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大鼠肝tRNA~(Ⅱe)基因在大肠杆菌中的表达及分离纯化

多胺(包括腐胺、精胺、精眯)是生物体的天然活性物质,是细胞维持生长所必需的.彭朝晖等先前的研究表明,精胺能特异性地刺激哺乳动物tRNA””负载lie,而对大肠杆菌的tRNA无刺激或抑制作用,提示多胺对哺乳动物蛋白质生物合成的刺激作用与其对tRNA’‘”构象的影响有关.“’生物体细胞中的tRNA约占细胞RNA总量的10%,”’传统的tRNA制备方法,不仅繁琐而且产量甚微.利用基因工程的手段在细胞中表达tRNA基因可能克服传统制备方法的不足.为进一步研究哺乳动物tRNA’‘”的功能与构象,我们用化学方法合成了大鼠肝tRNA””基因,构建了大鼠肝tRNA””基因的表达质粒PGWIW,并转化至宿主菌E.OOliJM109(DE3)中》’.本文报道对大鼠肝tRNA“”基因的表达、分离纯化和氨酸化活性检测结果.1材料与方法1.l质粒与菌株转录载体pGEM-gZf(一)及宿主菌E.ZoliJM109(DE3)由香港科技大学王子晖教授惠赠.大鼠...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中华医学杂志》2006年24期
中华医学杂志

小鼠肝脏内自然杀伤细胞功能和数量与鼠龄变化的关系

自然杀伤细胞在先天性免疫中占有重要地位,在对抗病毒和感染中发挥重要作用[1]。自然杀伤细胞(NK)细胞和T细胞来源于共同的前驱细胞,NK细胞的分化成熟主要在骨髓内,并且依赖骨髓内基质的微环境。有研究显示胚胎期的肝脏可以产生NK细胞[2],这可能是小鼠和人类肝脏内含有大量NK细胞的原因之一。对脾脏,脐带血以及外周血内NK细胞的研究较为深入,而针对肝脏尤其是幼龄期肝脏内NK细胞的研究还少有报道,本文旨在揭示肝脏内NK细胞的特点以及这些特点与鼠龄变化的关系。材料和方法一、材料使用2周龄、8周龄C57BL/6小鼠。所有动物饲养在哈尔滨医科大学实验动物中心,清洁级。二、方法1·淋巴细胞制备:根据文献报道的方法[3],用乙醚麻醉后针刺心脏放血处死小鼠,获得小鼠的肝脏和脾脏,以机械方法切碎,磷酸缓冲液冲洗,200目滤网过滤,收集细胞悬液。脾脏用0·83%NH4C l-Tris缓冲液(pH 7·6)溶血。肝细胞梯度离心后,用0·83%NH4C ...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国畜牧兽医》2013年08期
中国畜牧兽医

N-乙酰-L-半胱氨酸对Ⅰa型牛源无乳链球菌诱导的小鼠肝脏氧化损伤的保护作用

乳房炎是奶牛最主要的疾病之一,给奶牛养殖户造成了巨大的经济损失,严重阻碍了奶牛产业的健康发展。在137种不同病原微生物(细菌、支原体、酵母和藻类等)中,无乳链球菌(S.agalactiae)即B族链球菌(GBS),是引发隐性奶牛乳房炎的主要传染性病原菌之一(Bradley,2002;Gao等,2012;Merl等,2003)。该菌可存活于乳腺组织并通过不健康的挤奶方式传递给其他健康奶牛,从而影响牛奶的产量和质量(Denis等,2009)。目前,根据菌株表面荚膜多糖的特异性,无乳链球菌可分为Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ~Ⅸ共10个血清型(Slotved等,2007),中国分离的牛源无乳链球菌主要为Ⅹ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅰa和Ⅰb型,不同血清型菌株之间的交叉反应性较差,成为预防和治疗无乳链球菌性奶牛乳房炎的瓶颈(王旭荣等,2012)。近年来,自由基在兽医学中的意义日益受到重视。研究证实,外环境毒物可诱发机体连续产生活性氧(ROS)自由基,过量的ROS如H2...  (本文共5页) 阅读全文>>

