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发酵液中L-精氨酸的检测方法

目的建立发酵液中L-精氨酸的定量检测方法。方法用坂口试剂(α-萘酚和2,3-丁二酮)定量测定L-精氨酸的含量。结果  (本文共3页) 阅读全文>>

华南理工大学
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产L-精氨酸谷氨酸棒状杆菌基因工程菌发酵工艺初步优化

本文以谷氨酸棒状杆菌基因工程菌ATCC14067-T18-argB为主要研究对象,确定了发酵液中游离精氨酸的检测方法;研究了大豆蛋白胨、葡萄糖、尿素、碳酸钙和装液量等因素对精氨酸产量的影响,采用Box-Bohnken进行培养基的优化;并在发酵罐水平对葡萄糖的添加方式、初糖浓度、接种量等发酵工艺进行探索。1.采用高效液相色谱法检测发酵液中游离精氨酸的含量,确定了衍生试剂并对色谱柱、洗脱梯度等进行优化。以2,4-二硝基氟苯作为衍生试剂,Hypersil BDS C18作为检测用色谱柱,验证优化后的程序,其波形完整,不拖尾,不黏连;其线性方程回归系数为0.9947,线性关系良好;稳定性好;重复性强。2.考察发酵培养基各因素含量对积累精氨酸的影响,在单因素水平基础上,确定了三个重要影响因子,采用Box-Bohnken的方法对这三个影响因子进行响应面优化,以大豆蛋白胨、尿素和葡萄糖作为自变量,精氨酸产量为响应值,确定了发酵培养基的成分较优...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
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L-精氨酸发酵及提取纯化研究

L-精氨酸主要来源于食物蛋白、内源合成和机体蛋白的周转,具有很多重要的生理功能,包括降低血压、调节血糖、增强人体免疫力等。本文主要内容是以His缺陷型黄色短杆菌为基础出发菌株,采用复壮和亚硝基胍诱变筛选获得高产精氨酸的His缺陷型菌株,通过ARTP诱变获得精氨酸类似物磺胺胍耐药性高抗性菌株,解除精氨酸的积累对代谢的反馈抑制作用,解除高浓度葡萄糖对菌株的糖抑制作用。通过对摇瓶的发酵培养基和培养条件的研究,为精氨酸的工业化发酵生产提供了必要的前提条件。利用发酵罐控制发酵底物葡萄糖浓度的方式进一步优化发酵罐培养条件,从而实现精氨酸发酵逐级放大进行发酵工艺验证和优化,提高了 L-精氨酸的产率和葡萄糖转化率。对L-精氨酸分离纯化过程中脱色工艺及离子交换工艺进行了优化研究,并对浓缩结晶后的产品进行纯度和收率分析,初步确定了 L-精氨酸发酵液纯化工艺制程。1、实验室现有菌株产L-精氨酸能力为8.3g/L。对该菌株进行了亚硝基胍诱变处理,得到编...  (本文共98页) 本文目录 | 阅读全文>>

江南大学
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L-精氨酸的制备及提取研究

L-精氨酸是一种碱性氨基酸,在医药和食品工业中具有广泛用途。目前,日本、美国、德国等国家均采用发酵法生产L-精氨酸。我国有少量采用水解天然蛋白质的方法生产的精氨酸,由于其产量相当有限,我国医药用原料精氨酸大多依赖进口。因此,发酵法生产L-精氨酸成为我国氨基酸工业急需解决的课题。本论文对L-精氨酸检测方法,L-精氨酸产生菌的诱变育种以及发酵条件优化,L-精氨酸的分离提取等内容进行了系统研究。本文首先确立了以77%乙醇:二乙胺=100:1的溶液为展开剂,以坂口试剂为显色剂的层析显色方法,以此作为L-精氨酸的定性检测方法;确立了定量测定L-精氨酸的最佳条件:40g/L NaOH溶液、80g/L甲萘酚正丙醇溶液、0.5mL/L双乙酰正丙醇溶液各1mL作为显色液,水浴温度为30℃,水浴加热15min。以谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)ATCC138761为出发菌株,用紫外线、亚硝基胍和60Co对该菌株进...  (本文共62页) 本文目录 | 阅读全文>>

江南大学
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钝齿棒杆菌SYPH5-8合成L-精氨酸的代谢工程改造

L-精氨酸(L-Arginine,简称L-Arg)作为具有多种生理功能的半必需氨基酸,广泛应用于医药、食品和化工等领域。钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum) SYPH5-8是经过多级诱变筛选获得的能够利用糖质原料发酵生产L-精氨酸的菌株,本文以SYPH5-8为出发菌株,运用代谢工程手段,对其L-精氨酸合成途径的限速步骤实施改造,探讨改造后菌株发生代谢变化的机制,强化L-精氨酸的合成途径。主要研究结果如下:(1)考察L-精氨酸对SYPH5-8中N-乙酰谷氨酸激酶(N-acetylglutamate kinase,CcNAGK, argB)的反馈抑制情况,测得其半数反馈抑制常数(I0.5)为1.36mM,当L-精氨酸添加量达5mM时,CcNAGK的酶活力仅保持3.0%,以上结果表明:SYPH5-8虽然经过多级诱变及L-精氨酸结构类似物抗性筛选,但仍未解除L-精氨酸对CcNAGK的反馈抑制作用。将CcNAGK...  (本文共81页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江师范大学
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L-精氨酸高产菌株选育与发酵工艺研究

L-精氨酸是人体半必需氨基酸,在绝大多数微生物中都能自身合成,目前广泛应用于食品及医药行业,多采用发酵法大规模生产。本文以真菌为研究对象,对不同样品中的真菌进行了L-精氨酸高产菌株的筛选,从红曲米中分离出一株高产L-精氨酸菌株红曲霉H13,其初始发酵液中L-精氨酸产量为1.67g/l。对其进行形态鉴定及分子鉴定确定其为紫红曲霉。进一步对该菌株进行了最佳发酵培养工艺选择、诱变育种、代谢控制发酵、细胞膜通透性调控等研究,围绕提高发酵液中L-精氨酸产量,菌丝体中L-精氨酸含量及菌丝体生物量,最终获取大量L-精氨酸。研究结果如下:通过单因素实验对其液体发酵进行初步优化研究。结果表明,最佳碳源是可溶性淀粉,最佳浓度为10%,最佳氮源是蛋白胨,最佳浓度为3%,最佳pH值4.5,温度30℃种子培养时间为18h,摇瓶装液量50ml/250ml。转速为120r/min,发酵时间7d。在此条件下进行发酵培养,所得发酵液产L-精氨酸4.08g/l,菌...  (本文共89页) 本文目录 | 阅读全文>>