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流式细胞仪与鼻咽癌石蜡包埋组织DNA含量分析

本文对鼻咽中高分化角化型鳞癌、梭形细胞癌、低分化非角化型鳞癌和泡状核细胞癌的DNA含量进行测定,以探讨各类型癌的生物学特征并对石蜡包埋组织的一些分析细胞技术作了探讨。1材料与方法1.1病例H样本选择选择1987年以来经汕头大学医学院病理诊断为鼻咽癌病人63例,其中角化型鳞癌11例,梭形细胞癌7例,非角化型鳞癌33例,泡状核细胞癌12例。年龄24~73岁,平均49岁,男:女为1.7:1。将各例癌组织蜡块和颈部正常淋巴结蜡块(供对照用)各切取45~SOUn。厚切片数片供制备单细胞样本,同时切取SPin厚癌组织切片供HE染色。l.2单细胞样品制备简单介绍如下:①二甲苯浸泡脱去组织片蜡层;②用浓度递减的乙醇,置换二甲苯,再入蒸馏水;MHI.5,O.5%的胃蛋白酶,37C消化30min(每隔IOmin振荡一次),用PBS液中止消化;④35O目尼龙网过滤,离心(1500~min,smin)去涤上清液,显微镜下确认获得单细胞是液,调整细胞数至...  (本文共5页) 阅读全文>>

《卫生职业教育》2008年03期
卫生职业教育

浅谈从石蜡包埋组织中提取DNA的方法及体会

用于聚合酶链式反应(PCR)扩增的从石蜡包埋组织中提取DNA的方法在理论上非常简单,但在实际操作中并非如此。必须先溶解组织切片中的石蜡,然后处理组织释放DNA。在实验过程中每一步骤都必须严格要求,否则提取的DNA就不理想,影响下一步实验。本文就从石蜡包埋组织中提取DNA的方法谈一些体会。1样品制备与固定效果固定石蜡包埋材料,用以PCR扩增为基础的研究成功与否取决于组织制作中使用的固定剂、固定持续的时间、石蜡块的保存时间、要扩增DNA片段的长短。1.1固定剂[1]动物组织常用的固定剂是福尔马林,其他固定剂如乙醇和B-5(甲醛15ml、95%乙醇加8g水杨酸80ml、1%鞣酸1ml)等也有应用,不同的固定剂对结果影响很大。固定的影响是用组织中的DNA作为模板对增长扩增DNA片段的能力来衡量的,每种固定方法的影响可通过获得产物最大长度来反映。研究表明,乙醇和含乙醇类固定剂对RNA和DNA的PCR的影响均小于其他固定剂,可能是由于甲醛和...  (本文共2页) 阅读全文>>

《白血病.淋巴瘤》2006年03期
白血病.淋巴瘤

石蜡包埋组织DNA含量的流式细胞分析对恶性淋巴瘤的诊断价值

恶性淋巴瘤的诊断主要依赖于病理学和免疫组织化学,在淋巴组织结构破坏不明显和肿瘤组织细胞分化相对成熟时(如成熟小细胞恶性淋巴瘤),对恶性淋巴瘤与淋巴结反应性增生的鉴别存在一定的争议[1]。我们采用流式细胞术分析了48例恶性淋巴瘤和30例淋巴结反应性增生(RLN)的石蜡包埋组织的DNA含量,探讨了恶性淋巴瘤DNA倍体和细胞周期变化,以期为恶性淋巴瘤的鉴别诊断和临床分期、分类提供帮助。1资料与方法1.1研究对象对照组取2002年1月至2004年12月我院经病理确诊RLN石蜡包埋组织30例。病例组选取同期恶性淋巴瘤48例。其中霍奇金淋巴瘤(HD)3例,非霍奇金淋巴瘤(NHL)45例(B细胞-NHL35例,T细胞-NHL9例,组织细胞-NHL1例)。根据AnnArbor方案予以临床分期:Ⅰ期15例,Ⅱ期13例,Ⅲ期19例,Ⅳ期1例。1.2方法1.2.1单细胞悬液制备切取50μm厚石蜡组织片2~4片,置于二甲苯中脱蜡48h。依次经乙醇梯度水...  (本文共3页) 阅读全文>>

