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改造的HPV16型E7基因重组穿梭质粒的构建与鉴定

人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种双链DNA病毒,其中高危的HPV16、18型与宫颈癌等肿瘤的发生密切相关,宫颈癌中HPV-DNA的检出率可高达99%〔1〕。每年约有50万新发宫颈癌病例,25万人死亡,其中大部分在发展中国家,占80%左右〔2〕。近年,年轻宫颈癌患者明显增加,每年以2%~3%的速度增长〔3〕。世界卫生组织已经将宫颈癌定性为一种感染性疾病,而HPV16型病毒是导致55%宫颈癌的元凶。高危型HPV的E6、E7基因被证实为转化基因,在相关组织中构成表达,具有很强的抗原性。并且,正常组织中不存在这两种蛋白。因此,E6和E7蛋白就成为HPV16相关宫颈癌及癌前病变治疗性疫苗的理想靶抗原。实验中构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pMCW-mE7,并对重组质粒进行了鉴定,为进一步研究宫颈癌治疗用重组BCG奠定了基础。材料和方法1菌株和质粒克隆菌DH5a及大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pMV261...  (本文共5页) 阅读全文>>

《华西医科大学学报》2002年01期
华西医科大学学报

结核分枝杆菌抗原蛋白ESAT-6基因重组穿梭质粒的构建与鉴定

当前全球结核病流行情况十分严峻 ,全世界已有 1 /3的人口受到结核菌感染。近年来由于结核杆菌多重耐药菌株及 HIV感染者增多 ,使结核病发病率和死亡率呈上升趋势。目前广泛用于预防结核病的唯一疫苗是卡介苗 ,但其免疫保护效果在不同地区人群中存在巨大差异 ( 0~ 80 % ) ,而且若接种于AIDS患者 ,可能引起致死的播散性疾病。所以 ,改造卡介苗、开发新疫苗势在必行。ESAT- 6是在结核分枝杆菌培养物滤液中发现的一种分泌性蛋白质 ,在结核杆菌感染早期阶段即可被机体识别 ,在保护性细胞免疫中发挥作用 [1] ,可作为新疫苗的候选分子。而卡介苗由于其缺失 esat-6基因 ,不能产生 ESAT- 6抗原蛋白。本研究通过构建 esat- 6基因重组质粒载体 ,旨在使卡介苗表达ESAT- 6抗原蛋白 ,从而增强其免疫原性和免疫保护性 ,探索将该重组卡介苗用作新型结核病疫苗的可行性。1 材料和方法1 .1 材料1 .1 .1 主要试...  (本文共5页) 阅读全文>>

《川北医学院学报》2006年03期
川北医学院学报

结核分枝杆菌Rv2994基因重组穿梭质粒的构建与鉴定

近年来由于HIV与结核分枝杆菌伴发感染以及结核分枝杆菌多重耐药性菌株的出现,使结核病的发病率和死亡率呈上升趋势,我国卫生部日前公布的全国法定传染病疫情,肺结核从2005年以来均高居甲、乙类传染病报告发病数和死亡数首位。结核分枝杆菌由于其特殊的细胞壁结构,对多种药物有天然的耐药性,耐药机制复杂,耐药菌株的出现是治疗失败的主要原因[1]。1998年,Cole等[2]发布了结核分枝杆菌H37Rv全基因测序结果,使人们能从基因水平研究结核分枝杆菌的耐药机制。最近,一组结核分枝杆菌膜蛋白引起了广泛的关注,利用生物信息学的方法分析发现,该组蛋白可能与抗结核药物的外排有关,鉴定其确切功能,对耐药机制的研究、新药研发及有效治疗方案的制定都具有重大的意义。本研究以结核分枝杆菌假想药物外排泵蛋白编码基因Rv2994为研究对象,将Rv2994基因克隆入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pMV261,构建并鉴定重组质粒,为进一步研究该基因及其编码蛋白质的功能提...  (本文共4页) 阅读全文>>

