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PCR技术在对虾病原检测中的应用

PCR技术在对虾病原检测中的应用孔杰,刘萍,张岩(中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266003)摘要本文依据PCR技术原理阐述该技术在对虾病原检测中的重要性,总结了PCR技术在病原检测中常用技术路线。结合我们实验室的工作和已发表的资料,文中具体描述了PCR技术在以下几个方面的研究和应用情况。1.检测斑节对虾的MBV(Penaeusmonodon-typebaculovirus),2.检测中国对虾的BV(Baculovirus)",3.检测中国对虾的弧菌病。针对目前中国对虾养殖中遇到的问题,作者还分析今后中国对虾养殖的发展方向及PCR技术,在其中的应用前景。一、刚民聚合酶链式反应(Polymera。eChainR。,action,简称PCR),又称DNA体外扩增技术,是1985年美国Cetu。公司的一项专利技术,被誉为八十年代分子生物学领域的一项革命性突破。在短短的几年中,PCR技术已被广泛应用于生物学的各个领域。在分子生物学...  (本文共4页) 阅读全文>>

中国海洋大学
中国海洋大学

海水养殖动物部分病原检测基因芯片的初步设计

病害严重威胁海水养殖业的可持续发展,如何寻求一种有效的途径来缓解病害给养殖业带来的危害与损失,一直是人们所关注的问题。现有的病原检测技术局限性大、效率低、系统性差,急需一种海水养殖动物疾病高通量检测手段进行策略上的改进,打破技术瓶颈。随着水产动物病原基础信息数据的日渐丰富,水产动物疾病诊断技术的发展趋势不可避免地向着高通量技术方向跨越。本论文根据Lightner蓝皮书、国际兽疫局(OIE)水生动物疾病名录、亚太水产养殖中心网络(NACA)水生动物疾病名录等,选择海水养殖鲽形目鱼类、鲈形目鱼类、对虾类和双壳贝类等宿主的主要病毒、真菌、原生动物等几十种病原微生物作为研究对象,包括14类鱼病毒、14类对虾病毒、鱼立克次氏体、3类真菌以及8类原生动物。针对这些研究对象,在Genbank中共检索收集了27969条相关基因序列,包括海水养殖动物的病原序列26861条,质控系统所需序列1108条。把在Genbank中分别检索到病原微生物的核酸...  (本文共114页) 本文目录 | 阅读全文>>

上海海洋大学
上海海洋大学

对虾白斑综合征病毒和黄头病毒等温扩增检测方法的建立及应用

近年来,水产业迅猛发展,已逐渐成为中国农业中发展较快的产业之一,在全球水产总量中占有举足轻重的地位。但在我国水产养殖规模不断壮大的同时,各种病害也随之而来。对虾养殖业作为我国海水养殖业的支柱产业之一,也深受多种病害困扰,我国对虾养殖业每年因对虾病害流行造成的损失高达数十亿元。利用灵敏、高效的病原检测技术加强对虾苗种或养殖期特定病原的定期检测被认为是防控对虾病害流行的有效手段。等温扩增技术作为一种新兴的检测手段,已经广泛应用于人类医学、动物卫生等相关病原检测中。为了加强两种重要对虾病害——对虾白斑病(White spot disease,WSD)和黄头病(Yellow head disease,YHD)的防控,本研究分别建立了对虾白斑综合征病毒(White spot syndromevirus,WSSV)、黄头病毒(Yellow head virus,YHV)的快速、高灵敏等温扩增检测技术。本研究根据对虾WSSV基因组的保守序列设...  (本文共56页) 本文目录 | 阅读全文>>

暨南大学
暨南大学

基于环介导等温扩增技术的三种对虾病原检测方法的建立与应用

随着人们对对虾食用需求的增加,国内对虾养殖业大规模扩建,存在的对虾病害问题变得尖锐。染病对虾根据早期临床症状难辨其明确病害,而早知早治对对虾养殖业至关重要,常规检测由于其本身缺陷,不适用于现场检测,环介导等温扩增(Lamp)无需循环变温,只需较短时间和较简仪器就能完成高灵敏度、高特异性的扩增。因此本研究针对三种常见且危害极大的对虾病害:肝肠胞虫病、白斑综合症病毒和副溶血弧菌建立Lamp快速检测技术,并将其与便携式现场检测箱结合,形成对虾病害现场检测技术。针对18S rRNA、ORF21、tlh基因建立肝肠胞虫病、白斑综合症病毒和副溶血弧菌Lamp检测方法,在对肝肠胞虫病检测体系进行优化的基础上,进行灵敏度、特异性、实际样品等实验。结果显示检测方法稳定性良好,对相应病害的检出特异性检出,灵敏度均高于PCR方法至少10倍,其中肝肠胞虫病、白斑综合症病毒灵敏度达0.1 fg/μL,副溶血弧菌最低检测限达1 fg/μL,实际样品检测率与...  (本文共80页) 本文目录 | 阅读全文>>

