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利用微生物转化丙烯腈成丙烯酰胺的研究Ⅱ、产腈水合酶菌种的发酵条件的研究

前 一J山 曰 前文已报道了用微生物法生产精细化工产品丙烯酷胺的菌株筛选和产物鉴定‘”,在此基础上,我们又进行了一系列发酵条件试验,为扩大试验和逐步实现工业化提供了依据,本文着重报道这方面的试验结果。一、材料和方法 1.菌种 J卜1—恶臭假单胞杆菌(P,.putida)。 2.培养基 (1)牛肉汁琼脂斜面常规配方,pH7.。。 (2)种子培养基组成(%)蛋白陈。.卫、牛肉膏莎.12、酵母膏。.05、甘油0.5、(NH‘)2500·05、_NaClo·5、KZHpO4·3HZOO‘2、M爵04·?HZO。·02,蒸溜水配制,pH7·0。作者还有,尹光琳,李族光。石油学报(石油加工)第5卷 (3)发酵培养基组成(%)丙睛0.20(v/V)、K:Hpo;·3HZoo,2、NaC一0.1、M爵o:·7HZO 0.02、微量元素0.1(V/V),pH7.0,55kPa灭菌30(min)。 微量元素组分(mg/L)‘:znso‘·7Hzo ...  (本文共6页) 阅读全文>>

《微生物学通报》1988年04期
微生物学通报

恶臭假单胞菌JP-1腈水合酶的诱导形成

睛是氢氰酸的一种取代物,其结构式一般为R·cNo70年代以来,对睛化物如乙睛tl,”和戊二睛【31等的微生物降解和代谢曾有过研究。近年来Yamadot4.,1报道了绿针假单胞菌(p,,,沙。,ooa,c五zororaPhis)B23水合丙烯猜成丙烯酞胺的研究。为了收集大量具有睛水合酶活力的细胞,我们研究了经丙睛诱导的恶臭假单胞菌JP~1细胞悬液对丙烯睛转化活力及其诱导形成的条件,以便更有效地应用于水合丙烯睛成丙烯酞胺的生产。 材料和方法 (一)菌种 恶臭假单胞菌(psoudomo,as Pu‘ida)Jp一l,由本实验室筛选鉴定。 (二)培养签 1.斜面和种子培养基:牛肉汁培养基,常规配方。 2.无机盐合成培养基组成(关):KZHPO,·3H,0 0.2,NaCI 0.1,MgSO二7氏00.02,pH7 .00 3.发酵培养基组成(%):甘油0.5,NaNO,0 .1,K:HPO二3H:0 0.2,NaCI 0.1,MgSO一...  (本文共4页) 阅读全文>>

《发酵科技通讯》2018年04期
发酵科技通讯

沈寅初院士作“丙烯腈水合酶的研究开发”专题讲座

2018年11月20日,沈寅初院士为浙江工业大学生物工程学院师生作了“科学思维与方法”系列讲座的第四讲——“丙烯腈水合酶的研究开发”,学院一百余人参加了本次讲座。讲座中,沈寅初院士回顾了从1980年代中期开始带领团队对丙烯腈水合酶的研究开发历程。他从丙烯腈水合酶研究课题的可行性分析谈起,讲到了如何成功地从泰安地区土壤中筛选到高活力的产腈水合酶微生物,并带领团队历经3次5年攻关,成功选育了高产酶量的优良微生物菌种,从而研究成功了微生物催化法生产丙烯酰胺的一整套高产、高效的生物催化产业化技术。该技术首先在浙江省桐庐汇丰生物化工有限公司中试成功,建立了我国第一套利用生物催化技术生产大宗化工原...  (本文共1页) 阅读全文>>

《食品与生物技术学报》2017年12期
食品与生物技术学报

腈水合酶制备关键技术研究

腈水合酶是一类可以催化腈类物质转化相应的酰胺类化合物的金属酶,工业上利用其催化丙烯腈转化为丙烯酰胺。该生物法制备丙烯酰胺工艺在1985年被开发,是生物法替代化学法的典型案例。随着丙烯酰胺的需求不断扩大,国内外研究机构及学者对腈水合酶产生菌的分离选育、菌株特性研究、酶的形成条件、酶的结构和性质、生物合成机制、翻译后的成熟机制等进行了深入研究。如中国专利CN201710456875.6公开了一种改造腈水合酶及其应用,该发明改造腈水合酶的抗逆性、耐热性和产物耐受性都有显著提升,并且没有导致腈水合酶活性的降低。改造腈水合酶可催化获得高浓度丙烯酰胺产物,且可以多批次回用。CN201610035437.8为一种球化酶技术固定化腈水合酶的方法,该方法包括以下步骤:(1)向腈水合酶溶液中加入保护剂PLL,混合均匀作为水相;另向正己烷中加入表面活性剂span-80,混合均匀作为油相;再把水相和油相混合搅拌制成粗乳液;(2)将上步得到的粗乳液在5~...  (本文共1页) 阅读全文>>

《微生物学杂志》1960年40期
微生物学杂志

腈水合酶产生菌的分离筛选及其特性研究

腈水合酶产生菌的分离筛选及其特性研究王浩(山东大学微生物技术国家重点实验室济南250100)摘要本研究进行了产腈水合酶菌种的分离筛选,对菌株SD—16进行了诱变,并对SD—16的生长、产酶条件以及腈水合酶的反应条件进行了研究。SD—16经鉴定确定为微球菌Micrococcussp.关键词腈水合酶;菌种筛选;Micrococcussp丙烯酰胺是一种用途广泛的精细化工产品,主要用于生产聚丙烯酰胺。聚丙烯酸胺除可用作纸张增强剂,钻井防卡剂、纤维处理剂、粘合剂、絮凝剂等以外,还在石油工业中作为三次采油的驱油剂被广泛地用于提高原油的采收率。由于目前大部分国产聚丙烯酸胺质量较差(系非生物连生产\不适合用来进行三次采油,因此我国石油工业每年大量用于三次采油的聚丙烯酸胺基本上依赖于进口,优质聚丙烯酸胺的国产化就成为一项亟待解决的问题。生物法生产丙烯酸脸,是利用微生物细胞产生的睛水合酶将丙烯睛转化为丙烯就胺。该工艺除具有反应条件温和(常温常压)、...  (本文共7页) 阅读全文>>

浙江大学
浙江大学

功能表达来源于Aurantimonas manganoxydans SI85-9A1的腈水合酶及其应用

腈水合酶(EC 4.2.1.84)是微生物体内代谢臆类物质的关键酶之一,可以催化腈水合成相应的酰胺。由于其催化效率高、反应条件温和、环境友好等特点,腈水合酶已经成功的应用于化学工业中合成酰胺类物质。腈水合酶基因一般以基因簇形式存在,包含α亚基,β亚基和激活蛋白。本实验室前期将来源于Aurantingaas manganoxydans SI85-9A1的腈水合酶基因NH08克隆并构建在重组大肠杆菌中。然而,β亚基的表达量远远低于α亚基,激活蛋白表达量也偏低。本文首先通过融合标签策略、双质粒策略、多顺反子策略等一系列研究,使激活蛋白的表达量提高了 5.14倍,酶活提高了 44.6%,达到120U/mL。其次,通过同义突变策略,使β亚基的表达量提高了 33%,最终酶活达到160U/mL。比酶活达到了 620.2U/mg,提高了 52.9%。再次,通过摇瓶培养条件优化,酶活达到了 1531.2U/mL,OD600达到了 15.6。最后在...  (本文共139页) 本文目录 | 阅读全文>>