分享到:

分子佐剂PHA增强小鼠特异性体液免疫的效应

目的:探讨PHA对小鼠特异性体液免疫的作用和应用价值.方法:经SRBC腹腔免疫昆明种小鼠30只,并随机等量分两组,实验组每只腹腔注射PHA 0.1ug/g,对照组注入等量N.S.5d后,两组均眼球取血,并颈椎离断处死取脾脏制备脾细胞悬液.用体外抗体形成细胞实验.(Plaque formi  (本文共2页) 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

分子佐剂C3d3与hCGβ基因融合对鼠DNA免疫增强抗hCGβ体液免疫效应

免疫避孕疫苗的研究主要集中在三类靶抗原,即生殖激素抗原、卵透明带抗原和精子抗原。人绒毛膜促性腺激素(hCG)是受精后第六天由胎盘合体滋养细胞分泌的一种妊娠期一过性糖蛋白激素,主要生理功能是维持妊娠黄体及妊娠。阻断hCG的生物学作用可在不干扰其它生殖生物学功能的情况下终止妊娠,因此hCG是免疫避孕较为理想的靶抗原。目前以hCG特异性的β亚基为基础的hCGβ避孕疫苗是研究得最为成熟的一种,其中hCG β嵌合肽疫苗已经进入Ⅱ期临床试验。研究结果显示,hCG β避孕疫苗具有抗生育作用;且不影响月经周期和排卵,无明显毒副作用;避孕作用可逆,是一种很有发展前途的避孕新途径。但是,由于以异种蛋白为载体的嵌合肽避孕疫苗存在着表位抑制效应,目前避孕效果仅80%,且免疫效果个体差异较大,距离临床应用相差甚远。另外,传统疫苗由于原材料收集困难,生产过程复杂,价格昂贵,使得疫苗的应用也受到了限制。因此,利用基因工程技术研制hCG β避孕疫苗,并显著增强...  (本文共80页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

分子佐剂对生长抑素基因免疫的作用及其机制研究

以生长抑素基因(SS)与乙肝表面抗原(HBsAg,S)基因融合的真核表达质粒pES/2SS为基础,制备S/2SS与GM-CSF基因的融合表达质粒和基因佐剂质粒及细菌DNA等,免疫小鼠及湖羊,探讨影响生长抑素基因疫苗免疫应答及促生长效果的因素,了解生长抑素基因免疫动物的作用机制,建立合适的生长抑素基因免疫程序,为最终获得经济有效的生长抑素基因免疫方法和疫苗、开发促生长、提高畜牧生产效率的新技术奠定基础。1.S/2SS与GMCSF基因的融合表达质粒和基因佐剂质粒的构建①pES/2SS-GMCSF表达产物抗原表位预测 应用DNA软件分析质粒pES/2SS-GMCSF及pES/2SS融合基因表达产物的结构和理化特性,发现二者S/2SS区域抗原表位一致。同样,在插入生长抑素氨基酸序列的2个区域存在抗原表位。在pES/2SS-GMCSF质粒中,S/2SS区域以外有另外的抗原表位区,推测GMCSF不改变S/SS表达产物抗原表位,且能够增强生...  (本文共144页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

分子佐剂hC3d3与hCGβ融合增强人外周免疫活性细胞对hCGβ抗原的反应性

目的从人肝cDNA文库克隆C3基因片段hC3d,将三个拷贝的hC3d与hCGβ基因融合,构建携分子佐剂的hCGβ-hC3d3融合蛋白和hCGβ蛋白的分泌型真核表达质粒,体外获得稳定高效表达细胞株,并获得较高纯度的目的蛋白hCGβ-hC3d3和hCGβ。目的蛋白体外作用于人外周血免疫细胞,以了解融合蛋白hCGβ-hC3d3的免疫原性及免疫效应,探讨分子佐剂hC3d的作用机制,为重组hCGβ-hC3d3融合蛋白疫苗最终用于人类奠定基础。方法以人肝cDNA文库为模板,PCR扩增hC3d基因片段,插入pMD18-T simple载体,构建含三个拷贝hC3d的pMD18-T-hC3d3质粒;以phCMV1-6his-hCGβ为模板扩增带有相应酶切位点的hCGβ基因片段,将其构建入高效真核表达载体pCI-gs得到pCI-gs-signal-6His-hCGβ真核表达质粒。将hCGβ基因片段插入pMD18-T-hC3d3质粒,使hCGB与hC...  (本文共95页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

分子佐剂C3d3增强hCGβDNA和粘膜疫苗体液免疫效应的机制

研究背景基于hCGβ的避孕疫苗,是目前唯一完成Ⅱ期临床试验的避孕疫苗。但尚面临许多困难,必须寻找更理想的载体、分子佐剂,合适的免疫途径,以增强它的免疫原性,提高其避孕效果。C3d分子通过与B细胞表面CD21分子的直接结合而发挥生物学作用,因此C3d作为分子佐剂,为解决人群中的个体差异创造机遇,并恰好符合避孕疫苗追求体液免疫效应的目标。本实验室在以往的研究中,将C3d3与hCGβ基因融合,成功构建了hCGβDNA疫苗pCMV4-hCGβ-C3d3、hCGβ粘膜疫苗Lb.hCGβ-C3d3。并且证明分子佐剂C3d3可明显增强避孕疫苗的体液免疫效应及抗生育作用。但这两种疫苗作用的分子机制尚不明了,分子佐剂C3d3的作用机制尚不清楚。目的本研究用hCGβDNA疫苗和hCGβ粘膜疫苗分别经小鼠肌肉注射免疫和阴道粘膜接种,观察这两种疫苗在小鼠全身和生殖道局部的抗hCGβ体液免疫效应,观察分子佐剂C3d3对免疫反应的作用;分析ASC表面和组织...  (本文共100页) 本文目录 | 阅读全文>>

华东理工大学
华东理工大学

基于分子佐剂的禽腺病毒亚单位疫苗研究

禽腺病毒引起的包涵体肝炎和心包积水综合征给我国的禽类养殖业造成了巨大损失。病毒感染前期,禽无明显临床症状,无法进行早期治疗,因此疫苗接种成为首选的免疫防治策略。本文旨在研制一种高效、安全的亚单位疫苗,以应对禽腺病毒引起的感染。根据禽腺病毒的病原学研究,将抗原蛋白锁定为衣壳五邻体蛋白上的Fiber-2蛋白。为了使抗原发挥更强的免疫效力,挑选了细胞因子IL-2和IFN-γ做为疫苗佐剂,联合免疫后评价疫苗效力。首先,在昆虫细胞-杆状病毒系统中进行了Fiber-2的表达。将密码子优化后的Fiber-2序列插入至杆状病毒载体Bacmid上,将重组质粒转入Sf9细胞中,制备高滴度的病毒用于重组蛋白表达。使用双向琼脂扩散法对重组蛋白进行免疫原性检测,结果显示重组蛋白效价达到了 1:128,表现出良好的免疫原性。其次,在大肠杆菌系统中对细胞因子IL-2和IFN-γ进行表达。将密码子优化过的序列插入至pET28a(+)表达载体中,各种温度下的表达...  (本文共57页) 本文目录 | 阅读全文>>