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大熊猫精子体外获能的研究

近几年来,大熊猫的就地保护和迁地保护都取得了不同程度的成效,但大熊猫物种仍没脱离绝灭的险境。目前,在大熊猫人工授精和人工育幼技术日趋成熟的情况下,进一步提高大熊猫繁殖率的手段就是“试管熊猫”技术了。大熊猫精子体外获能是“试管熊猫”诞生必须经过的第一个关口,首先从事这方面研究的是英国的Moorc,HDM(1984),尔后中国科学院动物所的陈大元等(1989)也进行了类似研究,但两位先驱均未披露大熊猫精子体外获能的技术方法。为此,作者将着重介绍本实验对大熊猫精子体外获能研究的过程,供今后从事大熊猫胚胎移植研究的同行参考。1材料与方法11实验材料大熊猫冷冻精液来自成都动物园、成都大熊猫繁育研究基地的珍稀野生动物精子库。金黄地鼠购于四川省计划生育科研所实验动物中心。12方法121精子的获能方法将大熊猫冷冻精子颗粒置于40℃的TCM199解冻液中解冻,然后离心(2000rpm),去上清液,加入盛有2ml改进BWW的试管底部,...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国科学(B辑 化学 生命科学 地学)》1989年06期
中国科学(B辑 化学 生命科学 地学)

大熊猫精子体外获能和异种穿卵的超显微结构研究

哺乳动物的精子需要经过雌性生殖道获得受精能力u一3,,精子获得受精能力的过程称为精子获能u,习,获能是一个十分复杂的生命现象,它是精子顶体反应的前奏,而后者又是受精的必要条件.哺乳动物(包括人类)的体外受精,在受精前精子必须先获能,然后引起顶体反应,精卵才能结合,从而实现受精.如果没有精子获能的这一发现,体外受精是不可能成功的.精子在体外获能是需要一定的环境条件和时间,在实验动物中已经研究得比较清楚,并亦比较稳定.但不同动物的精子所需环境条件不同,如:获能液的成分,渗透压,pH以及需加牛滤泡液、肝素等等;所需时间也不一样,如:小鼠1h,绵羊1.5h,大鼠2一3h,兔5h等[4].在家畜中也各有不同.然而,对野生哺乳动物的研究极为少见,尤其对大熊猫精子体外获能和异种穿卵试验还从未有人研究过.据我们所知这是首次报道.一、材料和方法大熊猫精子的冰球在复苏液中解冻,然后移至装有大熊猫精子获能液的试管中,倾斜放在第6期 陈大元等:大熊猫精...  (本文共5页) 阅读全文>>

四川农业大学
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大熊猫精浆成分与精液质量关系及提高大熊猫冷冻精子体外受精能力的研究

本研究采用SDS-PAGE对大熊猫精浆蛋白电泳谱带特性进行分析,使用酶联免疫方法检测精浆血小板激活因子乙酰水解酶(PAF-AH)活性、化学比色法检测精浆谷草转氨酶(GOT)活性,并初步探讨了这些物质与大熊猫精液质量的关系,结果显示:(1) 大熊猫精浆SDS-PAGE电泳共分离得到12条蛋白谱带,其分子量分别为74.9kDa、59.6kDa、56.2kDa、54.7kDa、47.3kDa、38.2kDa、30.8kDa、23.8kDa、18.4kDa、16.8kDa、14.0kDa和13.4kDa,其中74.9kDa、59.6kDa、56.2kDa、47.3kDa、30.8kDa、13.4kDa谱带为所有个体大熊猫精浆样品所共有。本试验条件下,部分大熊猫精浆出现的特异蛋白带与精液质量无相关性。(2) 大熊猫精浆存在PAF-AH活性和GOT活性,其平均浓度分别为56.76±60.86mmol/min/mL和194.89±77.40 ...  (本文共60页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川农业大学
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大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)精子异卵胞质显微受精初步研究

本文就不同剂量组合的PMSG和HCG,对金黄地鼠超数排卵效果进行了探讨;同时,借助显微操作仪,将大熊猫活力正常精子、精子头核、死精子分别注入金黄地鼠卵母细胞中,初步研究了三种不同状态精子的受精能力以及精子体外获能与卵母细胞的电激活对三种不同状态精于受精能力的影响。研究结果:(1)采用三种不同激素剂量组合,对金黄地鼠进行超排处理,40IU PMSG+40IU HCG与50IU PMSG+50IU HCG两种剂量组合各自获得平均卵子数之间无显著差异,但都显著高于30IU PMSG+30IU HCG剂量组合(31.57,32.83vs.25.60;P<0.01)。对于可用卵数百分率,30IU PMSG+30IU HCG与40IU PMSG+40IU HCG两组合之间无显著差异(98.44%vs.98.18%,P>0.05),都显著高于50IU PMSG+50IU HCG剂量组合(98.44%,98.18%vs.94.67%;P<0.0...  (本文共45页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

安格斯牛除精浆冷冻精液效果的研究

用安格斯牛精液为实验材料,采用两步稀释法,在稀释前分别以脱脂乳-卵柠液和生理盐水为洗涤液,以离心法去除精浆,然后计算精子活率和测定精浆中酶的活性,观察精子顶体状态并分析其超微结构,用仓鼠进行穿卵试验,以探讨除精浆对安格斯牛精子冷冻保存效果的影响,并对其发生的机理进行分析。试验共分四组:生理盐水除精浆组、脱脂乳-卵柠液除精浆组、离心不除精浆组及常规冷冻组。分别对稀释后、平衡后和解冻后三个阶段进行比较,结果表明:1.以生理盐水和脱脂乳-卵柠液为离心洗涤剂除精浆的两个试验组,解冻后精子活率分别为0.493±0.043和0.497±0.067。Ⅰ类顶体率分别为(78.3±2.7)%和(78.7±2.8)%,精子畸形率分别是(6.35±0.72)%和(6.32±0.57)%。这两组之间这几项指标差异不显著(P>0.05),说明用生理盐水和脱脂乳-卵柠液为离心洗涤剂除精浆对精子品质无显著影响(P>0.05)。而未除精浆的另两组,离心与非离心...  (本文共89页) 本文目录 | 阅读全文>>

东北林业大学
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马鹿精子体外获能及获能前后超微结构变化的研究

精子获能是哺乳动物受精前必须经历的一个成熟过程,所以精子的体外获能便是实现体外受精的一个重要前提。本研究以马鹿为试验对象,开展了对鹿精子体外获能以及获能前后精子超微结构变化的研究,以期筛选出在实践中具有可操作性且效果良好的马鹿精子获能培养体系,从而为鹿体外受精和受精机理的研究奠定基础。对马鹿精子,使用上浮法诱导其获能,通过对顶体染色测定精子的顶体反应率并作为主要指标,同时以精子活力、精子存活时间和异种受精率为辅助指标,对精子的获能效果进行评价,以比较不同培养温度、丙酮酸钠浓度、咖啡因浓度、肝素浓度以及培养基对马鹿精子体外获能效果的影响。研究结果如下:1.采用上浮法可使马鹿的精子体外获能。其中精液与洗精液的适宜比例为1:3~5;两次离心洗涤时的速度和时间以2200rpm×10min和2000rpm×5min为宜。2.使用改进的三色染色法可以有效地评价马鹿精子获能后的顶体反应水平。3.马鹿精子于5%CO_2、饱和湿度下获能培养,38...  (本文共79页) 本文目录 | 阅读全文>>