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重组耐高温α-淀粉酶的分离纯化及其性质研究

基因工程菌所产生的重组耐高温α-淀粉酶,通过超滤浓缩、脱盐和聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯化,得到电泳纯的耐高温α-淀粉酶.并测得该酶的分子量为63 KD,等电点pI(室温)为5.5,最适pH为6.0~6.5,稳定pH范围为4~11.5  (本文共5页) 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

耐高温α-淀粉酶基因工程菌的构建及发酵条件的研究

α-淀粉酶能水解淀粉的α-1,4糖苷键,是一种很重要的工业用酶。地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶是其中一种,因为它超强的耐热性和特殊的化学、pH稳定性,其被广泛的用于淀粉生产、酿造、烘焙、纺织、纸张制造以及生物燃料生产等工业生产的高温酶解过程。随着分子生物学的发展,随机突变、定点突变等方法已经被广泛地用于改善耐高温α-淀粉酶的特性,使其更适合工业生产。本文针对前期构建的原核表达基因工程菌E.coliBL21(DE3)-pET22b-amy和真核表达基因工程菌P.pastorisGS115-pPIC9-amy做了进一步的研究,并全面比较两种基因工程菌的酶学特性,筛选出最佳基因工程菌株。对于原核表达基因工程菌E.coliBL21(DE3)-pET22b-amy利用生物技术使耐高温α-淀粉酶基因α-AMY定点突变,得到酶学性质有所改善的突变酶。首先获得地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因片段α-AMY,将其与GeneBank中已有记录的地衣芽...  (本文共94页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川农业大学
四川农业大学

耐高温α-淀粉酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

耐高温α-淀粉酶广泛应用于食品、发酵、制药、纺织、石油开采等工业,已成为应用最广泛的酶制剂品种之一,其产量约占酶制剂市场的25%以上。从自然界中直接分离的野生菌株产酶能力低下,远不能满足工业的需要。因此,如何获得高产耐高温α-淀粉酶的菌株已成为解决淀粉酶制剂工业的关键。尽管通过诱变育种的方式可以提高菌株的产酶能力,但要获得理想的突变菌株,必须进行重复的诱变与筛选,工作量大,正诱变率低,盲目性大,且产酶能力提高有限。随着基因工程技术的发展,通过克隆耐高温a-淀粉酶基因,构建基因工程菌来大幅度提高其产酶能力已成为可能,这不仅可以克服传统育种中存在的诸多问题,而且能有效地改变耐高温α一淀粉酶一些特性,因此用基因工程的方法提高α-淀粉酶的产量及优化酶的特性已成为新的研究热点,具有重要理论研究和实际应用价值。地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)来源的高温α-淀粉酶具有耐高温、高活力、稳定性好等优良特性,已成为生产高...  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>

中南大学
中南大学

耐高温α-淀粉酶菌株的筛选、发酵条件优化及酶基因的克隆

耐高温α-淀粉酶是目前最重要的工业酶制剂之一,约占酶制剂市场25%的比例。耐高温α-淀粉酶能在较高温度下能够有效快速的分解淀粉,被广泛应用于纺织退浆、发酵、制糖等高温条件下生产工业。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是国内生产耐高温α-淀粉酶的代表菌株之一。为了获得纺织工业中所需求的耐高温α-淀粉酶,从枯草堆、农田积肥、下水道等处土样中分离得到一株能向胞外分泌耐高温α-淀粉酶的菌株并对其所产酶的酶学性质进行了研究。通过生理生化及分子生物学鉴定,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),并初步命名为Bacillus subtilis C1。Bacillus subtilis C1在基础培养基中(pH 7,温度45℃)培养24h左右达到生长稳定期,在68h时酶活达到最高,为185.6 u·mL~(-1)。对该菌株分泌的耐高温α-淀粉酶的性质研究表明,此α-淀粉酶最适作用pH值为6,最适温度为70℃...  (本文共76页) 本文目录 | 阅读全文>>

塔里木大学
塔里木大学

产耐高温α-淀粉酶菌株的筛选、发酵条件优化及酶学性质研究

为了满足工业上利用淀粉生产糖过程中所需的耐高温α-淀粉酶,本论文以云南腾冲高温热泉环境下分离到的耐高温菌株为研究材料,对云南大学省微生物研究所菌种库中产淀粉酶的高温菌通过平板初筛、液体复筛,最终得到一株产酶量较高的菌株YIM342.通过形态、生理生化以及分子生物学实验将其鉴定为Anoxybacillus sp. YIM342.为了提高该菌株的产酶量,我们在单因素法确定最佳的碳、氮源的基础上,利用响应面法对所有能影响酶产量的因素进行了优化,并最终获得了最佳产酶条件。最佳条件为:可溶性淀粉11.73g/L,CaCl20.65g/L,发酵时间为37.27h,胰蛋白胨5g/L, MgSO40.5g/L,起始pH值6.5,温度55℃。在此条件下,α-淀粉酶产量得到了很大的提高,达到62.71U/mL,较初始产酶量(19.30U/mL)提高了3.25倍。通过超滤、硫酸铵沉淀以及一步凝胶层析获得了电泳纯的a-淀粉酶,该酶的分子量为68kD,纯...  (本文共79页) 本文目录 | 阅读全文>>

《河北农业科学》2011年02期
河北农业科学

耐高温α-淀粉酶的研究进展

耐高温α-淀粉酶是一种重要的工业用酶制剂。概述了耐高温α-淀...  (本文共4页) 阅读全文>>