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一株高产纳豆激酶菌株的筛选及其发酵条件的优化

自1987年日本科学家须见洋行发现纳豆中含有纳豆激酶以来,由于纳豆激酶具有无毒副作用,体内半衰期长,成本低廉等其他溶栓剂无法比拟的优点,有潜力成为新一代抗栓药川,受到了各国医药企业的重视,同时也受到各国科学家的关心121。因此筛选高产纳豆激酶的菌株就有很大的意义。本实验通过紫外线诱变获得了一株高产纳豆激酶的纳豆芽抱杆菌菌株.材料Ll菌株纳豆枯草芽抱杆菌华中农业大学食品微生物实验室提供。12试剂纤维蛋白原Sigma公司:凝血酶三九集团昆明白马制药有限公司;尿激酶Caibiochem公司:琼脂糖Biowest公司。L3方法L3.1芽抱悬液的制备无菌取49纳豆搅碎,加40ml无菌水混合均匀,80℃水浴2肠皿in,然后48(X树min离心10而n取上清分装,4℃保存。13.2紫外诱变紫外灯(照射距离30Cm)预热30而n后,照射涂布了芽抱悬液的营养琼脂平板表面(0 .1回,芽抱浓度为1.slx 103/ml)。照射时间分别为:第一组30...  (本文共5页) 阅读全文>>

江西农业大学
江西农业大学

纳豆激酶液态发酵提取工艺及酶性质的研究

纳豆激酶是由枯草芽孢杆菌亚种纳豆菌发酵产生的一种酶,该酶安全无毒且成本低廉和能口服吸收,具有不易引起出血、无抗原性、半衰期长等优点,是一种良好的溶血栓的保健食品。本试验为开发新一代的纳豆激酶胶囊,做了如下探讨:(1)本文从山东临沂豆豉和纳豆菌粉中分离得到数株产蛋白酶能力菌株,通过液态发酵测定蛋白酶活力,筛选出一株高产蛋白酶的菌株并命名为BN。对BN进行菌落特征、细胞形态、生理生化试验以及16s rDNA分子生物学鉴定,确定该菌株为纳豆芽孢杆菌。(2)将上述分离纯化的菌株BN进行发酵产酶条件的优化,通过测定种子液中的OD660nm确定其最适种龄为15~20h。利用单因素试验优化的发酵碳源和氮源分别为:可溶性淀粉和酵母膏;采用正交试验确定的无机盐最佳的添加量为K2HPO4 0.1%、KH2PO4 0.1%和CaCl2 0.05%;利用响应面设计法分析优化的发酵条件为接种量3%,温度40℃,pH7.0,发酵时间84h;在优化条件下产生...  (本文共66页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中农业大学
华中农业大学

高产纳豆激酶菌株的筛选及其酶学性质的研究

纳豆激酶(Nattokinase,NK)是日本传统发酵食品纳豆在发酵过程中由纳豆枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)产生的一种有纤溶活性的丝氨酸蛋白酶。研究表明,NK具有很强的溶解血栓功能,与目前临床所用的尿激酶、链激酶等溶栓药物相比,NK具有安全性好,易被人体吸收,作用直接迅速,药效持续时间长,可由纳豆枯草芽孢杆菌直接发酵生产因而造价低廉等优点。因此许多学者预言,NK将是一种很有潜力的新型溶栓药物。本论文通过对原始菌株进行紫外诱变、纤维蛋白平板初筛、摇瓶发酵复筛的方法筛选出一株高产NK的纳豆枯草芽孢杆菌BSN-3菌株,并对BSN-3菌株所产NK的分离纯化及理化性质等展开了系列研究。通过计算紫外照射芽孢的致死率,确定诱变时间为4min。通过纤维蛋白平板筛选和酪蛋白平板筛选结果的比较,发现酪蛋白平板筛选结果并不可靠。通过单因素实验和正交实验研究了液体发酵产NK的最佳条件。结果表明优化培养基组成为:胰蛋白胨...  (本文共64页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东轻工业学院
山东轻工业学院

