分享到:

磷酸甘油氧化酶的菌种选育及发酵条件

在心脏病和高血脂的临床诊断中,血清中甘油三酯的含量是一个重要指标。酶法测定甘油三酯因其高度专一、灵敏、快速、微量等优点将逐步取代陈旧的,非专一的化学法。其中国外文献推荐较多的是磷酸甘油氧化酶法‘’-”。但目前酶试剂昂贵,国内尚无生产此酶的试剂盒,因而亟待研制开发。 磷酸甘油氧化酶是甘油三酯试剂盒测定反应中的最后一个酶,要求它有更高的专一性和酶活力及比活力。目前国内还没有此酶的报道,也无商品酶出售。磷酸甘油氧化酶可从不同来源的生物组织中提取出来,包括猪脑’‘’、飞行肌l’]、酵母l‘1、大肠杆菌I’]、乳杆菌[’]及链球菌[’]等等。国外文献报道较多的是 StraptococcusfQecalis[’‘’]。此外,Sir叩tococc。thermophl拙s、Pedlococcus Sp·和 AercocCm CIC\CS中也提取到较高比活的磷酸甘油氧化酶(Signa公司)。我们从多株链球菌中筛选、诱导出产磷酸甘油氧化酶活力较高的...  (本文共6页) 阅读全文>>

四川大学
四川大学

产磷酸甘油氧化酶菌种的筛选、鉴定及酶的分离纯化与性质研究

磷酸甘油氧化酶(GPO,E.C.1.1.3.21)是用偶联酶法测定甘油三酯含量的关键酶之一,以其特有的高特异性和高灵敏度现已被广泛地应用到心脏病和高血脂的临床诊断中。由于不同菌种所需的营养与培养条件不同,不同菌种来源的磷酸甘油氧化酶酶学性质和作用机理也不同,因此,本论文从产磷酸甘油氧化酶菌种的筛选及鉴定;Enterococcus sp.产磷酸甘油氧化酶的形成条件及该菌株扩大化培养的条件;酶的分离纯化及其基本性质四部分对Enterococcus sp.磷酸甘油氧化酶进行了研究。主要研究结果如下:1.经过筛选,从23株菌株中选取B0502作为磷酸甘油氧化酶的生产菌种,其产酶活性达到0.231U/mL。该菌种经初步鉴定为Enterococcus sp.。2.以Enterococcus sp.作为研究对象,利用单因素和正交试验对Enterococcus sp.的发酵培养基及发酵条件进行了研究。优化的参数为:最优培养基组成(%):葡萄糖0...  (本文共87页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
四川大学

Enterococcus faecalis磷酸甘油氧化酶基本性质的研究

核糖体小亚基RNA(16S rRNA)基因为所有的细菌共有,且其与细菌整个基因组的变化相比,具有高度的保守性。因此用16S rDNA保守区引物进行PCR扩增,可快速检测细菌。本文用16S rDNA的PCR方法并结合其它形态学方法,对筛选出的产磷酸甘油氧化酶(GPO,EC 1.1.3.21)细菌进行了鉴定,确定为Enterococcus faecalis(粪肠球菌)。通过发酵罐扩大培养,经离心收集菌体,超声波破碎,40%~80%硫酸铵沉淀法或双水相萃取,继而采用Q-Sepharose FF、Phenyl-Sepharose CL-4B、Chelating Sepharose FF和Sephacryl S-200HR层析纯化,纯化的GPO在还原、非还原SDS-PAGE中显示单一条蛋白着色带,对应的表观分子质量为67.6 kDa,用HPLC测得其表观分子质量为121 kDa,综合分析推测该酶由2个分子质量相同的亚基以非共价键聚合组成。...  (本文共53页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物医学工程学杂志》2014年01期
生物医学工程学杂志

