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全反式维甲酸对人骨肉瘤细胞凋亡的诱导作用

维甲酸是一类与维生素A结构相似的天然或合成物质,临床上最早用于白血病的治疗,近来陆续有报道维甲酸能够诱导多种肿瘤细胞的凋亡,如乳腺癌、肺癌等。本研究以全反式维甲酸(all-transretinoic acid,ATRA)作用于骨肉瘤细胞,观察维甲酸对骨肉瘤细胞生长的影响。1材料和方法1.1试剂及仪器骨肉瘤细胞(MG-63)为本实验室冻存,ATRA购自Sigma公司,RPMI1640培养液为Gibco公司产品,胎牛血清为杭州四季青公司产品,MTT、二甲基亚砜(DMSO)购自武汉大风生物技术公司,An-nexin-Ⅴ-FITC凋亡检测试剂盒购自北京宝赛生物技术有限公司,原位细胞凋亡检测试剂盒为Roche公司产品。主要仪器包括ELX-800UV型酶标测试仪、FACSort型流式细胞仪(BCTON DICKSON)。1.2细胞培养MG-63细胞常规培养于25 ml培养瓶中,培养液为含10%FBS,100 U/ml青霉素和链霉素的RP-M...  (本文共3页) 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

研究双氢青蒿素对人骨肉瘤细胞增殖、转移和凋亡的影响及机制探讨

实验目的青蒿素,是一种极有效的抗疟疾中草药。其高效、低毒的抗疟疾作用,除被广泛应用于治疗疟疾外,许多研究已经证明,青蒿素还有显著的抗肿瘤效果。本研究以青蒿素的衍生物:双氢青蒿素(Dihydroarteminin,DHA)为研究对象,研究其对人骨肉瘤细胞增殖、转移和凋亡的影响,并进行分子机制探究。实验方法及步骤体外培养人骨肉瘤细胞株(MG63,U2OS,143B和Saos2),应用不同浓度的DHA分别对其干预24h和48h,筛选出对DHA最敏感细胞株和DHA的有效浓度范围。采用多种检测技术对细胞增殖、细胞凋亡和细胞转移侵袭等进行检测,观察DHA对人骨肉瘤细胞的影响,以及分子机制探讨。实验分组:空白对照(Control组),溶剂对照(0.1%DMSO),实验组(三个不同浓度的双氢青蒿素)。主要实验步骤如下:1.细胞增殖实验:结晶紫染色法和MTT(噻唑蓝)比色,分别对DHA干预前后细胞增殖活性进行定性、定量检测;克隆形成实验检测DHA...  (本文共49页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
浙江大学

极低频电磁场诱导人骨肉瘤细胞凋亡及其机制研究

研究目的:探索极低频电磁场(ELF-EMF)对人骨肉瘤细胞增殖凋亡的影响,并研究其分子机制。研究方法:通过MTT法研究50Hz, 1mT的ELF-EMF对人骨肉瘤细胞MG-63、MNNG-HOS Cl的增殖作用;通过流式细胞术检测5OHz, 1mT ELF-EMF处理人骨肉瘤细胞不同时间后细胞凋亡率、活性氧(ROS)水平以及给予活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)及p38MAPK抑制剂SB203580作用后细胞凋亡率的变化;通过蛋白质免疫印迹法检测50Hz, 1mT ELF-EMF处理人骨肉瘤细胞MG-63、MNNG-HOS Cl不同时间后及NAC干预后MAPK信号通路相关蛋白变化。研究结果:ELF-EMF够显著抑制人骨肉瘤细胞的增殖,处理3h后细胞存活率仅20%,且这种效应呈明显的时间依赖性;ELF-EMF可诱导人骨肉瘤细胞凋亡及促进ROS水平上升,给予2.5mM NAC干预后人骨肉瘤细胞凋亡率显著下降;ELF-EMF处理入...  (本文共51页) 本文目录 | 阅读全文>>

