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CYP2 B6基因表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达

CYP450(cytochrome P450)系统是机体对内、外源性物质,尤其是药物进行生物转化的重要酶系。CYP450是一个超家族,目前已确定的人类CYP450分属于18个家族,42个亚家族[1]。在人体药物代谢过程中,主要有CYP1、CYP2和CYP3 3个家族。CYP2B6是CYP2家族中重要成员之一,它在肝脏中表达量差异比较大,可能与启动子区域单个核苷酸多态性(SNP)有关[2];另外,在其他位置的SNP与酶的活性变化也有一定的关系[3,4]。这种遗传性因素决定着一些药物的个体化用药,如影响到CYP2B6的酶活性,或涉及到CYP2B6代谢的药物。为了更好地研究药物对CYP2B6酶活性的影响,筛选药物之间的相互作用,迫切需要在体外进行相关试验。本研究的目的是在大肠杆菌中进行高水平表达CYP2B6,为体外活性研究打下基础。1材料与方法1·1主要试剂大肠杆菌(Rosetta2(DE3)pLysS、XL-1)为本室保存菌种;含有...  (本文共4页) 阅读全文>>

《Acta Biochimica et Biophysica Sinica》1987年05期
Acta Biochimica et Biophysica Sinica

人成熟干扰素αD基因表达质粒的组建与分析

近年来,在国际上人干扰素(I FN)系统受到广泛的重视,这是由于基础理论研究所取得的成就及导致它具有实际应用的前景。但是生产天然的人千扰素必须要付出昂贵的成本,而利用基因工程手段可获得较大量的低成本干扰素,且不含糖的千扰素的基因工程产品与天然的基本一致。在国内,候云德等已于1982年成功地从人白细胞染色体中诱导并克隆出了人干扰素基因山,陆长德等人用结构分析法证明它为人千扰素“D亚型川。人工FN-。D基因通过重组获得了在各种启动子如lac、PL、七ac等控制下的重组体,已在大肠杆菌中分别得到表达。~”。但在这些工作中,表达的干扰素分子均含有一些信号肤的氨基酸,而临床所需要的干扰素是不含信号肤的成熟干扰素分子。天然人干扰素都含有信号肤部分,在细胞分泌时被切去而成为成熟分子。而在大肠杆菌中,不能完全正确切去信号肤,所以必须在基因重组时先切去编码信号肤部分的基因顺序,成为成熟干扰素基因,再把它重组入表达载体,才能够在大肠杆菌中表达出成熟...  (本文共9页) 阅读全文>>

中国医科大学
中国医科大学

Alzheimer病Aβ_(3-10)和CpG基因表达质粒的构建和表达鉴定

Alzheimer病AB_(3-10)和CpG基因表达质粒的构建和表达鉴定目的随着人口的老龄化发展,老年性痴呆的代表性疾病——Alzheimer病越来越受到人们的注目。它的发病率在老年性痴呆中占第一位,世界上65岁以上人群中患病率在5~10%。据调查,我国60岁以上老年人已达1.29亿,该人群痴呆的患病率为0.5~5.6%,在全部痴呆患者中阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)占50%。因此探讨阿尔茨海默病的发病机制、诊断以及防治具有重要的意义。AD是好发于中老年人的一种神经系统退行性疾病,其临床症状主要表现为认知行为能力下降和行为异常,显著的病理学特征是脑内出现神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles)和B—淀粉样蛋白(B—amyloid protein,AB)沉积形成老年斑(老年斑是老年性痴呆特征性病理改变,B—淀粉样是其主要成分),已有研究发现B—淀粉样蛋白沉积、聚集形成老年斑是...  (本文共42页) 本文目录 | 阅读全文>>

《南通大学学报(医学版)》2007年04期
南通大学学报(医学版)

人类S期激酶相关蛋白2表达质粒的构建

肿瘤发生的共同特征是细胞周期调控紊乱,导致细胞的失控性生长。细胞S期激酶相关蛋白2(S一phase kinase一assoeiated proteinZ,SkpZ)是F一box蛋白家族成员之一,作为seF(Skpl一eullin一F一box)复合体的底物识别亚单位,SkpZ能特异性地识别磷酸化的底物并介导其多聚泛素化及随后的蛋白酶体途径降解111。目前已发现多种细胞周期调控因子,包括肿瘤抑制因子p27‘p,,p13o,p57等都可通过SkpZ介.导的泛素一蛋白酶体途径进行降解氏31。本文运用DNA重组技术成功构建了SkpZ真核表达质粒,为进一步研究SkpZ的生物学功能及其在肿瘤发生、发展、诊断和预后中的作用奠定了基础。1材料与方法Ll材料人类B细胞淋巴瘤细胞系Raji细胞由暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室惠赠。PcDNA3.llmyc一HisA质粒由复旦大学上海医学院基因研究中心惠赠。大肠杆菌DH5a由本实验室常规保存。T...  (本文共3页) 阅读全文>>

《肿瘤防治杂志》2003年02期
肿瘤防治杂志

癌胚抗原与γ-干扰素真核双表达质粒的构建及体外表达

肿瘤的基因疫苗是目前研究的热点之一 ,它可诱导较强烈而持久的体液和细胞免疫 ,清除肿瘤细胞。癌胚抗原 (carcinoembryonicantigenCEA)是一种位于肿瘤细胞浆膜表面的膜结合蛋白 ,是多种消化道腺癌 ,尤其是大肠癌细胞所表达的肿瘤相关抗原。近年研究表明CEA具有一定的抗原性 ,可以作为诱导肿瘤免疫的有效靶抗原[1] 。但其主要不足是由其诱导的免疫应答强度较弱 ,难以达到对肿瘤的治疗作用。如何提高疫苗诱导的免疫反应是肿瘤基因疫苗能否最终应用于临床的关键。γ IFN是一种具有显著免疫调节活性的细胞因子 ,可增强多种抗原诱导的免疫反应 ,具有抗肿瘤和提高机体免疫功能的作用[2 ] ,因此我们选择编码人全长CEA的cDNA与编码γ IFN的cDNA构建共表达质粒载体 ,体外转染真核细胞并检测其表达 ,为增强CEA的DNA疫苗免疫效果的研究奠定研究基础。1 材料与方法1.1 材料含编码人全长CEAcDNA的真核表达质粒p...  (本文共3页) 阅读全文>>

《上海医科大学学报》1960年30期
上海医科大学学报

Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂cDNA表达质粒的构建及其在哺乳动物细胞中的表达

Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂cDNA表达质粒的构建及其在哺乳动物细胞中的表达张欣平,郝勤,孙幼华,陈巍,陈幼妹,宋后燕,朱运松(上海医科大学基础医学院分子遗传学研究室200032)提要建立Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAⅠ-1)cDNA哺乳动物细胞表达体系。用人工合成的6个寡核苷酸连接成编码PAⅠ-1N-端10个氨基酸和23个氨基酸的信号肽顺序;将构成的完整PAⅠ-1cDNA插入真核表达质粒pSV2dhfr中,获得真核表达质粒pZYS-1;将pMA212中的hMT-ⅡA的起动子再插入pZYS-1,使PAⅠ-1cDNA受SV40和hMT-ⅡA双启动子控制,得pZYS-2。2个表达质粒分别在COS-7细胞中进行表达。结果:获得两个真核表达质粒,在COS-7细胞中得到表达,在培养液中的PAⅠ-1活性和抗原含量分别为234.7IU/ml和30μg/L。结论:pZYS-1和pZYS-2两株PAⅠ-1cDNA真核表达质粒在COS-7细胞中能有效表...  (本文共5页) 阅读全文>>