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表达谷胱甘肽S转移酶-蜂毒素-~(88)精氨酸变体白细胞介素2工程菌的发酵条件研究

在基因水平对白细胞介素2(IL-2)进行定点诱变产生的变体,可提高抗肿瘤活性,降低系统毒性[1-2]。据2000年美国科学研究的报道:在基因水平对IL-2进行特定位点的定位诱变,产生相应的基因变构IL-2;该基因变构IL-2对机体抗肿瘤免疫的主要细胞———细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的活化作用较原有的IL-2强约3 000倍;体外实验证实IL-2基因变构体对生长期的肿瘤有明显的抑制作用[1-2]。因此基因变构的IL-2将是原有IL-2的更新替代产品。蜂毒疗法通过多种机制抗肿瘤[3-5],是我国利用传统中医中药治疗肿瘤的独特方法。26肽蜂毒素(Melittin)是蜂毒的主要成分之一,可作为提高机体CTL活性的免疫制剂。但IL-2和蜂毒素在单独使用时产生的副作用限制了它们的应用。我室结合中医和西医在调节免疫功能中的优势,利用基因工程技术首次构建了pGEX-4T-2/蜂毒素8-8精氨酸变体IL-2(pGEX-4T-2/Melittin...  (本文共4页) 阅读全文>>

《生物化学与生物物理学报》1960年30期
生物化学与生物物理学报

低浓度蜂毒素在溶液中的自聚集

低浓度蜂毒素在溶液中的自聚集韩学海,隋森芳(清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室,北京100084)关键词蜂毒素;自聚集;多肽构象蜂毒素(melittin)是由26个氨基酸残基组成的多肽,是欧洲蜜蜂(Apismellificera)毒汁中的主要成分之一,自从1967年发现并从毒汁中分离出以来[1],对其结构与功能进行了广泛而深入的研究[2],但是蜂毒素与膜作用过程及引起膜通透性改变的分子机制还不十分清楚。我们实验室先后对蜂毒素的插膜能力及插膜过程的构象变化进行了研究并发现其与膜作用的不同阶段的构象不同[3],对阐明蜂毒素与膜的作用有一定意义。蜂毒素具有较高的水溶解性,研究通常表明较高浓度的蜂毒素在高pH、高离子强度条件下多以自聚集的四聚体状态存在。但是,1μg/ml或更低浓度的蜂毒素即可引起红细胞溶血及模型膜上电压门控型通道的出现。单体及四聚体状态蜂毒素的构象有明显的不同,这样单体及四聚体蜂毒素的生物学功能比...  (本文共5页) 阅读全文>>

山西大学
山西大学

八肋游仆虫中心蛋白性质和功能的研究

中心蛋白是EF-hand钙结合蛋白,是钙调蛋白超家族中的一员。它含有4个EF-hand结构基元,每个结构基元能结合一个钙离子,是很多生物体(如藻类、酵母、原生动物、高等植物、哺乳动物等)的中心体(基体或纺锤极体)的重要组成部分。中心蛋白在细胞的正常分裂以及包含中心蛋白的纤维系统收缩中起重要作用。八肋游仆虫是一种进化上处于特殊地位的单细胞真核生物,存在于八肋游仆虫的中心蛋白是由168个氨基酸残基组成的单肽链酸性蛋白质,分子量约为20KD,不含半胱氨酸和色氨酸。对该中心蛋白的研究,不仅有助于阐明低等真核生物的细胞分裂、细胞运动等重要生命活动过程的本质,而且将其用作稀土离子进入生物体细胞内的主要靶蛋白的模型,对深入研究稀土生物学效应的化学基础具有重要意义。首先利用PCR技术,在野生型八肋游仆虫中心蛋白的基础上得到4个定点突变体(G115W、D37K、D73K、D146K)和2个截短中心蛋白分子(P23、P123)的基因片段,序列测定表...  (本文共133页) 本文目录 | 阅读全文>>

