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木质素过氧化物酶基因(LipH8)的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达

木质素过氧化物酶 (Lip)是一类由白腐真菌分泌的可以降解木质素的蛋白质 ,自然界中诸如黄孢原毛平革菌(Phanerochaetechrysosporium)等白腐菌均能分泌木质素过氧化物酶。它是由一系列含有血红素辅基的同功酶组成的 ,分子量在 38~ 4 3kD ,其主要成分为LipH8[1 ] 。木质素过氧化物酶可以用来进行生物废物处理、催化复杂化学转化 ,尤其在生物降解木质素等方面有重要应用。因此 ,从自然资源合理利用和持续发展战略的角度考虑 ,进行木质素过氧化物酶的研究对农业和环境工程的发展具有重要意义。但是利用黄孢原毛平革菌生产木质素过氧化物酶发酵周期长 ,培养基要求高 ,酶活力低 ,而且其菌丝在发酵罐中易受高剪切力的损伤[7] 。因此研究木质素过氧化物酶的异源表达具有重要的现实意义。国外学者在木质素过氧化物酶的异源表达方面进行了一些工作。有人在杆状病毒中进行LipH8和LipH2基因的异源表达 ,但表达水平较低 ,发...  (本文共3页) 阅读全文>>

天津科技大学
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木质素过氧化物酶基因表达载体的构建及其在甲醇毕赤酵母中的表达

木质素过氧化物酶(Lignin peroxidase,Lip)是一种由黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)分泌的单血红素糖蛋白。利用黄孢原毛平革菌生产木质素过氧化物酶受到许多因素的限制。例如:只有在限氮或其它不均衡的培养基中才能分泌木质素过氧化物酶并且酶活较低,同时其菌丝在发酵罐中易受高剪切力的损伤。本论文以黄孢原毛平革菌5.776为出发菌株,研究了lipH8基因在甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)中的表达。采用TRIZOL试剂提取黄孢原毛平革菌RNA,以此RNA为模板,通过RT-PCR技术进行体外扩增,得到了去掉自身信号肽的木质素过氧化物酶基因(lipH8);将lipH8基因克隆至载体pUC19,获得克隆载体pUC19-lipH8,转化大肠杆菌DH5α;经序列测定确认所得到的基因与报道的木质素过氧化物酶基因序列完全一致。将测序确认正确的lipH8克隆至甲醇毕赤酵母整合型表达...  (本文共74页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津科技大学
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木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶基因的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达

木质素过氧化物酶(Lignin peroxidase,Lip)和锰过氧化物酶(manganeseperoxidase,Mnp)是由黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)分泌的单血红素糖蛋白。利用黄孢原毛平革菌生产木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶受到许多因素的限制。例如:只有在限氮或其它不均衡的培养基中才能分泌并且酶活较低,同时其菌丝在发酵罐中易受高剪切力的损伤。本论文重点研究木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶基因的克隆及在甲醇毕赤酵母中的表达,并对工程菌发酵条件和培养基进行了研究。主要研究内容和结果如下:[1]包含信号肽的lipH8基因在甲醇毕赤酵母中的表达以黄孢原毛平革菌RNA为模板,通过RT-PCR获得包含信号肽的lipH8基因片段,克隆进入pMETA载体得到在甲醇酵母表达的pMETA-lipH8重组质粒,将其线性化后用电穿孔法导入pichia methabolica pMAD16,筛选得到1株表...  (本文共119页) 本文目录 | 阅读全文>>

《云南大学学报(自然科学版)》2004年S2期
云南大学学报(自然科学版)

