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应用Frua-2测定人腹腔巨噬细胞胞浆游离钙浓度

作为第二信使系统的巨噬细胞内胞浆游离钙,其浓度的变化往往代表着细胞功能的启动、加强或抑制[1]。为了解子宫内膜异位症患者腹腔巨噬细胞活性变化,我们建立了应用Frua-2测定人单层贴壁腹腔巨噬细胞胞浆游离钙浓度([Ca2+]i)的方法。1材料与方法1.1原理Frua-2/AM在适宜条件下载入细胞,随后被胞浆的非特异性脂酶水解成Frua-2,后者与胞浆的游离钙结合后即可被特定波长的紫外光激发产生荧光,其发射光强度与[Ca2+]i之间存在在一定函数关系,据此可测定[Ca2+]i[2]。1.2主要仪器和试剂F-2000型双波长荧光分光光度计(HITACHI850),Frua-2/AM(Sigma),RPMI1640(GIBCO),小牛血清(天津血液病研究所),淋巴细胞分离液(上海试剂二厂),L-谷胺酰氨(E.Merck),EGTA(Sigma),Triton(Sigma),DTPA(Sigma)。1.3步骤1.3.1巨噬细胞的分离、培养...  (本文共3页) 阅读全文>>

《第二军医大学学报》198S年10期
第二军医大学学报

小鼠烧伤后腹腔巨噬细胞核因子κB的活化

腹腔巨噬细胞在烧伤后发生一系列变化,包括影响花生四烯酸代谢,产生肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素6(IL-6)等细胞因子。虽然有许多报道证实烧伤后腹腔巨噬细胞产生细胞因子增加,但是对调节细胞因子产生的机制报道较少。细胞核因子κB(NF-κB)是一种反式作用因子,正常情况下存在于细胞质,遇到感染、缺氧及氧自由基升高等应激状态时NF-κB迁移到细胞核,在相关DNA上调节细胞因子合成有关的顺式作用元件相结合,调节细胞因子的表达。本研究观察了烧伤后腹腔巨噬细胞NF-κB的活化及合成NO的情况。1材料和方法1.1腹腔巨噬细胞的获取取BALB/c雄性小鼠,4~5周龄,体质量20~25g。烫伤前剪毛,浸入沸水中9s造成20%Ⅲ度烫伤,烫伤后6h脱颈处死,腹腔注射DMEM培养液3.5ml,轻揉1min抽取含腹腔巨噬细胞的培养液放入培养板,5%CO2培养箱37℃培养。部分放置于玻璃片,3h后作免疫组化。部分细胞计数后调整细胞数为1×109...  (本文共2页) 阅读全文>>

《解剖科学进展》1999年04期
解剖科学进展

P物质对腹腔巨噬细胞吞噬能力的调节和细胞内钙离子浓度的调节

P物质(SP)是最常见的神经肽,尤其在胃肠道内含量丰富,SP是一种具有多种生物活性的神经肽,近年来其对免疫的调节作用日益受到重视。本实验的目的是观察SP对体外培养的腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响和对细胞内钙离子浓度的调节作用。方法:1巨噬细胞吞噬中性红后;2巨噬细胞与45Ca共同培养后,用液体闪烁计数测定其放射性,来反映巨噬细胞内Ca2+的浓度;3Fluo-3/AM作为荧光探针,应用激光共聚焦扫描显微镜观察巨噬细胞内游离钙离子浓度。结果:1分光光度计测定光密度显示SP对腹腔巨噬细胞的吞噬能力有促进作...  (本文共2页) 阅读全文>>

《武警医学》2007年10期
武警医学

山莨菪碱对妊娠期高血压疾病患者腹腔巨噬细胞分泌细胞因子的影响

妊娠期高血压疾病(Hypertension disorder compli-cating pregnancy,HDCP)是妊娠期威胁孕产妇健康及围产儿生命的一种特发性疾病,其病因及发病机制至今尚未完全阐明。妊娠期高血压疾病是以全身小动脉痉挛为基础的病理生理过程,以心、脑、肾和胎盘血管痉挛为临床表现的综合征。山莨菪碱为M受体阻断药,能有效抑制乙酰胆碱的释放,解除小动脉痉挛。山莨菪碱同时也是一种良好的细胞保护药,其中抗炎作用是其重要作用之一,但关于其抗炎作用机制的研究才刚刚起步。本实验采用体外分离培养腹腔巨噬细胞,从转录和翻译水平观察山莨菪碱对巨噬细胞产生TNF-α和IL-6的影响,探讨其治疗妊娠期高血压疾病的免疫机制,为临床应用提供实验依据。1对象和方法1.1对象选择2004年11月~2005年12月住院剖宫产单胎HDCP孕妇15例,其中妊娠期高血压(Gestational hypertension,GH)5例,平均孕周(38.8...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国现代医学杂志》2006年02期
中国现代医学杂志

妊娠期高血压疾病患者腹腔巨噬细胞分泌功能的变化

妊娠期高血压疾病(HDCP)是最常见的妊娠期合并症,同时也是严重威胁母婴健康的疾病,但其病因及发病机制至今未明。近年来,生殖免疫逐渐成为国内外学者关注的热点。大量研究表明,妊娠期高血压疾病发病的中心环节为广泛的血管内皮损伤,其中免疫因素起重要作用。本研究通过研究妊娠期高血压疾病腹腔巨噬细胞(Mφ)产生白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(Tumor necrosisfactorα,TNFα),探讨巨噬细胞分泌功能的变化。结果报道如下:1资料和方法1.1临床资料选择2003年11月 ̄2004年5月住院剖宫产附表两组Mφ培养上清液TNF-α和IL-6水平(x±s)注:1)与对照组相比,P0.05)。1.2方法1.2.1腹腔Mφ的获取与培养在连硬外麻下常规开腹,打开腹膜后通过注射器抽取膀胱子宫凹陷处腹腔液,立即置于肝素化无菌离心管中,以1000r/min、4℃离心10min,去除上清液,管底沉淀以6mL D-Hanks液洗涤2次,...  (本文共3页) 阅读全文>>

《生殖医学杂志》2001年04期
生殖医学杂志

子宫内膜异位症腹腔巨噬细胞释放血管内皮细胞生长因子能力的变化

子宫内膜异位症 (简称内异症 )是一种常见的妇科疾病 ,其病因尚不完全清楚。目前认为 ,随月经血逆流进入腹腔的子宫内膜碎片 ,种植在腹膜表面可能是其发病的基础 ,在体内任何移植物的成功种植都需有充足的血液供应 ,表明血管生成在内异症发病可能起着重要的作用。血管内皮细胞生长因子 ( vascular endothe-lial growth factor,VEGF)是一种重要的血管生长因子 ,能特异性地促进血管内皮细胞增生。近年来 VEGF在内异症发病机制中的作用受到人们的关注。本研究对内异症腹腔液 VEGF水平变化进行体内外观察 ,以探讨其来源。材料与方法一、研究对象1 999年 1~ 7月在我院行诊断性腹腔镜检查的不育妇女 45例 ,根据术后诊断分为两组 :内异症组 2 5例 ,按美国生育协会 ( AFS)修正标准分期 ,全部为 I、II期患者。术前未经任何治疗 ;对照组 2 0例 ,腹腔镜检查未发现异常 ,诊断为不明原因不育症...  (本文共3页) 阅读全文>>