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人蛋白激酶CK2α′亚基cDNA的克隆与测序

目的 构建人蛋白激酶CK 2α′亚基cDNA重组表达质粒 ,研究CK 2的结构与功能。方法 采用RT -PCR、定向克隆和DNA测序等一系列分子生物学技术进行本实验。结果 从人白血病细胞 (HL 60 )中获得了人CK   (本文共4页) 阅读全文>>

《癌症》2002年07期
癌症

小鼠蛋白激酶CK2α亚基的克隆、测序、表达及初步鉴定

背景与目的:蛋白激酶CK2是一种高度保守性的真核细胞中普遍存在的丝/苏氨酸激酶,它的活性在人的许多肿瘤细胞是升高的,可作为一种癌基因起作用。为了深入进行CK2结构与功能的研究,本研究拟构建小鼠蛋白激酶CK2α亚基cDNA重组表达质粒,并进行表达和初步鉴定。方法:通过反转录PCR从NIH3T3小鼠成纤维细胞获得小鼠CK2α亚基编码区cDNA。将NdeⅠ/BamHI双酶切PCR产物连接到同样双酶切并经牛小肠碱性磷酸酶去磷酸化的表达载体pT7-7进行定向克隆...  (本文共6页) 阅读全文>>

权威出处: 《癌症》2002年07期
《中山医科大学学报》1990年20期
中山医科大学学报

重组人蛋白激酶CK2_α亚基cDNA的克隆与测序

蛋白激酶CK2曾称酪蛋白激酶2(caseinkinase2)是由两个催化亚基(α或α′)和两个调节亚基...  (本文共2页) 阅读全文>>

《广东医学院学报》2002年03期
广东医学院学报

人蛋白激酶CK23个亚基cDNA的克隆与测序

目的 :构建人蛋白激酶 CK2 α、α′和 β亚基 c DNA重组表达质粒深入进行 CK2结构与功能的研究。方法 :利用 RT- PCR、定向克隆和 DNA测序等进行本实验。结果 :通过反转录 PCR从 HL - 60细胞中获得了人蛋白激酶 CK2α、α′和β亚基编码区 c DNA,将 Nde I/H ind 双酶切的 3种 PCR产物分别与同样双酶切的表达载体 p T7- 7进行定向连接。Ca Cl2 法分别转化 DH5α获转化子 ,快速提取质粒 DNA进行电泳初...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国生物化学与分子生物学报》1990年20期
中国生物化学与分子生物学报

重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序

蛋白激酶CK2是一种存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶.它是由两个催化亚基(α或α′)和两个调节亚基(β)组成的不均一四聚体.用反转录PCR从HL-60细胞中获得了人蛋白激酶CK2β亚基编码区cDNA,将NdeⅠ/HindⅢ双酶切PCR产物连接到表达载体pT7-7的NdeⅠ/HindⅢ双酶切位点中.转化感受态细菌DH5α获得转化子,阳性筛选率为72%.限制性酶切分析结果表明...  (本文共4页) 阅读全文>>

《重庆医科大学学报》2008年01期
重庆医科大学学报

人蛋白激酶CβⅡ基因开放读码框的克隆及序列分析

目的:克隆人蛋白激酶CβⅡ基因(PRKCB1)的开放读码框(Open reading frame,ORF),为其进一步的功能研究提供基础。方法:采用逆转录-巢式PCR法,从人脐静脉内皮细胞株中扩增出含PRKCB1基因ORF全长的片段,所得片段经加...  (本文共4页) 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

人蛋白激酶组—小分子相互作用预测

蛋白激酶是最庞大与功能最为丰富的基因家族之一。激酶在细胞信号通路及其它重要的细胞过程中起关键性调节作用,因此与大量疾病密切相关,成为继G-蛋白偶联受体之后第二大类药物靶点,其小分子抑制剂的筛选一直是药物开发的热点。为开发多靶点药物,激酶抑制剂的研究正向全激酶组高通量筛选方向发展。不过,基于全激酶组的大规模实验筛选费用很大,为降低实验成本,提高实验成功率,有必要开发人激酶组—小分子相互作用的预测系统,以对小分子与人激酶组所有激酶的结合亲和性进行预测,从中富集出少量较为可能的小分子与激酶进行相应的实验验证。本文首先利用Protein Data Bank所提供的113个已知人蛋白激酶的晶体结构为模板,对整个人激酶组的催化域进行结构建模。建模过程首先优化已知结构:将晶体结构中缺失的原子坐标补齐,并采用大规模结构精修计算技术对其优化,作为建模的结构模板;接着,在激酶组序列比对基础上,选择序列同源度最高的模板对激酶组其它约400个激酶进行同...  (本文共69页) 本文目录 | 阅读全文>>