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耐高温α-淀粉酶高密度高表达发酵条件的优化

α-淀粉酶作为淀粉酶的一种,是目前一类最重要、最古老、应用范围最广的工业酶制剂之一,其中耐高α-淀粉酶凭借其热稳定上的优势经占据很大的市场。用耐高温α-酶代替普通α-淀粉酶起到推动新工艺新技术的运用与研究,降低消耗、降低成本的作用。近年来,我国耐高温α-淀粉酶的产量和出口量逐年增长,但生产成本愈来愈高,利润空间日渐趋小[1-3]。因此如何能以最低投入,实现单位发酵液的最高目的蛋白表达量,成为发酵工业生产中研究的重点。本研究室从海底热液口获得了一株超嗜热古菌Thermococcus siculi HJ21,该菌株分泌的耐高温α-淀粉酶的最适作用温度为95℃,在100℃仍有60%的酶活力,酶的最适作用pH5.0,在pH4.5仍有80%的酶活力,酶在90℃的半衰期为5h,在100℃作用2h仍有40%的残余酶活力,酶的热稳定性不依赖Ca2+,比较符合淀粉工业加工过程中所需要的条件。对超嗜热古菌Thermococcus siculi HJ...  (本文共7页) 阅读全文>>

《生物工程进展》1988年01期
生物工程进展

日两家公司计划用基因重组菌工业生产酶

才求生化工业公司和天野制药公司分别向通产省提户吧基因重组芽抱杆菌属(BacilluS)的菌用于酶的工业生产的计划书,符合所使用的设备,装置及其运转管理方法等“重组DNA工业化指南”,于5月27日得到了通产省的认可。 根据这次制造计划的认可,工业用酶的重组生产在日本将转向工业化。通产省还认可一J’在出售产品样品时也符合“重组DNA工业化指南”所规定的安全性标准。 因此,这次的制造计划何时转入正式工业化是难以预料的,但如果近期可以工业化,工业用酶的重组生产化也许会成为世界的先例。 在丹麦NOVO公司的日本法人承担制造部门的才求生化工业公司,以枯草菌为宿主的工业生产工业用酶的计划,得到了通产省的认可。NOvo公司发表了用基因操作把耐热性的新淀粉酶“TS一25”的商...  (本文共1页) 阅读全文>>

《国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册》1989年04期
国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册

预防新生仔猪肠毒性大肠杆菌病的DNA重组菌毛菌苗的研制及保护效果

由四个不同的大肠杆菌株(k88ac、k88ab、k99和987p)制备高分子量质粒DNA,通过克隆EcoRI、Hindlll或Ban Hl部分消化片段成为高拷贝质粒载体,用于构建各自的Dl订A库。用kssae、k88ab、k99和987p菌毛特异性抗血清作菌落免疫检测,筛选出表达四种菌毛的DNA库。从所有DNA库中分离出阳性克隆,并加以鉴定。选择表达k88ab、ks3ae、k99和gs7p菌毛的重组质粒。携带四种重组质粒的宿主细胞被分别发酵,加热到60‘℃使其释放菌毛并将培养液离心。超滤纯化上清液中的大肠杆菌菌毛,用聚丙烯酞胺凝胶电泳和激光密度计测定菌毛含量。由这四个血清型(k88ae、k88ab、k99和987p)的菌毛等量混合后加油佐剂配制成菌苗。 对在怀孕期用菌毛菌苗或安慰剂接种的母猪所生仔猪,进行对照攻击试验,测定疫苗效果。仔猪在生后18小时内经...  (本文共2页) 阅读全文>>

江南大学
江南大学

双基因共表达策略对高山被孢霉重组菌合成EPA的作用研究

二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid,EPA)是一种ω-3系列长链多不饱和脂肪酸,具有抗凝血、预防心血管疾病、降血脂等特殊生理功能,在保健品、食品和饲料行业均有较多的应用。产油微生物高山被孢霉(Mortierella alpina,M.alpina)已用于工业化生产花生四烯酸(Arachidonic acid,AA),其AA产量约占总脂肪酸的50%,常温条件下不产EPA,低温条件下EPA产量仅占总脂肪酸含量的2%左右。ω-3脂肪酸脱饱和酶具有催化AA生成EPA的作用,是ω-3长链多不饱和脂肪酸合成途径中的关键酶。本实验室前期成功将来源于寄生疫霉的脂肪酸脱饱和酶oPpFADS17在高山被孢霉中进行表达,重组菌中EPA含量显著提高。而还原力NADPH在脂肪酸合成过程中起关键作用,实验室前期成功将产生还原力的关键基因葡萄糖-6-磷酸脱氢酶G6PD2在高山被孢霉中进行了表达,重组菌中总脂肪酸含量得到提升。本文为了同步...  (本文共53页) 本文目录 | 阅读全文>>

广西大学
广西大学

产降氰酶重组菌BL21-pET28a-cdE的氰代谢及特性研究

来自腈超家族的氰水解酶和氰水合酶均可水解HCN,氰水解酶的水解产物为甲酸和氨,而氰水合酶的水解产物为甲酰胺。因产物低毒,可进一步转化,不需要辅助因子和酶活高的优点,二者是最引人关注的氰化物降解酶。本实验前期得到一株克隆于产碱杆菌DN25降氰酶基因的重组菌BL21-pET28a-cdE,已经证明其降氰酶催化水解KCN的产物有甲酸、甲酰胺和氨,同时具有氰水解酶与氰水合酶的功能。本文在前期实验的基础上进一步探讨其催化功能。首先,我们研究了重组菌BL21-pET28a-cdE的稳定性、酶纯化以及添加稳定剂对酶保藏的影响,结果显示,重组菌BL21-pET28a-cdE在无抗生素压力下,传150代后质粒丢失了 34%,但在蛋白表达水平上仍与原代保持同一水平,且菌落形态与原始形态完全一致,其降氰酶酶活力与原代相比保留有99%。经过改善纯化方法,经三步梯度洗脱法镍柱纯化得到单一条带的目的蛋白(约38 kDa)。确定了 cdE纯酶的最适反应条件为...  (本文共77页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京化工大学
北京化工大学

聚3-羟基丙酸重组菌构建及代谢调控

聚3-羟基丙酸(P3HP)是一种极具开发前景的聚羟基脂肪酸(PHA)。P3HP作为新型高分子生物材料,其不仅具有良好的生物兼容性、可降解性和较高刚性,还具较好延展性和拉伸性能等,被视为塑料最佳替代品。目前,自然界中尚未发现能够天然合成P3HP的微生物,且P3HP化学合成存在很大局限性,因此,利用微生物法生产P3HP尤为迫切。本课题选取肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniaeMGH78578)为宿主,甘油为底物,通过甘油脱水酶(DhaB)、辅酶A依赖的丙醛脱氢酶(PduP)和PHA合酶(PhaC)的催化完成P3HP的积累。研究以下内容:1、成功克隆了来源于罗尔斯通氏菌(Ralstonia eutropha H16)的phaCl和来源于集胞藻(Synechocystis sp. PCC6803)的phbC,构建了两株重组菌K. p(pET-pk-phaCl)和K. p(pET-pk-phbC),发酵检测两重组菌中并...  (本文共112页) 本文目录 | 阅读全文>>