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多顺反子腺病毒表达载体PCA_(13)/FasL-IRES-iNOS的构建和鉴定

一氧化氮合酶(NOS)基因已用于较多疾病的 体内外基因治疗研究,但用于门脉高压症的基因治 疗还鲜见报道。为了造就肝内免疫豁免的局部环 境,以解决腺病毒的免疫原性问题,延长目的基因 NOS的表达时间,需构建能同时表达Fas配体 (FasL)和诱导型NOS(iNOS)基因的载体系统。 为此,本研究利用内源性核糖体进驻位点(IRES)构建了能同时表达FasL和iNOS基因的多顺反子腺病毒表达载体PCA,3/FasL一IRES一iNOS,以进一步观察FasL对腺病毒载体的免疫保护作用,为实施门脉高压症的基因治疗作必要的准备。材料与方法一、材料多克隆位点BamHI一Hind班克隆有FasL基因胃肠病学2003年第8卷第4期的质粒PKS购自上海市免疫学研究所。含iNOS基因的质粒PSP由协和医科大学基础医学院刘景生教授惠赠。质粒pUC6s、puroIRES、Pblueseript、PCA13和大肠杆菌DH6仪由中国科学院上海生物化学研究所提...  (本文共3页) 阅读全文>>