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乙酰胆碱酯酶的定点突变法设计及其在生物传感器领域的应用

乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE,EC3.1.1.7.)主要的生物学功能是在胆碱能神经突触处通过快速水解神经递质乙酰胆碱而中止神经冲动的传递[1]。AChE的抑制剂,例如有机磷和氨基甲酸酯,影响这一过程,由此可导致神经功能的严重伤害,甚至死亡。因此,AChE抑制剂是农业生产中主要的杀虫剂。然而,它也引起了严重的环境和健康危害[2]。高效、快速、低成本和灵敏的AChE抑制剂检测系统吸引了人们越来越多的研究兴趣[3 ̄6]。传统的检测AChE抑制剂的方法是基于气相色谱(GC)或高效液相色谱(HPLC)与质谱联用的技术[3,4]。这类方法灵敏、特异,但所用仪器昂贵,分析费时且成本高,限制了该方法在农药残留监测和现场实时检测中的应用。近年来,具有高效、快速、低成本特点的AChE抑制检验的研究异常活跃,尤其是AChE生物传感器,已经在杀虫剂残留的现场和实时检测中得到应用[5,6]。然而,基于AChE抑制剂分析...  (本文共4页) 阅读全文>>

《医疗卫生装备》2005年04期
医疗卫生装备

乙酰胆碱酯酶法检测果蔬农药残留的研究

酶抑制剂法操作简单,速度快,不需要昂贵仪器,适应于现场监测和对大规模食品的筛选检测,被广泛用于野外快速食品检验器材。此方法最关键的试剂是胆碱酯酶,应统一标准,选用对国内常用的有机磷和氨基甲酸酯类农药(如甲氨磷等)较敏感及活性较高的胆碱酯酶。基本原理为:乙酰胆碱酯酶加有机磷农药,则酶活性被抑制。乙酰胆碱酯酶加样本,如活性被抑制,则含有有机磷农药;如活性不被抑制,则不含此类物质。有机磷农药和乙酰胆碱酯酶的反应可以用下式表示:EOH+AX→EOH·AX→EOA+Xˉ+H+有机磷农药能抑制胆碱酯酶的活力,测定要先从果蔬中将有机磷提取出来,加入乙酰胆碱酯酶,供有机磷作用,再加入底物—碘化硫代乙酰胆碱,看其水解的程度,判断乙酰胆碱酯酶的活性被抑制的程度。水解程度小,其分解产物的量也相应的减少。1实验材料(1)农药标样(100ppm):有机磷类:乐果、甲拌磷;氨基甲酸酯类:呋喃丹、西维因。(2)乙酰胆碱酯酶酶液(实验室已制成)。(3)底物:碘...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国免疫学杂志》1980年10期
中国免疫学杂志

重症肌无力患者乙酰胆碱酯酶抗体的测定

重症肌无力患者乙酰胆碱酯酶抗体的测定①中国军事医学科学院药物毒物研究所,北京100850作者简介:郝洪军,男,34岁,实验技师,主要从事神经病学生化及免疫实验室研究;袁锦楣,男,64岁,教授,博士生导师,主要从事神经免疫性疾病的研究,任《中华神经科杂志》、《中国神经免疫学和神经病学杂志》副主编郝洪军袁锦楣唐健李静朱美财①(北京医科大学第一临床学院神经病学研究中心免疫室,北京100034)中国图书分类号R746摘要纯化人脑组织中的乙酰胆碱酯酶为抗原包被免疫板,建立血清中乙酰胆碱酯酶抗体测定的ELISA法。探讨了检测方法的特异性和可重复性,并对3组样本进行了测定。证明此方法特异、灵敏、可重复。提示对重症肌无力的研究可能提供1个新的实验室检测指标。关键词乙酰胆碱酯酶抗体ELISA法重症肌无力乙酰胆碱酯酶(AChE)作用机制已广为人知。分布神经肌肉接头和脑组织乙酰胆碱酯酶的共同生化本质均为糖蛋白〔1,2〕。中枢和外周神经组织的乙酰胆碱酯...  (本文共3页) 阅读全文>>

