖蛋白抗原外,并发现在体外培养的日本血吸虫卵内成熟毛蚴分泌代谢具有抗原性产物。针对虫源性和虫卵源性的循环抗原成份,制备了高效、特异的多克隆抗体(PcAb)免疫血清【5’。 在借鉴高度特异和敏感的DNA探针技术的基础上,作者利用新近发展起来的生物素一亲和素系统(BAS)的多级放大作用,以吸附在硝酸纤维素纸(Nitrocellulose fi一1‘ter,‘NCF)上的循环抗原(CSA.)作靶子,用生物素化抗多...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》1988年S1期
中国寄生虫学与寄生虫病杂志

单克隆抗体ELISA检测循环抗原及免疫复合物有关技术的研究

过夜与37℃温育Zh的检测效果相似。四、普通血清李灭活血清及滤纸血的ELISA结果均无明显差异.五、血清及酶结合物的孵育时间,无论检测CA‘及cIC均分别似以1.5h与Zh较为适宜,必要时亦可缩短至lh与lh.检测CA.采用ELISA一步法获得满意的结果,而检测CIC测心须粱用常规二步协. 通过McAb应用于ELISA检测人工感染弓形虫家兔血清循环抗原(CA.)及免疫复合物(clc)的实验研究,探讨McAb一ELIsA试验的有关技术因素,选择稳定而可行的McA为~BLISA实验条件。 人工感染弓形兔10只,康健兔5只,同步采血分离血清或制备滤纸血。采用双脉Ab一ELIsA夹心法检测CA‘单抗二抗ELISA法检测CtC.实验样品一式里孔,重复2次。 实验结果表明:一、用McAb包被液致敏反应板的效果,pHg .6碳酸盐...  (本文共1页) 阅读全文>>