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乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)高表达质粒的构建

在乙型肝炎病人血清中存在着抗一HBc的抗体,因而我们可利用HBcAg来检测诊断乙型肝炎病人。以前HBcAg的主要来源是尸肝或富含乙型肝炎Dane颗粒的血液。国外从1979年起开始利用遗传工程方法研究HBoAg在大肠杆菌中的合成。英国的K .Murray实验室的Burrelr”,美国的Edman〔2’,瑞士Biogen公司的Stahl[3]等人已先后利用DNA重组技术使HBcAg基因在大肠杆菌中获得不同程度的表达。国内近两年来开始从事这项工作,但尚未获得高表达菌株。 我们于1983年研究获得了表达HBcAg的大肠杆菌MM206菌株。但表达水平较低,我们试图用BAL一31外切酶将HBcAg基因片段前存在的影响其充分表达的结构切去,然后连接上人工接头,插到乳糖启动子下游刀一半乳糖普酶结构基因中,以期获得高表达的重组质粒。材料与方法一、菌种和质粒DNA E.eoliK一22 RRI(F一Pro leu thi laey str‘r一km...  (本文共6页) 阅读全文>>

《上海免疫学杂志》1986年03期
上海免疫学杂志

第二代基因工程乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的质量鉴定和应用

1984年我们曾报道采用基因工程技术,将克隆到大肠杆菌质较上的HBV(乙型肝炎病毒)基因组,经过体外切创重组,使其中的EJ沁Ag基因能在大肠杆菌中表达,并以这种细菌产物为执原,即第一代国产基因工程R卫沁Ag(简称EIHBcAg),建立了检侧血清中杭n卫沁和杭RBc一IgM的ELIS人方法[1〕‘经1年多的实践考核,效果良好[s,.],说明基因工程产H玫Ag完全可以替代EBV感染者尸解肝中提取纯化的RE沁勺。但该工程菌的表达水平较低,堵养物中杂孩白含t很高,给纯化工作带来很大困难。同时,HBc材成品成本也较高,给大规棋生产带来了困难。经进一步研究,应用新的启动子和醉系获得了第二代菌产且BcAglEtRBc材)。经过初步鉴定,几HBcAg中HBcAg实际含t高、杂蛋白少,由它替代EIH及Ag配制成的抗HBc(总),执HBc一IgM检洲试荆盒质盘可有进一步的提高。 材料和方法 一、EIHBcAg的制.:以大肠杆菌K-12侧肛株为受体菌...  (本文共4页) 阅读全文>>

《国外医学(内科学分册)》1986年08期
国外医学(内科学分册)

检测血清HBcAg的意义

HBcAg在血中主要作为Dane颗粒的内部成分,也可能与抗~HB“以形成复合物的形式而存在。检测血清HBcAg一般需用超速离心或免疫复合物沉淀法浓集Dane颗粒,用反复洗涤离心、清洁离心管或用高克分子浓溶液处理等方法,去除抗~HBc的干扰,用去垢剂裂解Dane颗粒,然后对暴露出的HBcAg进行检测。检测的临床意义有如下几方面。 HBcAg作为传染性和活动性病变的标志〔‘~3〕 HBsAg无症状携带者常会拒绝作肝活检,而检测血清HBcAg,则是反映肝内HBV活动性复制的简易方法之一。HBsAg阳性病人的肝活检和血清标本的研究表明,血与肝内的HBcAg呈正相关;而且肝内HBcAg呈弥漫型分布者,其血HBcAg水平显著高于肝内HBcAg呈局灶型分布者的血HBcAg水平。由于病毒标记的分布不匀,或肝内不同部位的HBv复制水平不一,可以用活检采样误差来解释血HBcAg阳性者的肝内HBcAg阴性。但肝内有HBcAg而血HBcAg阴性的现象,...  (本文共3页) 阅读全文>>

《国外医学(微生物学分册)》1988年04期
国外医学(微生物学分册)

乙型肝炎核心抗原免疫动物的保护作用

本文报告HB二气g免疫动物的保护作用。 HBe^g按Muriay法(195连)将大肠杆菌质粒pRI一11重组而成,用Lowry反应浓缩,经赏试验证实无致热原。用4只黑猩猩作实验动物,年龄为12一24岁,雌雄各半,实验前均无HBV接触史,2只用0.1%SDS溶解并经A1(0H)3沉淀的HBcAg制剂注射3次,每次10郎g,另2只为对照。4只动物均以静脉注射10“.6的LD。。HBv攻毒,攻毒前后定期采血,以I’““包埋抗HBc一HBcAg固!相放射免疫法测抗一HBc,Abbott HBe放射免疫法检测HBeAg、抗一HBe,以I‘“石HB吕Ag羊一抗人抗体双向沉淀法或Abbott Aus:ia箱测HBsAg、抗一HB,。 动物免疫后产生抗一HB。和抗一HBe,效价很高,然后攻毒。对照动物攻毒后出现抗原血症和血清学HBv感染的指征,HBsAg、HBeAg、抗一HBc阳...  (本文共2页) 阅读全文>>

《解放军医学杂志》1988年03期
解放军医学杂志

慢性乙型肝炎肝组织内HBcAg与乙肝病毒血清标志及肝功能的关系

慢性乙型肝炎(eH)23例,取肝活组织用显著。(5)血小板100 x 109/L者一5例,200U(赖氏法)13例,ALT资料来看,肝组织内HBcAg检出率与ALT胆镇20OUIO例,两组肝内HBcAg检出数分别为红素的高低均无一致关系,说明虽然病毒复制3例及4例,差异不显著。(2)黄疽型12例(胆可视为肝炎病变活动的标志和肝病慢性化的原红素17.lmmol/L),无黄疽型H例,两组肝因,但不是唯一原因。研究证明,机体免疫状内HBcAg检出数分别为3例及4例,差异不态起着更重要的作用。所以在临床上不能放松显著。(3)蛋白电泳分析...  (本文共2页) 阅读全文>>

《细胞与分子免疫学杂志》1988年02期
细胞与分子免疫学杂志

用基因工程HBcAg制备抗-HBc单克隆抗体的研究

近年来,日益认识到HBcAg是肝细胞的重要靶抗原,使用抗一HBc载以药物作导向怡疗的研究正在进行,为使导向精确,获取不含任何抗人肝细胞成份的抗一HBc是必需解决的问题,以尸肝HBeAg免疫所获单克隆抗一HBc显然不能满足这一条件,为此,本文探索了用基因工程HBcAg研制抗一HBc单克隆抗体,获得成功,报告如下.材一料和方法 一、BALB/c小鼠卫生部生物制品鉴定所提供,鼠龄7周。 二、小鼠骨璐油细胞SpZ/O来自第四军医大学,融合前三天复苏,扩大培养。 三、抗原粗提抗原来自302医院,系用含有HBcAg基因的工程菌MM206按马氏报道的方法〔‘’进行粗提。粗提的HBoAg再经单克隆抗-HBc偶联的Sepbaroso 4B层析柱用3MKCNS将吸附在柱上的HBcAg解离,收集蛋白高峰,用双抗夹心法测HBoAg活性,侧蛋白含量后4℃保存备用。 四、小佩免咬脾细胞用以上纯化的HBcAg20雌,Fround氏完佐剂0.2ml,混匀后对小...  (本文共3页) 阅读全文>>