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PDE5基因siRNA对人阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP的影响

一氧化氮(nitric oxide,NO)-环单磷酸核苷酸(cyclic nucleotide monophosphates,cNMP)信号转导通路在阴茎勃起过程中起关键作用,其成分如环磷酸鸟苷(cGMP)在阴茎海绵体平滑肌细胞内的变化直接影响勃起的质量。而5型磷酸二酯酶(phos-phodiesterase type 5,PDE5)是阴茎海绵体平滑肌细胞内第二信使cGMP的特异性水解酶,抑制PDE5表达和功能就可能增加cGMP的浓度,使阴茎勃起功能增强,并有望成为阴茎勃起功能障碍(ED)的治疗手段。为此,笔者利用化学合成方法合成特异性地针对PDE5基因的小干扰RNA(siRNA),将其转染至细胞内,观察siRNA对人阴茎海绵体平滑肌细胞内cGMP的影响。1材料与方法1.1材料1.1.1试剂DMEM培养液(高糖型)购自Gibco公司;沉默siRNA、siRNA转染试剂siPORTTMLipid购自美国Ambion公司;Opti-...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中华男科学杂志》2009年08期
中华男科学杂志

靶向人PDE5A3基因的shRNA对人阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP的影响

利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制5型磷酸二酯酶(PDE5)基因的表达用于阴茎勃起功能障碍(ED)的治疗具有高特异性、靶向作用的特点,但细胞内治疗性小干扰RNA(siRNA)表达水平低并迅速降解是RNAi治疗的一大障碍。为促进shRNA高效稳定的表达,探讨利用RNAi技术治疗ED的可行性,笔者利用构建的同时携带3条针对PDE5A3基因靶点的重组腺病毒载体rAd5-shR-NA-PDE5A3,将其转染人阴茎海绵体平滑肌细胞后不同时间点检测细胞内cGMP水平,现报告如下。1材料与方法1.1主要材料DMEM/F12低糖培养液干粉(Gibco公司,美国),Characterized FBS优级胎牛血清(Hy-clon公司,美国),0.125%胰蛋白酶+0.01%EDTA(武汉博士德公司),50mmol/L的醋酸缓冲液(pH4.75,由国产分析纯配制),125I-cGMP RIA试剂盒(上海中医药大学核医...  (本文共4页) 阅读全文>>

《重庆医学》2009年07期
重庆医学

PDE5基因多态性对伐地那非治疗男性勃起功能障碍疗效的影响

勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED)是男性,尤其是老年男性的常见病和多发病,严重影响了患者的自尊和生活质量。磷酸二酯酶5(specificphos phodi esterase 5,PDE5)抑制剂的问世,成为ED治疗史上一次突破性的革命。已在超过30个国家中用于治疗ED,其有效性和安全性已在欧美国家得到证实。它能有效地改善患者的心理以及晨勃现象,使患者恢复生活的自信。但在临床应用过程中发现,部分患者应用此药物并不能达到满意的疗效,且在不同的人群中疗效存在明显差异[1]。为探讨这种疗效差异是否和PDE5基因多态性有关,本院从2005年6月至2008年1月应用伐地那非治疗ED患者270例,并成功对其进行基因分型,现将结果报道如下。1临床资料1.1一般资料270例患者均为本院男科门诊以持续性勃起功能障碍或勃起不坚就诊的患者;均有固定性伴侣及规律的性生活;有晨勃或虽晨勃减少但夜间阴茎勃起(NPT)基本正常,勃...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中华泌尿外科杂志》2002年11期
中华泌尿外科杂志

