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黑曲霉酸性蛋白酶酶学性质的研究

对黑曲霉菌株ANS1产酸性蛋白酶基本酶学性质的研究表明:酸性蛋白酶适宜pH在2.5~4.0之间,在pH为3.5时,相对酶活最高;适宜温度在40~50℃之间,在45℃时,相对酶活最高;酸性蛋白酶有着较好的热稳定性,曲酶粉在80℃保温至  (本文共4页) 阅读全文>>

华南理工大学
华南理工大学

白曲霉酸性蛋白酶在无孢黒曲霉SH-2中的表达研究

酸性蛋白酶是适宜在pH 2-6条件下,有效水解蛋白质为氨基酸和小肽的酶类。由于酸性蛋白酶水解作用发生在酸性环境下,通常不会出现由于细菌繁殖而引起的腐化及变质,因而被广泛地应用于酿酒、饲料、皮革、医药等工业中~([1])。目前研究的酸性蛋白酶主要来源于米曲霉、黑曲霉和宇佐美曲霉,而对白曲霉来源的酸性蛋白酶研究较少。本文采用低蛋白背景的无孢黑曲霉SH-2为宿主,以白曲霉酸性蛋白酶为基因供体,构建了一株能表达白曲霉酸性蛋白酶的重组菌株。主要研究结果如下:(1)生物信息学分析白曲霉酸性蛋白酶属于天冬氨酸蛋白酶家族,该酶共有394个氨基酸,前20个氨基酸为信号肽,预测在氨基酸序列39处的-N-K-T是N-糖基化位点,此蛋白是亲水性蛋白。模型呈现凹槽状,两个活性中心位于凹槽内,有3个Zn结合位点,1个二硫键。(2)白曲霉酸性蛋白酶表达重组菌株经100 mL淀粉摇瓶培养168 h后,酶活为240 U/mL,SDS-PAGE分析,白曲霉酸性蛋白...  (本文共69页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国饲料》2006年10期
中国饲料

黑曲霉酸性蛋白酶酶学性质的研究

对黑曲霉菌株ANS1产酸性蛋白酶基本酶学性质的研究表明:酸性蛋白酶适宜反应pH为2.5~4.0,在pH为3.5时,相对酶活力最高;适宜温度为40~50℃,在45℃时,相对酶活力最高;酸性蛋白酶有着较好的热...  (本文共4页) 阅读全文>>

沈阳农业大学
沈阳农业大学

表达蛋白酶的米曲霉工程菌构建及发酵特性研究

丝状真菌米曲霉是发酵工业的重要菌种,具有良好的蛋白分泌能力和较高的食品安全性。本研究应用分子生物学技术,重组构建了5株新型米曲霉工程菌,将其应用于豆粕原料的发酵,比较和研究了外源蛋白酶基因的导入对米曲霉发酵作用的影响,并对菌株所表达的外源蛋白酶进行了分离纯化及酶学特性的研究。研究结果对于以米曲霉为宿主的外源基因的转化和调控,以及米曲霉优良菌株的选育具有重要的意义。本研究首先应用PCR扩增的方法从地衣芽胞杆菌、短小芽孢杆菌和黑曲霉中扩增到了3个碱性蛋白酶基因和3个酸性蛋白酶基因。运用生物信息学的方法对蛋白酶基因进行序列分析和氨基酸序列预测。以双元表达载体pCAMBIA1304为载体骨架,通过连入米曲霉高效表达元件淀粉酶启动子和糖苷酶终止子构建米曲霉表达阅读框。在表达阅读框中分别连入单个外源蛋白酶基因,构建了4个表达载体paa-subC、paa-asp、paa-Ap、paa-pep。采用以自剪切肽(T2A肽)作为连接的策略,将两个碱...  (本文共142页) 本文目录 | 阅读全文>>

东北农业大学
东北农业大学

白曲霉酸性蛋白酶在黑曲霉中的表达研究

酸性蛋白酶是具有较低的最适pH(2~4)并能在低p H条件下,有效水解蛋白质为氨基酸和小肽的酶类。酸性蛋白酶主要来源于动物的脏器和微生物生长分泌产生,许多微生物都具有产生酸性蛋白酶的能力。它于本世纪50年代,首先于黑曲霉中被发现,80年代初我国开始通过黑曲霉固体或液体发酵法生产酸性蛋白酶。随后应用领域不断扩大,在酒精、白酒、啤酒、酿造、饲料添加、皮革加工以及医药等行业的需求量也逐步增加。肇东市日成酶制剂有限公司的固态发酵酸性蛋白酶具有液态下稳定的特点,克服了大多数液体酸性蛋白酶保存期短的缺点。但是,较之液态发酵所具有的机械化程度高、技术管理严格、酶产率高以及质量稳定、产品回收率高等特点,固态发酵的生产方式限制了其大规模的生产和应用。本实验选用适合于液态发酵的糖化酶生产菌黑曲霉CICC2462为转化受体菌,用以表达该酸性蛋白酶,为创制高产液态下稳定的酸性蛋白酶菌种探索新的途径,具有重要应用价值。实验主要研究结果如下:1.固态发酵酸...  (本文共48页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
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产凝乳酶霉菌菌种的诱变选育及其酶学性质研究

产凝乳酶霉菌菌种的诱变选育及其酶学性质研究内容隶属于国家高技术研究发展计划(863计划)(No. 2006AA10Z306);农业部现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目(编号:nycytx-0502)。黑曲霉及微小毛霉具备生产多种胞外水解酶的能力。从实验室收集与保藏的3株黑曲霉和3株微小毛霉菌株中以凝乳活力为指标分别筛选出一株黑曲霉菌株J1和微小毛霉菌株G3;以黑曲霉J1为出发菌株,经过多种方式诱变获得了黑曲霉W2、W5、UV1、U5、C1、P-W1和P-W3;将诱变所得菌株与微小毛霉G3进行比较后发现,后者具有更高的生产凝乳酶的能力,所以选择微小毛霉G3作为实验菌株进行固态发酵工艺研究;探讨微小毛霉凝乳酶粗酶液的提取及分离纯化技术,并对其酶学性质及其在干酪生产中的应用进行了研究。本文获得主要研究结论如下:1.在凝乳酶生产菌的菌种选育研究中发现:(1)对菌株的生长曲线和产酶曲线进行比较后发现:黑曲霉在筛选平板上具有明显的单菌...  (本文共118页) 本文目录 | 阅读全文>>