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苏云金芽孢杆菌新型杀虫蛋白vip3A基因的鉴定

VIPs(vegetative insecticidal proteins)是已发现的一种新型的J石『f杀虫蛋白,能在一定程度上克服许多害虫对Bt内毒素低敏感或不敏感的弊端。Estruch等Ⅲ认为WIPs不同于Bf的晶体杀虫蛋白,它是一种在对数生长期分泌到细胞外的毒素蛋白,对于Bt内毒素不敏感的某些害虫有极强的杀虫活力,毒效都在ng(纳克)水平上。目前已从蜡状芽孢杆菌(Bc)、Bf中发现了ViplA蛋白约80 kD,Vip2A(a)、Vip2A(b)蛋白约50 l【D,Vip3A(a)、Vip3A(b)、Vip3A(c)蛋白约88kD,其中删(a)和vip3A(b)基因已被克隆[2]。据Estruch等‘’’研究表明,Vip3A在口f和Bc中广泛存在,并且与任何已知抗虫蛋白均无同源性,Vip3A(a)与Vip3A(b)蛋白的同源性却高达98%。Vip3A蛋白质的N端由带正电荷的氨基酸组成,随后是疏水中心,这种结构特征与苏云金芽孢...  (本文共2页) 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白对鳞翅目害虫协同增效机制的研究

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)可以产生多种杀虫蛋白,如营养期的Vip蛋白和芽胞期形成的Cry晶体蛋白。由于Bt杀虫蛋白对鳞翅目、鞘翅目和双翅目等多种害虫具有特异的杀虫效果,因此被广泛用于转基因作物中。然而在转Bt作物的广泛种植过程中,其显著的抗虫效果被靶标昆虫所产生的抗性日益削减。而两种或多种Bt蛋白组合不仅能有效克服或延缓靶标害虫对Bt蛋白抗性的产生,而且能扩大杀虫谱;其中,特定的蛋白组合还能产生协同增效作用,显著提高杀虫活性。在前期研究中发现Cry9Aa和Vip3Aa蛋白组合对水稻二化螟(Chilo suppressalis)具有显著的协同增效杀虫效果。但迄今为止全世界范围内关于Cry和Vip蛋白之间的增效作用机制的研究仍为空白。本研究首先对Cry9Aa和Vip3Aa蛋白对水稻二化螟的协同增效杀虫机制进行了深入的研究,在此基础上,开展了对玉米害虫高效的Bt蛋白组合筛选,主要进展如下:1....  (本文共108页) 本文目录 | 阅读全文>>

河北农业大学
河北农业大学

嗜线虫致病杆菌杀虫蛋白的分离纯化及杀虫蛋白基因克隆

昆虫病原线虫共生菌属于肠杆菌科、革兰氏阴性菌,包含两个属—Xenorhabdus和Photorhabdus,分别与Steinernematidae和Heterorhabditidae科的昆虫病原线虫互惠共生。二者联合可以侵染并快速杀死多种昆虫。通常共生菌依靠线虫将其携带进入寄主昆虫体内并释放到昆虫体腔中,共生菌在昆虫血腔内大量繁殖并产生杀虫毒素,导致寄主昆虫迅速死亡(约48h之内)。同时共生菌产生的抗生素抑制杂菌生长,为线虫生长、发育和繁殖提供理想的环境和合适的营养。昆虫病原线虫—共生菌复合体对昆虫具有的强致病力,共生菌在其中起着关键性作用。已有的研究表明许多共生菌不仅能产生血腔毒素,同时还能产生杀虫谱广、杀虫活性高的胃毒素。因此分离筛选高毒力的共生菌菌株、对其杀虫毒素及其杀虫基因进行深入研究,有助于发掘新的杀虫蛋白及杀虫基因,有可能为改变当前害虫防治和转基因抗虫植物的培育中杀虫蛋白或杀虫基因匮乏的局面开辟一条新的途径。本研究利...  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
四川大学

