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辣根过氧化物酶同功酶C3基因在毕赤酵母中的表达

辣根过氧化物酶(HRP,horseradish peroxidase)有广泛的用途,被用于酶免疫学检测、诊断检测和工业酶反应[1]。辣根过氧化物酶可用于基因指导的酶潜药物疗法[2-4],这需要在基因水平上进行操作,需要得到能表达出具有生物活性的该酶的基因,以便与其它基因进行融合表达。辣根过氧化物酶的三种同工酶HRPC1、HRPC2和HRPC3的基因中,只有HRPC3的没有内含子,可以通过PCR的方法直接得到目的基因[5]。因为巴斯德毕赤酵母(Pichia passtoris)能够高表达许多种活性蛋白质[6],在本研究中将采用该表达系统。国内曾有人根据一种辣根过氧化物酶的氨基酸序列,用RT-PCR的方法得到目的基因,与国外报道的序列符合程度仅为90.6%,应用毕赤酵母pPIC3.5表达载体,表达产物在细胞内[7]。本研究将根据已知DNA序列,以辣根总DNA为模板获取HRPC3基因,应用分泌型表达载体pPIC9K,表达产物在细胞外,...  (本文共3页) 阅读全文>>

《广东农业科学》2016年09期
广东农业科学

芋头过氧化物酶基因克隆

芋头(Colocasia esculenta)主要种植于热带地区,在东南亚和太平洋地区是一种重要的经济作物。2016年国际粮农组织报告,2004—2014年期间,我国的芋头年均生产量居全球第在大多数情况下获得的主要产物片段为1~3kb[12]。hi TAIL-PCR技术非常实用[13-16]。例如,郭翠等[14]通过一次hi TAIL-PCR和一次长链PCR扩增方法获得了转抗草甘膦基因玉米品系D-3的外源DNA插入片段的全DNA序列及两端侧翼序列,并建立了转化体特异性PCR检测方法;赵静等[15]以海州香薷基因组DNA为模板,通过hi TAIL-PCR和walking技术扩增得到其细胞壁转化酶基因启动子片段,长度为1727 bp;廖小芳等[16]利用hi TAIL-PCR技术扩增红麻cox1全长及侧翼序列,结果表明,在红麻不育系UG93A和保持系UG93B中分别获得长度为2 149、3 244 bp的序列,包含cox1基因CDS...  (本文共7页) 阅读全文>>

《山西大同大学学报(自然科学版)》2014年04期
山西大同大学学报(自然科学版)

辣根过氧化物酶酶学特性及应用进展

辣根(十字花科)是一种耐寒的常年生草本植物,主要分布在世界温带地区,它的根具有很好的烹饪价值。辣根的根部也是过氧化物酶的丰富来源,至少含有30多种HRP同功酶形式,其中HRP同功酶C(HRP-C)含量最丰富,因此统称为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)。辣根过氧化物酶也是一种利用过氧化氢可以氧化大多数有机物和无机物的血红素酶。由于其比活性高、耐热性高、酸碱稳定性好,对污染物浓度和盐度都有较高的耐受性,与抗原或抗体偶联后,活性损失很少,因此被广泛用于污水处理、食品工业、有机合成和分析检测等领域。本文介绍了HRP的结构、固定化及其在各个领域中的应用,并对其应用前景进行展望。1辣根过氧化物酶的结构1976年,Welinder等[1]人首次确定了HRP-C是一组单亚基糖蛋白,包含308个氨基酸残基和8个糖链,每分子HRP-C中有2分子Ca2+、1分子血红素辅基和4对二硫键,相对分子质量约为44 000...  (本文共6页) 阅读全文>>

