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人肌红蛋白基因的克隆、表达及其抗体制备

人肌红蛋白(Human myoglobin,hMb)是国际公认的早期诊断急性心肌梗塞(AMI)的生化标志物之一,其大量分布于骨骼肌和心肌中,相对分子质量17800。由于肌红蛋白是心肌细胞胞浆蛋白,且相对分子质量小,当心肌坏死时,可直接快速进入血液循环,1~2h血清浓度升高,敏感性较高,且在血液中出现的时间早于其他生化标志物,因此可用于心肌梗塞的早期诊断[1~10]。目前肌红蛋白及其相关诊断产品已有市售,但多为进口,且价格昂贵,不利于普及应用[11~13]。为此,本文利用RT-PCR方法,从人骨骼肌中克隆了肌红蛋白基因开放读框,并在大肠杆菌中获得高效表达,免疫小鼠获得了高效价的多克隆抗体,为大量制备人肌红蛋白单克隆抗体及研制快速、高效、廉价的诊断试剂盒奠定了基础。材料与方法1.菌株、质粒和组织人肌肉组织由山西省医用组织库(奥瑞生物公司)提供;大肠杆菌DH5α和BL21(DE3)由山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点...  (本文共4页) 阅读全文>>

东北林业大学
东北林业大学

人肌红蛋白基因合成、原核表达及单克隆抗体制备

为了制备用于临床心脑血管疾病监测的高特异性、高敏感性的抗肌红蛋白单克隆抗体,本研究利用两步法合成人肌红蛋白(myoglobin,Myo)全基因的基础上,构建原核表达载体并通过BL21(DE3)表达其融合蛋白;将获得的融合蛋白进行His标签特异性亲和纯化。与此同时,利用血清提纯的人肌红蛋白抗原筛选出高亲和力的单克隆抗体,最终利用所表达的融合蛋白筛选最具特异性并且能够进行夹心配对的一组单克隆抗体。本研究结果和结论如下:1.Myo全基因合成:在NCBI查询得到Myo氨基酸序列,并将Myo密码子经过优化得到大肠杆菌惯用的密码子,反转录后得到Myo全序列,并利用两步法合成Myo全基因;2.表达载体构建:将Myo片段并与pMD18-T Simple载体相连,得到重组质粒Myo-pMD18-T Simple。利用Myo-pMD18-T Simple上特异性酶切位点,将Myo片段进行酶切胶回收,并与原核表达载体pET-28a连接,获得可用于原核...  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国运动医学杂志》2005年06期
中国运动医学杂志

肌红蛋白基因多态与有氧训练效果的关联性分析

肌红蛋白是由一条包含153个氨基酸残基的多肽链和一个辅基血红素组成的单链球形蛋白[1],其功能是把血液中的氧通过细胞膜运输到肌细胞中,以氧合肌红蛋白的形式暂时储存,保证肌肉剧烈活动时对氧的需要。因此,肌红蛋白对有氧耐力有着十分重要的作用。人类肌红蛋白基因位于22q11.2-q13的染色体区域,长约10.5kb,包括3个外显子和2个内含子。肌红蛋白基因第2外显子编码该基因的主要功能部分,故其基因表达直接影响蛋白质的功能[2]。在肌红蛋白基因第2外显子上存在单核苷酸多态(SNP)A79G。Moore等人的研究发现,3代以上出生并居住于海拔3000米以上喜马拉雅山地区的西藏藏族人群,其79A等位基因频率高于平原地区人群[3]。西藏藏族人群长期居住于高原地区,与其他种族相比,对高原低氧环境有更显著的适应性,尤其在氧从肺运输到组织和组织对氧的利用等方面,其能力明显高于其他种族人群[4-6]。上述研究结果是否提示该基因多态性与个体的有氧适应...  (本文共5页) 阅读全文>>

《遗传学报》1980年20期
遗传学报

定位猪肌红蛋白基因于染色体5p15~pter

定位猪肌红蛋白基因于染色体5p15~pter李宁吴常信(中国农业大学农业生物技术国家重点实验室北京100094)摘要利用荧光染色体原位杂交技术,以含有猪肌红蛋白基因的粘粒DNA为探针,分析了猪肌红蛋白基因在染色体上的物理位置。从105个中期染色体分裂相的杂交结果推断,肌红蛋白基因位于染色体5p15~ter。就现有的知识范围,这个基因是第一次在家畜中被物理定位。关键词基因定位,猪肌红蛋白,荧光原位杂交分类号Q343本文于19970203收到,19979519修回国家自然科学基金资助项目(39230300)肌红蛋白(Mb)是由一条153个氨基酸的多肽链和一个血红素辅基组成。近年来,人、猪、鼠、牛等多种哺乳类动物的肌红蛋白基因已被克隆分析。肌红蛋白基因是单拷贝,结构非常相似,均含有3个外显子和2个内含子,一般在胎儿和成年个体的心肌以及骨骼肌中表达[1,2]。在肌红蛋白基因的物理定位研究方面,目前只有人肌红蛋白基因的研究结果有报...  (本文共3页) 阅读全文>>