纳豆激酶高产菌株筛选及发酵工艺优化研究

纳豆激酶(Nattokinase简称NK)是由纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtils natto)代谢产生的一种丝氨酸蛋白,于1987年由日本学者须见洋行在纳豆食品中发现并取名。纳豆激酶具有良好的溶解血栓的功效,与传统的溶栓药物链激酶、尿激酶相比具有药理作用直接且多元化、体内半衰期长、分子量相对较小可直接通过胃肠系统被人体吸收、安全性高、价格便宜等诸多优点。因此就如何提高纳豆激酶活性这一研究在世界范围内引起普遍关注。本实验从日本进口的纳豆食品中分离得到了一株产纳豆激酶较高的菌株,并通过紫外线照射对该菌株实施诱变,根据纳豆芽孢杆菌致死曲线确定菌株的诱变照射时间。经多次诱变之后,得到产酶能力更高的菌株(暂命名YNS-1)。以筛选诱变后的高产菌株为出发菌株,对高产纳豆激酶发酵培养基组成及培养条件实施优化,优化后的发酵培养基成分及培养条件如下:发酵培养基的最佳氮源为发芽豆粉,添加量为8g/100mL;最佳碳源为葡萄糖,添加量为2...  (本文共63页) 本文目录 | 阅读全文>>

安徽农业大学
安徽农业大学

一株高产纳豆激酶的纳豆枯草芽孢杆菌的研究

纳豆,是指以大豆为原料经纳豆枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)发酵而成盛行于日本的传统发酵大豆食品。纳豆周围的黏性物质聚谷氨酸中含有一些具有生理活性的物质如纳豆激酶(Nattokinase,NK)、纳豆菌、血管紧张肽转化酶抑制剂、维生素K2、吡啶二羧酸、异黄酮等,具有抗肿瘤、溶血栓、降血压、抗氧化性、防止骨质疏松、抑菌等多种保健功能。纳豆枯草芽孢杆菌是从日本传统食品中分离出来的菌种,其原始菌株与枯草芽孢杆菌相同,是枯草芽孢杆菌的一个亚种。纳豆激酶是由纳豆枯草杆菌产生分泌到细胞外的具有强烈溶栓功能的碱性丝氨酸蛋白酶,是一种枯草杆菌蛋白酶。纳豆激酶具有很强的纤溶活性和良好的溶栓能力,可用于治疗和预防心血管疾病。纳豆激酶来源于传统发酵食品,无副作用,安全性高,符合治疗血栓病的药品和功能性保健食品基料的要求。本文主要进行了纳豆枯草芽孢杆菌菌株的筛选、纳豆激酶酶活的测定方法的探索、纳豆固体发酵产纳豆激酶的条件优...  (本文共77页) 本文目录 | 阅读全文>>

贵州大学
贵州大学

高产纳豆激酶菌株的筛选及其酶学稳定性的研究

纳豆激酶是一种具有潜力的溶栓药物。它能够有效减缓血栓的形成,且溶栓作用明显高于同等剂量的尿激酶,同时它也能够通过蛋白水解作用直接溶解纤维蛋白凝块。本论文从贵州本土特色食品中分离筛选出的高产纳豆激酶的菌株,通过对其进行综合性能评价,包括安全性能、益生性能和发酵性能的评价。在此基础上采用主成分析,找到综合性能最好的一株高产纳豆激酶菌株。通过丙酮沉淀法和反胶束萃取法相结合对粗酶液进行纯化得到电泳纯的纳豆激酶,最后采用多种化学修饰相结合的方法对纳豆激酶进行酶学改造,并研究其酶学稳定性。首先本实验采用酪蛋白平板法和琼脂糖—纤维蛋白原平板法从贵州本土特色食品的样品中分离出能水解酪蛋白的菌株,并得到78株菌产纳豆激酶的菌株。通过对15株高产纳豆激酶菌株的菌落形态和菌体形态观察,初步判断15株高产纳豆激酶菌株均为芽孢杆菌属(Bacillus)。最后通过紫外分光光度法对筛选得到的15株高产菌株进行纳豆激酶酶活力精确测定。测得菌株GUJN05产酶能...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>