《吉林医学》2014年20期
吉林医学

金黄色葡萄球菌食物中毒病原检测方法比较

细菌性食物中毒中在国内外比较常见的食物中毒病原为金黄色葡萄球菌,在我国细菌性食物中毒中由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占25%,在国外中毒率则更高可达50%[1]。因此日常中的加热对于被金黄色葡萄球菌污染过的食物中产生耐热的肠毒素并无损害,对人类容易诱发食源性疾病的发生。因此对于食物中毒的患者采用快速、灵敏的病原菌检测方法在临床上起到关键的作用。为了更深入的研究分析,现将结果报告如下。1资料与方法1.1一般资料:选择2013年11月~2014年1月在我区治疗的44例金黄色葡萄球菌食物中毒患者,分为试验组与对照组,每组22例。对照组男12例,女10例,年龄9~65岁,平均(30.2±4.3)岁。试验组男11例,女11例,年龄7~71岁,平均(34.2±3.7)岁。两组患者进行肠毒素检测均确诊为C型肠毒素中毒,并且两组一般资料比较差异无统计学意义(P0.05),具有可比性。1.2方法:试验组采用荧光PCR仪检测患者的呕吐物,主要的原理...  (本文共1页) 阅读全文>>

《中国实用儿科杂志》2001年05期
中国实用儿科杂志

小儿呼吸道感染性疾病三种病毒病原检测及分析

临床资料 :本文系 1997年 10月至1998年 10月我院住院呼吸道感染患儿 2 0 7例。以同期入院的非感染性患儿 2 5例作对照组 ,同时进行检测。急性上呼吸道感染、支气管炎、肺炎的诊断的诊断标准均参阅诸福棠《实用儿科学》标准。方法 :患儿入院第 2~ 4天内抽静脉血同时检测CVB Ag、CVB IgM抗体、CMV IgM (深圳晶美生物工程有限公司试剂盒 )、EBV IgM (意大利Sorin生物技术公司试剂盒 ) ,均以ELISA法检测 ,按试剂盒步骤进行 ,实验诊断科专人负责。统计学分析为卡方检验。结果 :见表 1。由表 1可见 ,上呼吸道感染、支气管炎、肺炎CVB感染率均明显高于同期住院的非感染性患儿 (χ2 值分别是A组 8 9,P 0 0 5表 2 呼吸道感染疾病患儿三种病毒交叉感染检测阳性结果n...  (本文共1页) 阅读全文>>

《上海畜牧兽医通讯》2017年05期
上海畜牧兽医通讯

禽网状内皮组织增殖症病原检测及其抗体检测分析

*为通信作者禽网状内皮组织增殖症(Reticuloendothelio-sis,RE)是由网状内皮组织增殖症病毒(Reticuloen-dotheliosis Virus,REV)引起的鸭、火鸡、鸡和野禽的症状不同的免疫抑制病,也是危害养禽业的三种重要的肿瘤病之一,2008年新修订的《一、二、三类动物病种名录》将其列为二类动物疫病。REV最初分离株是1958年由美国ROBIRSOR从火鸡中分离得到的,此后在很多国家检测出病毒或抗体阳性的鸡群[1-4]。我国于1986年从南京地区一群患矮小综合征的鸡中分离出第一株REV以来,已经扩散到全国多数地区[5-8],近年来从生物制品中陆续检测出REV[9-11]。由于REV不仅引发肿瘤,还可导致免疫抑制,且没有有效的防控手段,使该病的防控越来越棘手。本实验通过对禽网状内皮组织增殖症病原检测及其抗体检测分析,以为该病的综合防控提供参考依据。1材料与方法1.1材料1.1.1试验鸡:随机挑选8种...  (本文共3页) 阅读全文>>