聚乙二醇/(NH_4)_2SO_4双水相体系分离纯化α-磷酸甘油氧化酶

引言血清中甘油三酯的浓度是临床高血脂和心脏病检测的重要指标[1]。该检测方法的反应机制可以概括为四步反应:(1)甘油三酯脂蛋白酯酶(LPL→)甘油+脂肪酸;(2)甘油甘油激酶(GK→)α-磷酸甘油(α-GP);(3)α-磷酸甘油+O2α-磷酸甘油氧化酶(α-GPO→)磷酸二羟丙酮(DHAP)+H2O2;(4)2H2O2+4-氨基安替比林(4-AA)+苯酚→过氧化物酶醌胺+4H2O作为现代临床分析和检测广为使用的方法,α-磷酸甘油氧化酶(α-glycerophosphate oxidase,α-GPO,E.C.1.1.3.21)作为甘油三酯测定的关键酶之一,具有高特异性和高灵敏度的特点[2-4]。GPO不仅广泛存在于飞行肌组织中[5],而且也可以从微生物的发酵产物中提取获得。国外对α-GPO的研究报道较多,发现能产生GPO的微生物包括Esche-richia coli.、St...  (本文共6页) 阅读全文>>

《沈阳师范大学学报(自然科学版)》2009年03期
沈阳师范大学学报(自然科学版)

半自然驯化条件下黑线姬鼠冬夏两季产热的比较

0引言在季节性环境中,各种生态因子如环境温度、光周期、食物数量和质量等均对动物的能量代谢和产热能力产生影响。尤其是栖息在北半球高纬度地区的小型哺乳动物,在冬季要面临食物可获得性降低和低温的双重胁迫,因此它们在形态、行为和生理等诸方面都进化出一些策略以适应环境、保证存活[1-2]。温度的季节性变化是导致小型哺乳动物体重、产热能力和能量代谢出现季节性变化的重要环境因子[3]。为应对寒冷的胁迫,许多小型哺乳动物在冬季提高产热能力[4],包括基础代谢产热(基础代谢率,Basal metabolic rate,BMR)和非颤抖性产热(Non-shivering thermogenesis,NST)能力的提高。褐色脂肪组织(Brown adipose tissue,BAT)是小型哺乳动物适应性产热的主要器官,对低温环境下产热能力的提高贡献很大。此外,肝、骨骼肌等也在冷适应产热增加中起重要作用。研究表明,许多小型哺乳动物如根田鼠(Microt...  (本文共5页) 阅读全文>>

四川大学
四川大学

双水相萃取尿酸酶和磷酸甘油氧化酶

双水相萃取技术是一种利用物质在两相间选择性分配的分离纯化技术,其原理与水—有机相萃取原理相似。双水相体系是指高聚物之间或高聚物与无机盐之间以适当的浓度溶解后形成互不相溶的两相或多相体系。该体系含水量高,蛋白在其中不易变形;表面张力低,有助于强化相间的质量传递;分相时间短,易于放大和连续操作,萃取环境温和,生物相容性好等,考虑到双水相萃取技术的以上诸多优势,因此本文就采用了双水相萃取技术分离纯化尿酸酶和磷酸甘油氧化酶,建立了适当的双水相体系,并对影响萃取效果的各种因素(如:两相物质的组成比例,PH值,无机盐的加入,粗酶的浓度等)进行了研究。同时对萃取后,酶的进一步分离纯化和鉴定作了相关研究。主要研究结果如下:1.选用PEG和硫酸铵作为双水相体系的组成部分,分别用三种分子量的PEG(即PEG400,PEG600,PEG2000)与硫酸铵建立起三种双水相体系。并确定了组成浓度的范围。2.利用三种双水相体系萃取分离发酵后的菌体破碎液中的...  (本文共93页) 本文目录 | 阅读全文>>

《山东医药》1997年02期
山东医药

1130例高校中老年教职工血脂测定结果分析

我们对山东大学1130例中老年教职工的血脂水平进行了测定。现将结果报告如下。 调查对象:山东大学教职工1130例,其中40~59岁组男514例、女396例,60岁以上组男140例、女80例。 检测方法:总胆固醇(‘rc)用氧化酶法.甘油三酯(’FG)用磷酸甘油氧化酶法。 结果与分析:检测结果见附表。由表可以看出.1130例中老年教职工的’FC、TG均高于相应年龄组的...  (本文共1页) 阅读全文>>