反义寡脱氧核苷酸对人阴茎海绵体平滑肌细胞PDE5的抑制作用

PDE5 (5型磷酸二酯酶 )是阴茎海绵体平滑肌细胞内第二信使cGMP的特异性水解酶 ,在阴茎勃起过程中起关键作用。我们将PDE5基因反义寡脱氧核苷酸 (含第 1外显子序列 )与脂质体转染试剂DOTAP共同转染人阴茎海绵体原代细胞 ,观察其对人PDE5的抑制作用。报告如下。材料与方法一、材料与试剂1.材料 :PDE5基因反义寡脱氧核苷酸序列及其正义序列参照文献设计[1,2 ] ,由上海博亚生物技术有限公司合成。2 .主要试剂 :PDE5特异性兔抗人多克隆IgG和LumiGLO化学发光试剂盒购自美国KPL公司。二、方法1.细胞培养 :人阴茎海绵体组织剪成 1mm3小块 ,在含双抗的PBS液中漂洗 2次 ;换入 0 .2 %胶原酶液 ,37℃消化 12~ 18h。离心 ,沉淀中加入新鲜DMEM液 (pH 7.2 ) ,按每瓶 2 5~ 30× 10 4 活细胞接种在培养瓶内 (共 6瓶 )。 10~ 14d后 ,细胞长成单层和多层交...  (本文共3页) 阅读全文>>

《医学研究杂志》2016年03期
医学研究杂志

PDE5基因沉默对肾透明细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

近年来研究发现,肾癌特异性抑癌基因VHL突变失活和细胞质内β-连环蛋白(β-catenin)积聚增多是肾透明细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)共同的遗传学和组织学表现[1,2]。Wnt/β-catenin经典信号通路通过抑制细胞内信号分子β-catenin的正常降解,从而使得部分过剩β-catenin进入细胞核与TCF/LEF转录因子家族一起作用促进了特定癌基因的表达,进而形成肿瘤[3]。研究发现磷酸二酯酶5(phosphodiesterase type 5,PDE5)抑制剂对β-catenin有削减作用[4]。笔者通过RNA干扰技术沉默PDE5基因在肾透明细胞癌细胞株786-O中的表达,检测其增殖能力和凋亡水平的变化,探讨PDE5基因在肾透明细胞癌形成和发展中所发挥的作用。材料与方法1.细胞培养:肾透明细胞癌细胞株786-O(美国ATCC公司)用含5%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的RPMI1640培养基...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中华男科学杂志》2005年08期
中华男科学杂志

PDE5抑制剂与α受体阻滞剂合用的指导原则

5型磷酸二酯酶(phosphod iesterase-5,PDE5)抑制剂是勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED)的一线治疗药物,目前有3种PDE5抑制剂可供选择:西地那非、伐地那非和他达拉非。由于ED患者自身病理情况的复杂性,可能同时合并其他疾病,例如高血压、冠心病、糖尿病、抑郁症、良性前列腺增生(be-nign prostatic hyperplasia,BPH)等,因此PDE5抑制剂与其他药物合用的安全性问题越来越引起医学界的关注。α受体阻滞剂正是关注的焦点之一,因为PDE5抑制剂的系统性轻微扩血管作用,它与α受体阻滞剂合用有可能导致有临床意义的低血压,而且BPH和ED的发病率均随着年龄的增加而升高,二者在临床上共存的情况并不少见。但在实际应用中,临床医生可能有一些疑虑:PDE5抑制剂与选择性和非选择性α受体阻滞剂的合用是否存在区别、两药合用是绝对禁忌还是相对禁忌、合适的用药间隔是多长、为什么不同P...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国现代医生》2013年29期
中国现代医生

不同剂量PDE5抑制剂治疗男性勃起功能障碍的疗效研究

男性勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED)是男科较常遇到的一类疾病,研究表明其主要由心理、生理因素造成[1]。目前,磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂是治疗本病的主要药物之一,其中以伐地那非最为常用。由于目前伐地那非治疗ED并无统一的剂量使用标准,患者在服药时往往根据经验及效果选择剂量。临床实践发现[2],不合理地使用伐地那非,可能会使头痛、头晕等副反应发生率增加。因此,探讨合理的给药剂量及方法尤为重要。本研究对口服不同剂量伐地那非的疗效及副反应发生情况进行观察,旨在探讨临床用药的合理性与安全性,现报道如下。1资料与方法1.1一般资料本研究共纳入ED患者75例,为我院2012年1~12月间门诊患者。纳入标准[3]:①未服用任何药物的情况下,在4 d内尝试性交4次,有2次以上失败者;②年龄≥25岁。排除标准[4]:①既往有酒精中毒或药物滥用史;②原发性性欲低下;③存在结构功能异常;④既往曾行前列腺手术史;⑤有严重...  (本文共3页) 阅读全文>>