北京体育大学
北京体育大学

肌红蛋白基因Exon2 SNP/A79G、Intron2 SNP/A2982C与有氧运动能力的关联性研究

本研究选取肌红蛋白基因Exon2 SNP/A79G和Intron2 SNP/A2982C两个单核苷酸多态位点(SNP),对102名中国汉族优秀长跑运动员与206名中国汉族普通大学生进行比较分析,探寻优秀长跑运动员肌红蛋白基因多态性的分布频率特征;通过106名中国汉族士兵18周5000米长跑的耐力训练,比较训练前后有氧耐力相关表型、体成分、左心室结构与功能指标的变化,探寻肌红蛋白基因多态性与耐力训练效果的关联性。最终确定肌红蛋白基因多态性可否作为长跑运动员选材的分子生物学指标。研究结果显示:中国北方汉族人群肌红蛋白基因Exon2 SNP/A79G的基因型和等位基因分布频率与欧洲白种人、非洲黑种人、西班牙人、美国Dallas人有极其显著性差异,与日本人没有显著性差异,同时,与中国西藏藏族人有极其显著性差异。但未发现优秀耐力运动员与普通无训练者人之间该位点多态性分布频率的差异性,同时也未发现该位点三种基因型之间运动训练效果的差异性。对...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

《北京医科大学学报》1980年40期
北京医科大学学报

人肌红蛋白基因内含子中重复DNA序列在小鼠基因组中同源分布及多态性

人肌红蛋白基因内含子中重复DNA序列在小鼠基因组中同源分布及多态性张小为孟雁△蔡有余△(北京医科大学第三医院妇产科,北京100083△中国医学科学院实验动物研究所遗传室)主题词葡萄胎序列分析,DNA限制性片段长度多态性肌红蛋白摘要目的:建立区别动物亲缘关系的分子生物学方法以选择建立葡萄胎动物模型所需的近交系小鼠。方法:用人肌红蛋白基因内含子中重复序列的多聚体为探针,经α32PdCTP标记,与近交系小鼠BALB/C和昆明小鼠的DNA限制性片段作Southern杂交,探讨该序列在鼠基因组中是否同源分布及其多态性。结果:所用的两种鼠在2~23kb间都出现了多条杂交带,两者的带纹分布有明显差别,表现出高度的多态性。结论:人类的这一DNA序列在小鼠中有广泛的分布,并且存在着不同的拷贝数,表现出了鼠间DNA多态性的不同,这对进一步研究鼠间亲缘关系和种系鉴别以恰当选择实验所需动物以及实验动物的遗传监测具有理论和实际意义。中国图书资料分类法...  (本文共3页) 阅读全文>>

《首都体育学院学报》2009年03期
首都体育学院学报

中国北方汉族人群肌红蛋白基因第2外显子多态性的研究

肌红蛋白是由一条包含153个氨基酸残基的多肽链和一个辅基血红素组成的单链球形蛋白[1],其功能是把血液中的氧,通过细胞膜运输到肌细胞中,以氧合肌红蛋白的形式暂时储存,在肌肉剧烈运动时把氧释放出来,以保证肌肉强烈活动时对氧的需要。因此,肌红蛋白对有氧耐力有着十分重要的作用[2]208。人类肌红蛋白基因位于22q11.2-q13的染色体区域,长约10.5 kb,包括3个外显子和2个内含子。肌红蛋白基因第2外显子位于该基因的编码区,其基因表达直接影响蛋白质的功能[3]39。在第2外显子有2个单核苷酸多态位点(A79G)和(T109C),它们也是第2外显子唯一的多态形式。Moore等对居住于海拔3 000、3 700、4 500 m的西藏藏族人的79A等位基因分布频率进行了比较,结果表明居住于海拔4 500 m的西藏藏族人的79A等位基因分布频率最高,此外,居住于海拔3 000 m以上小西藏藏族人群的79A等位基因高于平原地区人群[3]...  (本文共3页) 阅读全文>>