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酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)启动子片段的亚克隆

外源基因在酿酒酵母受体中高效表达、糖昔化和分泌,需有相应的载体、受体系统,而构建载体就需要有强的启动子,因为酿酒酵母蛋白表达水平的调控主要发生在转录水平上。酿酒酵母糖酵解过程中,磷酸甘油醛脱氢酶的3个等位基因(PGD)和单拷贝的磷酸甘油酸激酶基因(PGK)蛋白产物最高分别占总蛋白的8%和4%,这说明它们的启动子有很强的启动功能。因此现在酵母工程菌的高效表达载体系统多由这两类启动子所构建〔l-。1 我们已将PGKI基因完整地克隆到大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒PCN60上卜’。本文报道用DNA外切酶逐步消解PGKI基PJ的蛋白编码顺序,分离不同长度的启动子片段,再用酿酒酵母的启动子探针载体筛选出具有强启动功能的17NA片段,构建具有强启动子的表达载体。l 材料和方法1·1 材料1.1.1 菌株:实验所用菌株见表1。1.1.2 质粒和噬菌体:PCN60(P(}KI)为本组杨艳卿等构建‘’‘;PVC727为日本大皈大学原岛俊教授赠给[’‘;...  (本文共8页) 阅读全文>>

大连医科大学
大连医科大学

磷酸甘油酸激酶1启动子核心区域的确定及转录活性的分析

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)是嗜肝DNA病毒的一种,常导致严重肝病,包括肝硬化和肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)。在HCC的形成过程中,乙型肝炎病毒(HBV)的慢性感染是引发肝细胞癌的主要危险因子。最近的研究发现,糖酵解与肿瘤的形成和预后关系密切。磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase PGK)是糖酵解的关键酶,在正常肝组织中,PGK1蛋白表达水平明显低于肝硬化和肝癌组织,HCC患者糖酵解作用增强,提示PGK1表达水平可作为HCC患者预后的独立指标。目的:本研究旨在应用实时荧光PCR方法证实HBx蛋白对PGK1的反式激活作用;考察HBxAg对启动子活性的影响;验证核心启动子序列中SP1结合位点具有与肝癌相关细胞系的细胞核蛋白结合的活性。方法:应用实时荧光定量PCR技术比较在HepG2.2.15细胞中与人HepG2细胞中PGK1在mRNA...  (本文共46页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国热带医学》2005年02期
中国热带医学

磷酸甘油酸激酶的研究进展

磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase PGK)是糖酵解的关键酶,也是每种生物得以生存的必须酶,该酶的缺乏可引起生物体代谢等功能的紊乱。PGK是一个单体的、高度柔曲性的糖酵解酶,它主要由两个球形的结构阈构成,在与底物结合的过程中发生显著的构相改变,最终发生催化效应。该酶在一些细菌细胞中只有一种,而在大多数生物体内则含 2~3 种同工,这些同工酶除在生物体内的分布不一样外,还表现出独特的生物学功能。PGK存在于所有的有机生命中,在整个进化过程中,它的序列是高度保守的。人们根据这一保守特点,罗列9 个PGK蛋白质指纹,从而为未知的PGK序列提供生物信息学的鉴定依据。本文主要从 PGK的基因结构,蛋白质的结构和功能以及人们如何通过PGK进化树和指纹等方法来鉴定物种和未知序列这几个方面进行综述。 磷酸甘油酸激酶的功能糖酵解是 PGK的主要功能,在糖酵解第二个阶段的第二,它催化1,3-二磷酸甘油酸(1,3-diph...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》2004年05期
中国寄生虫学与寄生虫病杂志

华支睾吸虫3-磷酸甘油酸激酶基因的扩增、克隆及表达

华支睾吸虫病是一种由华支睾吸虫感染引起的人兽共患病 ,主要通过食用含有华支睾吸虫囊蚴的鱼生而感染。该病主要分布于东亚和东南亚地区 ,截至1985年 ,全世界将近 2 80 0万人感染[1,2 ] 。我国是华支睾吸虫病的主要流行区之一 ,因此 ,研制诊断试剂盒对于华支睾吸虫病的防治显得非常重要。目前 ,市场上销售的该病的快速诊断试剂盒还不理想[3 5] ,所以寻找并生产基因工程重组抗原有非常重要的意义。本文克隆及表达了华支睾吸虫 3 磷酸甘油酸激酶 (3 phospho glyceratekinase ,PGK)基因 ,报告如下。材料与方法1 材料华支睾吸虫囊蚴取自广西南宁。E .coliJM10 9与质粒GEX 4T 1为本室保存。应用PCR和DNAclub软件对已知PGK基因序列分析 ,根据载体结构图 ,设计一对在 5′端分别引入EcoRI和XhoI酶切位点的特异引物 :P1:5′ GCGAATTCATGGGGCTTCGCAA...  (本文共3页) 阅读全文>>

《细胞与分子免疫学杂志》2013年10期
细胞与分子免疫学杂志

白念珠菌磷酸甘油酸激酶1的原核表达及免疫原性分析

念珠菌是真菌感染最常见的病原体,可引起皮肤、黏膜感染,也可侵入深部器官导致危及生命的重症侵袭性感染。侵袭性念珠菌病(invasive candidia-sis,IC)是指由念珠菌属病原菌引起的系统性真菌感染,其中念珠菌血流感染(bloodstream infection,BSI)占医院获得BSI中的第4位,在重症监护室发生的侵袭性念珠菌病中,其病死率可高达49%[1]。目前对念珠菌病尤其是侵袭性念珠菌病诊断困难,实验室诊断手段单一,患者治疗常常被延误,致死率高。因此,研究快速有效的实验室诊断试剂有很强的实际意义,能极大提高临床真菌感染性疾病的诊疗和防治水平。磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase,PGK-1)是白念珠菌表面蛋白中的主要抗原蛋白之一[2-3],本研究选取了编码PGK-1的基因序列,构建其原核表达质粒并在E.coli BL21(DE3)中表达,研究其免疫原性,为进一步研究该蛋白在临床快速诊断...  (本文共4页) 阅读全文>>

《世界华人消化杂志》2008年17期
世界华人消化杂志

食管鳞癌肿瘤相关抗原磷酸甘油酸激酶1的鉴定

■背景资料食管癌是我国常见恶性肿瘤之一,居我国恶性肿瘤死亡第4位.5年生存率只有25%-30%,如果早期发现,及时治疗,5年生存率可达70%以上.因而,早期发现,早期治疗是提高食管癌治愈率、改善疗效的关键.20世纪70年代发现肿瘤患者体内可以检测到自身抗体和(或)自身反应性T淋巴细胞,证实了肿瘤抗原的存在.■同行评议者王健生,副教授,西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤外科0引言食管癌是我国常见恶性肿瘤之一,居恶性肿瘤死亡率第四位.5年生存率只有25%-30%,如果早期发现,及时治疗,5年生存率可达70%以上[1].因而,早期发现,早期治疗是提高食管癌治愈率、改善疗效的关键.在我国食管癌的主要组织学类型是食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC).食管癌缺乏特异血清学标志.目前,食管癌相关血清标志有癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA),细胞角蛋白...  (本文共7页) 阅读全文>>