粘质沙雷氏菌杀虫蛋白的分离纯化及其基因的克隆与表达研究

蝗虫是一种主要的草地害虫,对我国农牧业的造成了极大的损失,我国目前控制蝗虫危害的手段主要是采用化学药剂来降低虫口密度,但是过度的使用化学农药对环境造成了相当的危害,迫切需要采用一些生物防治手段来作为替代。因此,蝗虫的生物防治技术应运而生,并日益受到重视。本实验从蝗虫自然病死虫尸中分离纯化得到一较高毒性的病原菌HR-3,通过形态学观察、生理生化特征分析和分子鉴定将其鉴定为为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens),为细菌杀虫剂的研究开发提供了新的菌株来源。微生物杀虫剂由于所使用的病原微生物不同,其杀虫原理和机制有所不同,粘质沙雷氏菌HR-3的杀虫活性实验表明,其杀虫活性物质是存在于细菌上清液中的杀虫蛋白。将细菌发酵上清液进行Milipore超滤,除去40kDa以下和80kDa以上的蛋白,获得40-80kDa的杀虫粗蛋白。进一步经过硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析,Sepha...  (本文共129页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
扬州大学

Bt棉蕾铃大小及形成对杀虫蛋白表达量影响及其氮代谢生理机制

为明确转Bt基因棉花生殖器官的发育对其杀虫蛋白表达量的影响,以Bt棉常规种泗抗1号和杂交种泗抗3号为材料,2015-2016年于扬州大学遗传生理重点实验室,在盛蕾期和盛铃期分别设计不同种植密度(1.5、3、4.5、6、7.5万株/公顷)和不同施氮量(0、75、150、225和300kgN/公顷)处理试验,探讨蕾铃发育对Bt杀虫蛋白表达量影响及其氮代谢生理机制。结果如下:1、不同施氮量水平下,盛蕾期单株蕾量、蕾体积及蕾干重均表现为随施氮量的增加而增加,在蕾量、蕾体积和干重增大的同时,棉蕾中Bt蛋白含量也相应增加。如现蕾后30天,常规种(SK~(-1))由不施氮至常规施氮量时,单株蕾量分别由16.1个·株~(-1)增加至32个·株~(-1)、蕾体积分别由1.04cm3增加至2.42cm3、蕾干重分别由0.16g增加至0.24g;棉蕾Bt蛋白含量分别由281.25ng·g~(-1)FW增加至354.19ng·g~(-1)FW;杂交种(...  (本文共90页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津理工大学
天津理工大学

苏云金杆菌杀虫蛋白在超细矿物表面的吸附行为研究

苏云金杆菌(Bt)是目前产量最大、应用最广的微生物杀虫剂。随着转Bt基因作物的广泛种植,其安全性问题已受到了广泛的重视。研究发现,转Bt基因作物释放的毒素很容易被土壤矿物颗粒吸附,吸附能力则与土壤类型有关。本文研究了Bt杀虫蛋白在五种超细矿物表面的吸附解吸特性,用热力学和动力学方法探讨了时间、pH、温度、金属离子等对其吸附的影响,并运用电位对其机理进行了简单探讨。实验结果表明:Bt杀虫蛋白均可在五种超细矿物表面进行吸附,且属于快速吸附。其动力学曲线表明,在前20min吸附时间与吸附量呈直线上升,而后缓慢增加直至平衡。,当加入金属离子后,动力学曲线变化趋势不变,但吸附速率、吸附平衡量远远大于没有添加金属离子时的速率和平衡量,由此可见添加金属离子对Bt杀虫蛋白吸附具有一定的促进作用,且二价金属离子大于一价金属离子。用四种模型对动力学曲线拟合,二级拟合效果最好。平衡吸附曲线符合Langmuir吸附等温方程。热力学参数表明,该吸附为一自...  (本文共82页) 本文目录 | 阅读全文>>