《第四军医大学学报》1980年10期
第四军医大学学报

石蜡包埋组织中结核杆菌DNA的检测

石蜡包埋组织中结核杆菌DNA的检测邹菊贤1刘茂贤1郭天程2齐为民1郭力1(1第四军医大学唐都医院检验科西安7100382西安空军医院呼吸科)关键词石蜡包埋结核杆菌DNA检测中图号R3650引言分子生物学技术把结核病的诊断提高到了分子和基因水平,从而提高了诊断的敏感性和特异性,并为结核病的临床流行病学提供了一种可靠的检测手段.目前,从痰、胸腹水、血液等检测结核杆菌DNA已有报道.本研究采用PCR对石蜡切片组织中结核杆菌(TB)DNA进行检测,以探讨其在临床上应用价值.1材料和方法1.1组织标本由空军南京医院、空军西安医院和我院病理科提供自1990年1994年间石蜡包埋组织标本共75例.结核组:肺结核6例,淋巴结核13例,腰椎结核4例,肾结核5例,其他如输尿管、肠、腹膜、附睾等部位结核7例,共35例;非特异性淋巴结炎组(简称淋巴结炎组):临床上不同程度的局部或全身性浅表淋巴结肿大等30例.10例胎儿组织作为正常对照.1.2引物和主要...  (本文共2页) 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

福尔马林固定、石蜡包埋组织中提取DNA的实验研究

目的探讨福尔马林固定、石蜡包埋组织中提取DNA的最佳方法。方法①根据石蜡切片厚度(2.5μm、5.0μm、10.0μm)、组织切片脱蜡时间(切片脱蜡2次,时间分别为2小时、2小时和2小时、12小时)、消化液中蛋白酶K浓度(125μg /ml、250μg /ml、500μg /ml、1000μg /ml)、组织消化时间(4小时、8小时、12小时、24小时)等参数的不同,排列组合出96种不同条件,分别用于提取DNA。②石蜡组织连续切片,切片在二甲苯恒温水浴中振荡脱蜡后无水乙醇漂洗,真空干燥,加入细胞裂解液(自制),恒温水浴中振荡消化组织,苯酚/氯仿/异戊醇反复抽提,醋酸钠沉淀DNA,离心去上清,保存DNA备用。③不同方法提取的DNA量的检验:稀释200倍的DNA溶液用分光光度计在260nm和280nm分别读出光密度值,即OD260值和OD280值,DNA含量为:OD260值×10(μg/μl)。④不同方法提取的DNA质的检验:所有标...  (本文共47页) 本文目录 | 阅读全文>>

《刑事技术》2000年01期
刑事技术

死后组织DNA变化与死亡时间关系的研究

如果能估计死后间隔时间(postmortem lute。al,后,离心 1500r/min,去碎片,70%冷酒精固定,碘化丙PMI),人们将很容易推测死亡时间。因此,调查 PMI的 陡(Proidium iodide,PI,Sigma公司产品)染色0.shZh,长度,便成了法医学者为解决这一问题所必须追寻的(染液含 PI 50pg,RNA酶 10 pg/ml,l%triton-100),目标。用于推测PMI的方法较多,利用尸温的下降速度 染色前去酒精,生理盐水漂洗,离心去上清后加萤光染与死后时间的曲线关系来推测死亡时间,是最基本和 液,染色样本Zh内检测完毕。常用的有效方法,但有诸多因素会影响这个过程’‘-”。1.3 流式细胞仪测量玻璃体液离子的含量分析被认为是特异性的“死后之FACS-420流式细胞仪(美国BO公司),使用波长窗”咖stmortem window),对推测早期死亡时间极具价 488urn,功率 15MW,氖离子...  (本文共3页) 阅读全文>>