南昌大学
南昌大学

雷公藤红素对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及作用机制研究

目的:明确雷公藤红素对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及相关作用机制。方法:MTT比色法检测不同浓度、不同作用时间的雷公藤红素对人骨肉瘤细胞增殖的作用;Hoechst 33258染色荧光倒置显微镜下观察不同浓度雷公藤红素作用下人骨肉瘤细胞形态的变化;流式细胞技术检测不同浓度雷公藤红素对人骨肉瘤细胞凋亡的影响;Western blot检测不同浓度雷公藤红素作用下人骨肉瘤细胞凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,caspase-3,caspase-8,procaspase-9,cytochrome c和PARP的表达情况。结果:MTT比色法结果显示,雷公藤红素可显著抑制人骨肉瘤细胞(MG-63,U-2OS及HOS)的增殖,其抑制效应呈现浓度依赖性和时间依赖性。通过绘制细胞生长曲线发现雷公藤红素对人骨肉瘤U-2OS细胞的增殖抑制作用最为明显;Hoechst 33258染色荧光倒置显微镜下观察发现随着雷公藤红素作用浓度的升高,人骨肉瘤U-2OS细...  (本文共47页) 本文目录 | 阅读全文>>

《肿瘤防治研究》2009年05期
肿瘤防治研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对人骨肉瘤的作用

0引言肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是1995年发现的肿瘤坏死因子(TNF)超家族新成员。由于同家族的TNF、FasL在杀伤肿瘤细胞的同时对正常组织细胞亦有强烈的细胞毒作用而使其临床应用受到限制,TRAIL则在高效、快速地诱导肿瘤细胞凋亡的同时能赦免正常组织细胞,这种特点使其受到广泛关注。这种选择性杀瘤机制被认为是由TRAIL受体在正常组织与肿瘤组织中的不同分布规律决定的。另外,有证据显示TRAIL的抗肿瘤作用为p53非依赖型[1]。野生型p53是一个重要的抗癌基因,p53的变异或缺失参与骨肉瘤形成与耐药机制[2],也是骨肉瘤治疗疗效不佳的重要原因之一。因此,本实验研究TRAIL对人骨肉瘤中的作用及其与受体(TRAILR)在人骨肉瘤中的表达间的关系,试图阐明这个问题。1材料与方法1.1材料来源人骨肉瘤细胞系MG-63购于武汉大学中国典型培养物保藏中心。小牛血清及DMEM培养液均为Gibco公司产品。骨肉瘤新鲜组织标本...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国骨肿瘤骨病》2002年06期
中国骨肿瘤骨病

人骨肉瘤融合瘤的快速制备及其体外的免疫效应

随着现代分子生物学和免疫学发展进步,肿瘤疫苗日渐引人注目。我们对人骨肉瘤与活化B淋巴细胞融合瘤疫苗的制备方法及体外免疫原性作了初步探讨,紧扣利用抗原提呈细胞制备肿瘤疫苗的热点,探索个体化瘤苗可能方案,为进一步临床实验进行有意前期实验。材料与方法.主要试剂:PL一n人骨肉瘤细胞系,全军骨科研究所自建。PEG,Merk公司,分子量4000;pMA、rhIL 一2,PBH公司;培养体系均采用RPMI一1640培养基,购置GIBICO公司。二甲基亚矾、抗CD3、CD19、CD21、cD22单克隆抗体、抗人19抗体、金黄色葡萄球菌A蛋白,HYCLONE公司。实验中自己配制的培养体系如下详述:指数增长PL一n培养上清液制备:40%小牛血清RPMI一1640培养基,培养PL一n于指数期,取上清液,2000r/frlin,离心30han,收集上清,低温保存备用(用以降低对饲养细胞和局部目标细胞密度的要求水平)。配合瘤扩增培养基内均含有PL一H培...  (本文共5页) 阅读全文>>