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噬菌体抗体库筛选技术及在肿瘤研究中的应用

噬菌体抗体是指表达在噬菌体表面的抗体分子Fab或scFv,这些分子的群体称为抗体库。经特定抗原或细胞筛选后可以获得针对该抗原或细胞表面标志物的特异性抗体。经典的筛选方法为固相或液相抗原识别,前提条件是能得到抗原纯品,对于抗原无法提纯或抗原性质不确定的情况则不能适用,所以又出现全细胞筛选,直接利用肿瘤细胞或组织细胞进行筛选,无需纯抗原,但目标抗原一定要有较高的表达水平  (本文共4页) 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

苦马豆素单链抗体基因的初步研究

疯草(locoweed)的主要有毒成分吲哚兹定生物碱—苦马豆素(swainsonine,SW),不仅能导致家畜中毒死亡,而且能够引起母畜流产、不孕、胎儿畸形和公畜不育,给我国草原畜牧业生产造成了巨大的经济损失。从营养学角度看,疯草营养价值高,是一种潜在的牧草资源,其抗逆性强,在恶劣环境中能旺盛生长,应当把它看作生态群落的重要组成部分。如何有效防治疯草对动物的毒性,又可将它作为优质牧草加以利用,一直是人们研究的热点。此外,目前SW的检测方法有薄层层析(TLC)定性分析、气相色谱(GC)和高效液相色谱(HPLC)定量分析。SW与大多数生物碱包括吲哚兹定生物碱和喹诺兹定生物碱不同,对一般检查生物碱试剂显色不灵敏,只有在较高含量时才能用TLC检测到。由于分子结构中缺乏适合分光光度法检测的发色基团,GC和HPLC不太适合SW的检测。因此,寻找一种新的灵敏、便利的检测SW方法也是当务之急。本研究旨在构建SW单链抗体基因,并期望将来能制备出S...  (本文共83页) 本文目录 | 阅读全文>>

第二军医大学
第二军医大学

抗骨桥蛋白单链抗体可抑制乳腺癌转移和血管生成

骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)与肿瘤的生长和转移有密切的关系。为系统研究抗OPN抗体在抑制肿瘤转移过程中的作用,探讨OPN作为肿瘤转移治疗靶点的可能性,本实验在建立噬菌体抗体展示平台的基础上,筛选得到抗OPN单克隆单链抗体,构建并表达获得抗OPN单链抗体-Fc融合蛋白;研究抗OPN单链抗体-Fe融合蛋白在体内外对乳腺癌转移和血管生成的作用。结果表明抗OPN单链抗体-Fc融合蛋白1A12和2H8不但能够抑制乳腺癌细胞MDA-MB-435s在体外的粘附、侵袭、迁移和锚定非依赖生长,而且可以抑制OPN体内外的促血管生成作用;该血管生成抑制作用是通过抑制NF-κB介导的细胞生存调节通路,促进内皮细胞凋亡而实现的。在体内模型中,1A12和2H8能够抑制MDA-MB-435s在裸鼠体内的原发肿瘤生长和自发性肺转移,并能够降低肿瘤组织中微血管密度,增加肿瘤内皮细胞凋亡。本研究发现OPN是抑制肿瘤转移的有效治疗靶点,抗OPN单链抗体...  (本文共149页) 本文目录 | 阅读全文>>

郑州大学
郑州大学

胃癌人源性ScFv噬菌体单链体库的构建和初步鉴定

背景:胃癌(Gastric Cancer)是全球常见肿瘤,全世界每年约有93.4万胃癌新发病例,有70万人死于胃癌,发病率居常见肿瘤第四位。在我国,胃癌死亡率占所有恶性肿瘤死亡率的23.02%,居各类癌症死亡率首位。现阶段,胃癌的诊断方法以X线和内镜超声等为主,这对胃癌的早期诊断尚缺乏足够的准确性和特异性,在治疗方面,以放疗、化疗和手术治疗为主的综合治疗也因其副作用太大使其在临床中的应用受到了很多限制。所以,许多研究者把研究热点转向了胃癌的抗体诊断和治疗,这对胃癌的防治将具有重要的意义。抗体技术的应用对医学发展起了非常重要的推动作用,被广泛地应用于实验室研究、疾病的诊断和治疗,其在疾病诊断、治疗和预防等方面显示出了重要作用。噬菌体抗体库(Phage Antibody Library)的构建以聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)和噬菌体展示(Phage Display Techniques,...  (本文共90页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

抗HER2单链抗体与力达霉素强化融合蛋白的构建及其抗肿瘤活性研究

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,占女性肿瘤死亡第二位,其发病率逐年增高,人们迫切需要采用新的治疗方法来提高患者的生存率及生存质量。分子靶向治疗在肿瘤治疗中的地位逐渐上升,成为肿瘤治疗的一个热点。目前已有多种分子靶向治疗的药物应用于乳腺癌的治疗或正在临床试验阶段,如赫赛汀(Herceptin)、细胞周期调节蛋白抑制剂、环氧化酶-2(COX-2)抑制剂、蛋白激酶C(PKC)抑制剂等。HER2受体是人表皮生长因子受体家族四成员之一,定位于人类17q21,编码分子量为185kD的氨基酸,命名为P185,具有酪氨酸激酶活性,蛋白从结构上分为胞外区、跨膜区和胞内区,后者具有酪氨酸激酶活性,与表皮生长因子受体具有同源性。HER2的功能是作为生长因子受体在细胞分化、粘附和运动中起作用。Her2基因扩增导致HER2高表达,导致细胞恶性转化见于30%转移性乳腺癌患者和部分卵巢癌,肺癌,胃癌和口腔癌患者。HER2过表达增加肿瘤细胞侵袭、转移的能力,...  (本文共130页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

肺腺癌人源噬菌体单链抗体制备及其在荷人肺腺癌裸鼠模型中的放免显像

肺癌是主要威胁人类生命的肿瘤之一,特别是我国城市空气污染严重的现状以及烟民数量的快速增加,肺癌的发病率呈上升趋势。专家预测,到2025年我国每年死于肺癌人数将超过100万,而肺癌总治愈率仍仅15%左右,术后5年生存率为30%-50%。目前临床上,肺癌的治疗是以外科手术为主,并结合化疗和放疗的综合治疗。但对于手术不能切除的肿瘤,特别是对转移复发的中晚期肿瘤,只能采取化疗、放疗等辅助治疗,由于其副作用较大而在临床应用中受到诸多限制。因此,国内外学者越来越多地将注意力转向肿瘤的导向治疗上。因为肿瘤的导向治疗可以达到特异地杀伤癌细胞,并尽可能降低对正常细胞的毒副作用。如果将放射性核素偶联具有导向性的特异性抗体,一方面通过抗体介导与肿瘤抗原特异结合,同时利用放射性核素所发出的射线,加强对癌细胞的作用,提高抗肿瘤的疗效。10余年来,肿瘤的导向治疗已作为一种重要的治疗模式被广泛研究和应用于临床。免疫显像和免疫治疗是生物治疗的重要组成部分,对肿...  (本文共122页) 本文目录 | 阅读全文>>