《动物学杂志》1990年03期
动物学杂志

简易小鼠肝灌注手术台的制作

小鼠是研究血吸虫病的理想实验动物。在用其研究血吸虫保护性免疫机制因、考核血吸虫疫苗川及抗血吸虫药物川效果时,常须应用的一项实验技术是对受试小鼠施行肝灌注手术,通过此手术收获发育的成虫,以评价试验的效果。在许多实验室,开展这项手术时,常常是临时找几件材料架成一个手术台凑合着完成手术。笔者在应用这项技术时,以玻片染色架为基本材料,制作一简易、牢靠、实用的小手术台,现介绍如下: (一)材料和方法玻片染色架,有机玻璃板或塑料板一块(9只7cm),502胶水。 制作方法取玻片染色架,先将一端的提手环向外册成直角,然后根据染色架平面的大小,将有机玻璃或塑料板块裁成与其大小相仿的凸字形,再将裁下的此板平放于架面上,突起部分插入手提环内(未册弯的一端),此时便可用502胶进行粘合。然后,再取一裁下的边角小条,横向地安置于手提环的腰部,边用502胶进行粘合(见图l)。 操作方法将受试小鼠仰卧平放于台上,头部伸人手提环内(即凸字形板块的突起端),。...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中药药理与临床》2012年02期
中药药理与临床

柴胡水提物连续给药对小鼠肝脏的影响

据报道,目前已知可致肝损伤的中药有100多种,比如雷公藤、大黄、黄药子和柴胡等[1],柴胡最早在《本经》中被列为上品,虽然历代本草均未将其列为有毒之品,但在长期临床应用中,一些医家逐渐认识到柴胡亦有一定的毒副作用。叶天士在《幼科要略》中首次提出"柴胡劫肝阴"之说,为后世所重视。近年来,国内外关于柴胡临床毒副作用的报道日益增多,认为长期大量使用柴胡可产生一定的肝损伤[2]。为临床合理用药提供实验依据,本实验通过多次灌胃给予小鼠柴胡水提物,测定不同剂量下小鼠血液生化指标、氧化指标、细胞膜指标、线粒体指标以及病理指标的变化,探讨柴胡水提物对小鼠肝脏的影响。1材料与方法1.1试验药物北柴胡购于安徽丰原铜陵中药饮片有限公司,产自内蒙古,批号:20100809。经南京中医药大学药学院王春根教授鉴定为伞形科植物柴胡(Bupleurum chinense DC.)的干燥根。取北柴胡干燥根,加8倍量水,常温浸泡2h,加热微沸1h,双层纱布过滤,收...  (本文共3页) 阅读全文>>

《水产科学》2008年02期
水产科学

微囊藻毒素对小鼠肝脏的毒性研究

目前,蓝藻水华发生频率与严重程度都呈现迅猛增长趋势,发生的地点遍布全球各地[1-3]。水华现象使水体的生态结构与功能发生变化,导致藻类尤其是蓝藻的异常繁殖生长,不仅破坏了水生生态系统,而且给经济和社会发展、环境保护及人们的健康造成了越来越大的威胁[4-6]。蓝藻能产生很多种毒素,其中,微囊藻毒素(M icrocystin,MC)的毒性最强,它已成为一个全球关注的热点问题[6-7]。关于MC对肝毒性的研究,已有许多报道,但MC对小鼠肝脏外部形态损伤的研究尚未见报道,笔者用小白鼠作试验材料,活体致毒14 d后,观察MC对小鼠肝脏外部形态损伤的影响。1材料与方法1.1材料1.1.1微囊藻在实验室内大量培养,离心收集后采用沸水浴法获得[8-10]。1.1.2微囊藻细胞抽提物参照W atanabe[8]的方法,略加改动。将培养的微囊藻7000 r/m in离心收集,用磷酸缓冲液洗涤微囊藻浆2次后,重新悬浮于去离子水。所得微囊藻浆沸水浴20...  (本文共3页) 阅读全文>>