《军事医学科学院院刊》1983年02期
军事医学科学院院刊

快速测定蚯蚓中的乙酰胆碱酯酶

用盐酸经胺比色法测定乙酞胆碱醋酶,须把样品孵温30分钟后,再进行比色测定。自Ellman等人发表的快速测定法以后山,近年来国际上发表的文献,几乎全部采用该法。Berman等用来测定电鳗和红细胞中的乙酞胆碱醋酶闭,Massouhe等用来测定电鱼及电姗的电器管中的乙酞胆碱醋酶哪,Reavill等采用Ellman法测定从猪脑中提取的乙酞胆碱醋酶〔‘〕,waehtendonk用此法测定海蚌血淋巴中的乙酞胆碱醋酶含量阁。Grosmann等人测定牛红细胞中及眼睛蛇蛇毒中的乙酸胆碱醋酶时也采用了此法(6,”。我们采用此法对虹好!中的乙酞胆碱醋酶进行了测定。 一、方法原理(eH,),NoHZeH:seoe。:3+HZo竺(CHJ),NCH:CH:S一+CH3COO一+ZH+ —①(CH3)3NCHzCHZS一+RSSR一 (I)(CHs):NCHZCHZSSR+RS-—② (亚)黄色R一OzN一仁少- { COO一 DTNB(工)的反应产物5一...  (本文共4页) 阅读全文>>

《江苏农业学报》2016年03期
江苏农业学报

三化螟两个乙酰胆碱酯酶基因克隆及序列分析

昆虫的乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,ACh E)是有机磷和氨基甲酸酯类农药的作用靶标。昆虫对有机磷和氨基甲酸酯类农药产生抗药性的重要原因之一是乙酰胆碱酯酶基因(ace)保守区域内碱基突变使得相应氨基酸发生改变,其产物ACh E发生变构,导致昆虫对杀虫剂的敏感性下降,由此使昆虫产生抗药性[1-2]。随着广泛而持续地使用有机磷和氨基甲酸酯类农药,已发现多种昆虫的ace产生了与这两类药剂抗性相关的突变[3-6]。昆虫ace上形成的抗性相关突变,有单个位点的突变,也有多个位点的同时突变。在二化螟(Chilo suppressalis)对三唑磷高抗的品系中,ACh E1的A314S单点突变使二化螟对三唑磷的抗性达数百倍或上千倍[6]。在埃及伊蚊(Aedes aegypti)的ace中,与抗性相关的突变数目越多,其ACh E对杀虫剂的敏感性降低就越大。同时含有G285Y和F350Y两个突变与同时含有F105S、G2...  (本文共7页) 阅读全文>>

《中外医学研究》2015年31期
中外医学研究

针对有机磷农药对乙酰胆碱酯酶活性的抑制作用研究

急性有机磷中毒属于我国临床治疗中的常见病症[1]。有机磷农药具备适用范围广、杀虫能力强等特征,在我国农业中得到广泛的应用,发挥很强的病虫害治疗,能够对靶标物中乙酰胆碱酯酶活性产生抑制作用,从而造成死亡。人类在有机磷中毒后,体内的乙酰胆碱酯酶活性受到抑制导致中毒,中毒程度分为三种:轻度、中度以及重度,其中轻度中毒患者以呕吐、头晕目眩、乏力、恶心、瞳孔缩小、胸闷以及排汗多为主要临床症状;中度以肌肉颤动、心率减慢、意识障碍、腹部疼痛以及呼吸困难等为主;重度以神志不清、昏迷、血压下降、大小便失禁、呼吸机麻痹等为主[2]。抽取2010年1月-2014年12月笔者所在医院收治的100例有机磷农药中毒患者为研究对象,比较患者治疗前后的乙酰胆碱酯酶活性,以探讨有机磷农药对乙酰胆碱酯酶活性的抑制作用,现报告如下。1资料与方法1.1一般资料选择2010年1月-2014年12月笔者所在医院抢救的100例有机磷农药中毒患者,其中男44例,女56例,年龄...  (本文共2页) 阅读全文>>