《病毒学报》2011年05期
病毒学报

狂犬病病毒糖蛋白重组人腺病毒的构建及免疫效果的初步研究

狂犬病是由狂犬病毒感染引起的一种病死率极高的人畜共患传染病,在世界范围内均有流行。每年约有超过55 000人死于狂犬病,而绝大多数是发生在非洲和亚洲的发展中国家[1-3]。在我国,每年正式上报的狂犬病死亡人数超过2000人,而因犬咬伤进行的暴露后治疗(PEP)案例则多达数百万例。迄今为止,预防接种仍然是控制人或动物狂犬病的最有效方法,而在我国农村等经济欠发达地区,因为流浪犬及散养家犬大量存在,捕捉及注射免疫困难,导致犬的免疫覆盖率仍然维持在极低的水平。这在很大程度上造成了狂犬病发病率的居高不下。因此,研制安全、高效且廉价的基因工程疫苗成为解决我国狂犬病问题的重要措施之一。狂犬病病毒糖蛋白是唯一裸露于病毒粒子表面的蛋白,是唯一能诱导机体产生保护性中和抗体的病毒抗原,而且能够刺激T淋巴细胞的增生[4-5],所以基因工程疫苗研制中普遍采用糖蛋白基因作为研究的靶基因。人腺病毒因其感染的细胞类型广泛,临床症状轻[6],在动物体内少有天然存...  (本文共5页) 阅读全文>>

《四川大学学报(医学版)》2007年01期
四川大学学报(医学版)

大肠杆菌-钩端螺旋体重组穿梭质粒pGKINVA的构建及重组钩体的筛选

在我们前阶段的研究中,已克隆出赖型钩体的致病相关基因invA,并在大肠杆菌中表达和纯化该蛋白,初步探讨了该蛋白的体外功能[1]。为进一步阐明其分子致病机制,我们以双曲钩体-大肠杆菌穿梭质粒pGK b le24为载体,构建了大肠杆菌-钩端螺旋体重组穿梭质粒pGK INVA,电穿孔入钩体PatocⅠ株,筛选出重组钩体PatocⅠ株,将有助于阐明invA基因在钩体体内中的功能分析,为研究钩体基因功能提供一种有效的技术手段。1材料与方法1.1材料1.1.1质粒和菌株大肠杆菌双曲钩体穿梭质粒pGK b le24由法国巴斯德研究所P icardeau M博士赠送,钩体PatocⅠ株和E.coli JM 109由本室传代保存。1.1.2主要试剂DNA限制性内切酶A atⅡ,Xm aⅠ购自NEB公司,M ass Ru lerTMDNA Ladder为M B I公司产品;P fu DNA聚合酶、dNTP为加拿大BB I公司产品;DNA M ark...  (本文共3页) 阅读全文>>

《动物医学进展》2011年12期
动物医学进展

小反刍兽疫病毒N基因在昆虫细胞中的表达

小反刍兽疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminantsvirus,PPRV)引起的临床以发热、口炎、腹泻和肺炎为主要特征的小反刍动物的一种急性高度接触性传染病,对绵羊和山羊的发病率和病死率分别高达100%和90%[1],在发展中国家引起严重的社会经济问题,被世界动物卫生组织(OIE)列为必需报告的动物疫病[2],在我国列为一类动物疫病。该病于1942年在非洲西部的象牙海岸首次暴发[3],其后流行于撒哈拉以南和赤道以北的多数非洲国家,中东到土耳其的几乎所有国家,南亚、西亚、印度和它的邻国都广泛传播,在全球分布呈扩散和从西向东移动的趋势[4]。2007年7月,该病首次传入我国[5],暴发于西藏阿里地区,对该地区的畜牧业造成了巨大的经济损失。PPRV属于副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbolivirus)。PPRV...  (本文共5页) 阅读全文>>