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苏芸金杆菌伴孢晶体中P_2毒素蛋白的研究

苏芸金杆菌库里斯塔克变种HD一1菌株,是Dulmage〔”筛选出的优良菌种。它是世界上许多国家(包括我国)苏芸金杆菌制剂的生产菌种。该菌株产生的占一内毒素,即杀虫伴抱晶体由130一135道尔顿和“道尔顿两种蛋白质组成⑦。前者被称为Pt杀虫毒素蛋白,后者为P:杀虫毒素蛋白。山本等人(3)在1981年用分子筛柱层析法从伴抱晶体中分离出了P:毒素蛋白,并查明P:毒素蛋白除对鳞翅目昆虫显示杀虫活性外,还对双翅目的蚊幼虫有较高的毒力。但在生产上HD一1菌株是用于防治鳞翅目害虫的高效菌株。关于P:毒素蛋白从中起的作用至今了解不多。近几年来,随着基因工程学的发展,不断有苏芸金杆菌杀虫基因被导人植物体内,育出抗虫植物〔4,。为有效利用产生P:毒素蛋白的基因,必须首先弄清P:毒素蛋白对哪些害虫有效和在HD一l伴抱晶体中所起的作用。为此,笔者进行了该研究。1材料和方法1.1供试蔺种 供试菌种是苏芸金杆菌(Bacillust加ringiensis v...  (本文共4页) 阅读全文>>

军事科学院
军事科学院

基于原子力显微镜技术的毒素蛋白检测与动态成像研究

背景:生命科学的进步与发展离不开成像仪器的开发与成像技术的突破。如何通过成像技术来检测、分析生物大分子的各种变化,从中提取分子信息,定性、定量这些生物大分子等都具有重要的科学意义和应用价值。AFM以微悬臂作为力学信号媒介可直观展现生物大分子的超精细结构和各种物化性质,大大提高了我们对蛋白质结构和其在生化反应中所扮演角色的理解,为解决生物大分子功能和分子层面生理行为的生化问题提供了新的技术手段。目的:本研究旨在运用多模态AFM建立生物大分子检测与生物大分子互作研究平台的新方法。一是开发针对超痕量生物毒素的无标记甄别方法;二是建立在近生理条件下原位动态研究毒素生物学效应的新平台;三是与DNA折纸技术结合,通过设计毒素-DNA标签嵌合分子,对室温条件下的嵌合分子可控自组装行为进行前期先导研究,为进一步探索毒素受体与作用机制奠定基础。方法:1.在超痕量生物毒素无标记检测部分,选用ABR,RT,ETX,BoNT/A和SEB这5种生物毒素做...  (本文共161页) 本文目录 | 阅读全文>>

大连理工大学
大连理工大学

酵母核苷酸酶和大肠杆菌毒素—抗毒素系统结构与功能研究

生物大分子结构的解析有助于对它们功能的理解,进而可针对性地进行药物设计、基因改造、疫苗研制开发,甚至人工构建蛋白质等工作,从而对制药、医疗、疾病防治、生物化工等诸多方面产生巨大的推动作用,因此具有重要意义。X射线晶体学是研究生物大分子结构和功能的主要方法。本论文研究内容主要包括两个方面:采用X射线晶体学方法研究酵母5'-核苷酸酶的结构和功能,探索5'-核苷酸酶反应机制;研究大肠杆菌毒素-抗毒素复合物的结构和功能,探讨抑制毒性机制及自身转录调控机制。5f-核苷酸酶(5'-nucleotidase,简称5'-NT)可水解多种核苷酸,是维持体内核苷酸水平以保证生物体内多种生理过程和代谢过程的正常运行的重要的一类酶。5f-核苷酸酶在个体的生长、繁殖、遗传、变异等生理生化功能方面起着重要作用。HD-domain超家族蛋白可作为5'-核苷酸酶,在核苷酸代谢和信号传导方面发挥重要作用。目前还没有关于真核生物中HD-domain5'-核苷酸酶结...  (本文共141页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中师范大学
华中师范大学