《安徽化工》2010年04期
安徽化工

卤过氧化物酶在有机合成中的应用研究进展

卤过氧化物酶是在卤化物离子和过氧化物(例如:H2O2)存在的条件下才可以催化有机化合物而发生卤化反应的一组酶。它是至今唯一公认的与有机卤化物生物合成相关的酶,是一种特殊的过氧化物酶,不仅可使很多有机物卤化形成具有生理活性的卤素有机物,而且还具有催化脱卤、氧化、磺化氧化、环氧化、羟基化及其他反应的作用,因其在药物合成和高附加值化合物合成方面所起的重要作用而引起人们越来越多的关注[1]。1卤过氧化物酶的分类卤过氧化物酶可分为:亚铁血红素类、含钒类和来自细菌不含金属离子的卤过氧化物酶[2,3]。1.1亚铁血红素卤过氧化物酶这类酶无庸质疑是血红素蛋白家族中最通用的生物催化剂,它具有至少包含血红素的脱氢酶所具有的催化特性,即典型的植物和真菌的过氧化物酶、细胞色素P450单加氧酶及过氧化氢酶。在过去很长一段时间内,只有自子囊菌Caldariomyces fumago的氯过氧化物酶(CPO)被确认。近年来,第二种亚铁血红素类真菌卤过氧化物酶在...  (本文共4页) 阅读全文>>

《生物工程学报》2008年04期
生物工程学报

龙须菜中溴过氧化物酶的分离纯化及酶学性质分析

李海燕等:龙须菜中澳过氧化物酶的分离纯化及酶学性质分析623海洋天然产物中存在大量的卤素有机化合物,具有抗菌、抗肿瘤等特殊的生理活性川。卤素过氧化物酶是至今唯一被广泛接受、与有机卤化物生物合成相关的酶l2],可使很多有机物卤化形成具有生理活性的卤素有机物,还具有催化硫氧化、环氧化、叫噪氧化及其它反应的作用,因此卤素过氧化物酶在药物合成和高附加值化合物合成方面越来越引起重视【’,2]。澳过氧化物酶普遍存在于海藻中,尤其以红藻居多l,],国内外对珊瑚藻(corazzina唠einalis)嗅过氧化物酶的研究较多13一7]。珊瑚藻生长季节性强,采集量少,成为澳过氧化物酶开发利用的瓶颈。龙须菜作为江篱属的一个特有种,因适应性快、生长率高等优点,已成为中国产量第三的养殖大型海藻[8]。江篱属红藻含有丰富的多糖(藻体干重的30%一70%)及藻胆蛋白(可溶性蛋白的60%),其存在影响各种酶的催化检测反应,增加了酶分离纯化的难度,这是红藻生理功...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国水产科学》2007年03期
中国水产科学

几种海藻中溴过氧化物酶的筛选及酶学性质

海洋天然产物中很多是含卤素的有机化合物,这些物质具有抗菌、抗肿瘤等特殊的生理活性[1]。卤素过氧化物酶是至今惟一公认的与有机卤化物生物合成相关的酶[2]。卤素过氧化物酶是一种特殊的过氧化物酶,不仅可使很多有机物卤化形成具有生理活性的卤素有机物,而且还具有催化硫氧化、环氧化、吲哚氧化及其他反应的作用,因其在药物合成和高附加值化合物合成方面起重要作用而引起人们越来越多的重视[1-2]。卤素过氧化物酶按照所利用的卤素离子分为3种:氯过氧化物酶(ClPOD),溴过氧化物酶(BrPOD)和碘过氧化物酶(IPOD)。氯过氧化物酶主要来源于陆地生物,溴和碘过氧化物酶主要来源于海洋生物,其中海藻是溴过氧化物酶的主要来源[3]。海洋绿藻、红藻和褐藻都曾检测到溴过氧化物酶,季节、海域的差异会使溴过氧化物酶的性质有所改变。国外对海藻中溴过氧化物酶的研究报道较多[4-8],但还未见有关中国海域的海藻中溴过氧化物酶的研究报道。本研究对中国黄海海域的红藻角...  (本文共6页) 阅读全文>>