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Wnt信号通路关键基因β-catenin在RA诱导的P19胚胎性癌细胞神经分化过程中的亚细胞分布

在脊椎动物胚胎发育早期,位于胚胎背方的外胚层形成神经板,神经板卷曲形成神经管,并进一步分化形成中枢神经系统[‘]。在这一过程中,背方外胚层的多潜能细胞分化形成位于神经板或神经管上的神经祖细胞,然后进一步分化成神经前体细胞,神经前体细胞再分化成为各种成熟神经元[‘]。有研究表明,Wnt基因家族成员在神经发育的各阶段起着非常重要的作用。该基因家族成员均为分泌型蛋白,已发现的所有该基因家族成员的蛋白均含有350-380个氨基酸残基,且具有1个或多个N一连接的糖基化位点,在开放阅读框中具有23或24个非常保守半眈氨酸残基[引。Wni基因家族各成员在神经发育的不同时间及空间上有特异性的表达:如在9.5到12.5d的小鼠胚胎中,Wnt-7b在端脑及脊髓中表达;而Wnt-3a在从端脑一直到脊髓的神经管背方均有表达;Wnt-3和Wnt-7a分别在从间脑到脊髓的神经管的背、腹方表达;Wnt-l在间脑、中脑、中一后脑交界区域及脊髓上特异表达;Wnt...  (本文共8页) 阅读全文>>

广西大学
广西大学

小鼠胚胎干细胞培养及神经分化的研究

1.剪刀切割结合针头挤压小鼠胎儿组织能有效获得均匀、大小适中并容易贴壁生长的小组织块。将这些组织块培养48h,大量的梭形细胞从贴壁小组织块的边缘游离出的,细胞密度大,细胞生长旺盛,很快形成原代小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)单层。MEF用5μg/ml的丝裂霉素处理2.5-4h,10μg/ml的丝裂霉素处理1-4h或20μg/ml的丝裂霉素处理1-2.5h均可有效抑制其分裂,并保持细胞的正常活力;用14、21、28GRAY的γ射线处理,亦可有效抑制MEF的分裂,保持细胞的正常活力。2.小鼠ES细胞解冻后,在饲养层培养体系用含LIF(1000U/ml)的完全培养液培养48h时,ES细胞形成边界清晰光滑的克隆,克隆内细胞排列紧密,难以辩认单个细胞,克隆边缘未见分化细胞;此时Oct-4细胞表达强烈的Oct-4-GFP绿色荧光,RT-PCR检测到细胞有高水平的Oct-4 mRNA,碱性磷酸酶AKP反应结果呈强阳性,表明细胞处于良好的未分化形态...  (本文共137页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

NSSR1在神经分化中的表达调控及功能研究

本论文的主要研究方向是探索神经细胞分化、成熟过程中,前体 mRNA 剪接调控因子的表达调节及相关功能。为此,我们首先建立了小鼠神经干细胞的体外分离、培养和诱导分化的细胞模型。用此模型,我们检测了数种剪接相关蛋白(Zis,Tra2β,hnRNP-R 和其他磷酸化 SR 蛋白)在神经干细胞分化成成熟神经细胞过程中的表达调节。由结果可知:1)在小鼠皮层和脊髓来源的神经干细胞(cNPC 和spNPC)中以及在分化和未分化的神经干细胞中 hnRNP R 的表达没有明显的差异。2)Zis 的表达不受分化的影响。 但是,在 NPC 中表达的 Zis 蛋白的分子量大于sp在 NPC 中的 Zis 蛋白。此种差异可能由于在 NPC 和 NPC 中的 Zis 蛋白具有不同c sp c的亚型或不同的蛋白修饰状态。3)Tra2β的表达随神经干细胞的分化而下调,且其在 NPC 比 NPC 中的表达偏低。4)与 Tra2β...  (本文共156页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
浙江大学

胚胎干细胞同步化处理、神经分化及Aβ对分化神经元NFκB通路的影响

胚胎干细胞(ESC)诱导分化为神经细胞的体外模型类似早期的胚胎发育模式,利用此模型,辅之以分子生物学、细胞生物学及免疫学等技术手段,可以有效进行神经发生分化及一些遗传性神经致病机制的研究。胚体(EBs)是ESC分化前形成的团聚体,在ESC神经分化过程中具有承前启后的作用,EBs内细胞的周期状态与诱导分化的关系未见报道。无血清培养方法诱导神经分化过程中,碱性成纤维生长因子(bFGF)是EBs贴壁后诱导分化阶段必须添加的生长因子,bFGF可能在ESC神经诱导分化阶段发挥神经营养作用,但由于bFGF能触发体外培养的皮层神经元释放兴奋性递质谷氨酸(Glu),故也可能在神经诱导分化阶段发挥神经刺激兴奋性的作用。利用ESC诱导分化为神经细胞的体外模型可以从神经发育学的角度分析阿尔茨海默症(AD)的发生机制,尤其是神经元从分化发生到凋亡或死亡的发育模式,为我们在体外研究β-淀粉样蛋白(Aβ)对不同年龄阶段神经元的影响提供了可能。首先,建立了基...  (本文共96页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津工业大学
天津工业大学

弱激光联合脑脊液对间充质干细胞神经分化的影响

弱激光疗法(LLLT)作为一种安全可靠的物理干预手段,低能量激光照射机体组织后,激活特定光受体,引起光热效应、光化反应、光敏反应等生物调节作用,调节机体免疫系统、神经系统、血液循环系统微环境,调整细胞恢复至正常水平。一方面,LLLT可以提高细胞增殖能力,另一方面,在特定波长下激活干细胞多向分化的潜能。干细胞移植成为药物治疗、手术治疗之后的新一轮医疗技术革命。当前,生物因子诱导干细胞神经方向分化是最为安全的手段,但诱导周期长,细胞活性大大减弱;化学诱导干细胞神经方向分化效率高,但细胞易受到化学毒性的影响,危险性是其最大的弊端。基于当前研究现状,本文从细胞分子角度探讨LLLT联合生物诱导剂的干预手段对干细胞定向神经分化的引导调控作用,为LLLT的临床应用提供理论支持。体外提取、鉴定及培养人脐带间充质干细胞(hUCMSCs),流式细胞仪对提取细胞的表面抗原CD31、CD34、CD73、CD90、CD105表达量检测,结果表明提取细胞为...  (本文共76页) 本文目录 | 阅读全文>>

苏州大学
苏州大学

仿生合成糖胺聚糖类似物促进胚胎干细胞神经分化的研究

糖胺聚糖是一种直链的天然多糖高分子,其中结构最为复杂,功能最为广泛的一类是肝素/硫酸乙酰肝素(HP/HS)。HP/HS在生物体内以游离链、脂多糖和蛋白质多糖的形态存在,其通过分子链结合生长因子、细胞因子、趋化因子、成形素和酶等多种生物活性分子,从而对生命活动起到调节作用。具备磺酸基团的类肝素聚合物的生物活性和HP/HS相近,且同天然HP/HS比较,类肝素聚合物能够更专一、更高效地促进胚胎干细胞神经分化。类肝素聚合物的结构、聚合度以及浓度会影响其与生物活性分子的结合与释放的能力,同时磺酸基团对类肝素聚合物功能起到关键作用,因此研究类肝素聚合物结构磺酸单元的不同对其功能影响具有重要意义。本课题选取不同结构的磺酸单体,利用可逆加成-断裂链转移聚合(reversible addition-fragmentation chain transfer polymerization,RAFT polymerization)制备了三种不同结构的类...  (本文共81页) 本文目录 | 阅读全文>>