第二军医大学
第二军医大学

蜂毒素抗肝细胞癌血管生成的实验研究

目的探讨蜂毒素抗肝癌血管生成的作用及其机理。方法MTT检测蜂毒素对肝癌细胞和血管内皮细胞的增殖抑制作用,FCM检测细胞凋亡及细胞周期,Transwell小室及Matrigel实验检测内皮细胞迁移和小管形成。CAM实验观察蜂毒素对血管生成的影响。观察蜂毒素对裸鼠皮下移植瘤生长的影响。ELISA检测IL-8、VEGF和bFGF浓度,RT-PCR检测VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达。IHC和Western blot检测MVD及VEGF、bFGF、HIF-1α和NF-κB的表达。结果蜂毒素能够抑制肝癌细胞和血管内皮细胞增殖,诱导内皮细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期。抑制血管内皮细胞迁移和小管形成。抑制CAM及裸鼠肝癌血管生成,进而抑制肝癌生长。降低肝癌细胞及血管内皮细胞VEGF和bFGF表达。通过影响NF-κB活性而下调VEGF、bFGF和HIF-1α的表达。结论蜂毒素具有抑制肝癌生长的作用,其作用机理可能与抗肝癌血管生成有关。  (本文共158页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
扬州大学

蜂毒素联合杜仲黄酮治疗类风湿关节炎的实验研究

引言类风湿关节炎(Rheumatoid Arthrits,RA)是主要累及小关节的滑膜慢性炎症,属于自身免疫性疾病范畴,常常会引起关节肿痛、软骨破坏、关节间隙变窄、关节畸形等改变,若得不到及时和正确的诊治会造成人体不同程度的残疾[1]。该病属于传统医学的痹症范畴,常见症型有4种:风寒湿痹、风湿热痹、痰瘀痹阻、肝肾阴虚等。RA患者骨与关节的早期病理变化是骨质疏松(Osteoporosis,OP),有研究指出RA患者普遍存在骨量流失的现象。Wnt信号通路在炎症与骨代谢方面发挥重要作用,主要通过Wnt家族蛋白或信号通路上相关蛋白通过自分泌或旁分泌的方式与细胞膜上相应受体结合,激活细胞质中的对应信号分子,从而促进下游基因转录。蜂毒素(Melittin),是蜂毒中具有药物作用的主要活性物质,具有抗炎、抗菌与镇痛药用价值。有研究表明蜂毒素能够有效抑制多种病原微生物生长。蜂针、蜂疗已有千年历史,尤其是在治疗关节炎等炎性疼痛方面,疗效显著。但蜂...  (本文共75页) 本文目录 | 阅读全文>>

《解放军医药杂志》2014年06期
解放军医药杂志

中药蜂毒素治疗骨肿瘤研究进展

蜂毒是由蜜蜂毒腺和附腺分泌的一种透明或淡黄色且具有芳香气味的液体。蜜蜂蜂毒中化学成分较复杂,主要由多肽类、酶类和非肽类物质组成。其中蜂毒素是一种中性两性多肽物质,由26个碱性氨基酸多肽组成,其分子量约为2840,约占蜂毒质量的50%[1]。据国内最新药理数据研究表明,蜂毒素在降低血压、抗病毒、广谱抗菌、消炎止痛、抗血小板凝聚及抗肿瘤等方面,均具有广泛的基础药理学作用[2-3]。国外研究资料显示,蜂毒体外实验可以抑制白血病U937细胞增殖并诱导凋亡[4]。现就蜂毒素对骨肿瘤细胞的抗肿瘤机制进行如下总结。1体外杀伤肿瘤细胞作用国内学者发现,蜂毒素体外实验可直接抑制人成骨肉瘤U2OS增殖,致使增殖细胞核抗原(PCNA)表达明显降低,而且研究发现蜂毒素的增殖抑制作用与蜂毒素的剂量在一定程度呈正相关[5]。杨志林等[6]研究发现大剂量蜂毒素能够通过直接杀伤肿瘤细胞,从而抑制肿瘤细胞生长,而且其研究发现蜂毒素对正常细胞组织的生长发育并无异常...  (本文共3页) 阅读全文>>