粉纹夜蛾细胞对Bt Cry1Ac毒素的抗性特点及其机制的研究

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)合成的杀虫晶体蛋白或转Bt基因植物表达的毒素蛋白对多种害虫具有特异性毒杀作用,是环境友好的生物农药,被广泛地用于防治农业和卫生害虫。但是害虫也能对Bt或其产物杀虫晶体蛋白产生高水平的抗性,这严重威胁着Bt资源的可持续利用。只有深入了解昆虫对Bt的抗性特点及其机制,才能制定出合理的抗性治理策略,从而延缓害虫抗性的产生。但到目前为止,由于虫体生理和生化十分复杂,抗性昆虫筛选费时费力,人们对昆虫抗性的研究进展缓慢,Bt抗性的研究仍是当前的热点之一。本文没有采用筛选抗性昆虫的方法,而是另外选择筛选抗性昆虫培养细胞作为研究材料,以揭示昆虫的Bt抗性特点及其机制。该文以MTT法检测了粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)胚胎细胞系BTI-TN-5B1-4(简称TnH5或Hi5)对Cry1Ac的抗性发展及其规律:以ELISA、配体印迹和荧光标记法比较了敏感和抗性两种细...  (本文共118页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中师范大学
华中师范大学

四种昆虫ABCC2和ABCC3基因的重组表达及功能分析

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是目前产量多、使用广泛的微生物农药之一,具有较好的经济价值,其产生的伴孢晶体毒素可以直接作用于害虫,还可以将其毒素基因作为转基因农作物的靶标基因,因此该微生物资源有非常大的应用价值。在BT毒素杀虫过程中,发挥杀虫作用的关键步骤是毒素与受体的识别与结合,因此BT毒素受体的研究对探索BT毒素的杀虫机理具有重要的意义。目前,在昆虫中肠中发现的受体主要有四类:碱性磷酸酶(ALP),氨肽酶N(APN),钙粘蛋白(Cadherin)和糖脂类。近年来,一些鳞翅目昆虫ABC家族的多种蛋白被报道可以作为BT毒素的受体并且可能与BT毒素的抗性相关,目前有关斜纹夜蛾、棉铃虫、红铃虫和粘虫ABCC蛋白的报道尚少,在离体细胞水平尚未证实能否介导细胞对Bt毒素的毒力。本实验中,首先在细胞水平用RNAi技术沉默了SlABCC3基因的表达,发现SIABCC3基因被沉默后,TH细胞对Cry1Ac...  (本文共73页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

产气荚膜梭菌α、β_1、β_2、ε毒素蛋白的共表达及免疫原性研究

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种革兰氏阳性厌氧产芽胞杆菌,可引起人和家畜的多种疾病,如气性坏疽、出血性肠炎、肠毒血症等。本菌的主要致病因子是它分泌的毒素,而α、β、ε、t是该菌产生的四种主要致病性毒素,根据分泌毒素的类型可将产气荚膜梭菌分为A、B、C、D、E5个型。疫苗免疫是预防和控制动物传染病发生最有效的手段之一,产气荚膜梭菌的预防和控制也不例外。当前,产气荚膜梭菌病免疫所用疫苗主要是传统的类毒素灭活疫苗。然而,产气荚膜梭菌传统类毒素疫苗的生产由于需要产气荚膜梭菌的培养、毒素的灭活及浓缩,因而存在成本高、耗时长、病原菌扩散等缺点。因此,考虑到当前产气荚膜梭菌传统疫苗的不足之处,需要设计一种能够在外源表达系统中可以同时表达多种毒素蛋白的方法,进而制备多价亚单位疫苗来替代产气荚膜梭菌传统类毒素灭活疫苗,减少产气荚膜梭菌的培养以防止病原微生物的扩散,保护人民身体健康和公共卫生安全。本研究利用PCR...  (本文共66页) 本文目录 | 阅读全文>>