去信号肽的木质素过氧化物酶基因在甲醇毕赤酵母中的表达

木质素过氧化物酶(Lip)是一类由白腐真菌分 泌的可以降解木质素的蛋白质,自然界中诸如黄抱 原毛平革菌(Phanerochaete chl,505加rium)等白腐 菌均能分泌木质素过氧化物酶.它是由一系列含有 血红素辅基的同功酶组成的,分子量在38一43 kD,其主要成分为LipHS[l].木质素过氧化物酶可 以用来进行生物废物处理、催化复杂化学转化,尤 其在生物降解木质素等方面有重要应用.因此,从 自然资源合理利用和持续发展战略的角度考虑,进 行木质素过氧化物酶的研究对农业和环境工程的 发展具有重要意义.但是利用黄抱原毛平革菌生产 木质素过氧化物酶发酵周期长,培养基要求高,酶 活力低,而且其菌丝在发酵罐中易受高剪切力的损 伤川.因此研究木质素过氧化物酶的异源表达具 有重要的现实意义. 国外学者在木质素过氧化物酶的异源表达方 面进行了一些工作,有人在杆状病毒中进行LipHS 和LipHZ基因的异源表达,但表达水平较低,发酵 液...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国畜牧杂志》2004年12期
中国畜牧杂志

安琪酵母股份有限公司——中国酵母行业的排头兵

安琪酵母股份有限公司是从事酵母及酵母衍生物产品生产、经营、技术服务的专业化公司 ,是国家重点高新技术企业。公司主导产品包括面用酵母、酵母抽提物、营养酵母、酿酒酵母、生物饲料添加剂等。产品应用领域为烘焙、发酵面食、酿酒等食品制造业及医药保健、动物营养业等。公司酵母生产规模、市场占有率均居于国内同行之首 ,是中国酵母行业的排头兵 ,“安琪”商标是中国弛名商标。公司前身为宜昌食用酵母基地 ,始建于 1986年 ,是由原国家科委中国生物工程开发中心、中科院微生物所、国家计委科技司 3家联合建议立项 ,国家计委布点的全国唯一一家活性干酵母工业性试验基地。 1998年改制设立安琪酵母股份有限公司 ,2 0 0 0年公司股票在上海证券交易所挂牌上市。公司拥有雄厚的科研开发力量 ,设有“国家科技成果重点推广计划 -酵母技术研究推广中心”、国家级博士后科研工作站 ,并聘请多名外籍专家为高级技术顾问。公司设有分子生物学、菌种保藏、发酵工艺、酵母抽提...  (本文共1页) 阅读全文>>

《四川大学学报(工程科学版)》2004年01期
四川大学学报(工程科学版)

利用含铬废革料制备富铬酵母的研究(Ⅱ)——富铬酵母的制备

铬(Ⅲ)的代谢、体内分布以及其生物功能的体现都强烈地依赖于铬(Ⅲ)化合物的具体化学形态,因此并非所有形态的铬(Ⅲ)化合物都具有生物活性。无机铬难以吸收,而有机铬配合物则较易吸收,此外,只有某种或某几种特定形态的铬化合物才具有生物活性,吸收到体内的其它形态的铬只有转化成为生物活性铬后才能发挥其生物功能。因此选择适当的铬载体是一个非常关键的问题。目前普遍认为无机铬形式的补铬制剂不利于吸收,而有机铬则能明显地改善铬的吸收[1]。近期内有关报道的有机铬形式主要有富铬酵母、吡啶羧酸铬[2]、葡萄糖酸铬[3]和加铬复合纤维[4]等,其中富铬酵母是效果最好、使用最普遍的有机铬制剂。富铬酵母的铬载体是酿酒酵母(又称啤酒酵母,Saccharomycescerevisi ae)。以酿酒酵母作为铬的有机载体具有安全性好[5]、易于生产、能够富集多种微量元素[6]等具有诸多优势,应用意义十分显著。富铬酵母的制备一般都是通过在普通酵母培养基中加入无机铬盐...  (本文共5页) 阅读全文>>

《大陆桥视野》2004年11期
大陆桥视野

酵母企业埋怨进口压力大

阿拉木图酵母厂有限责任公 司是哈国唯一一家生产酵母的中 型专业厂家,建厂已35年。不久 前,该企业生产的含碘酵母在日 内瓦评展会上获得了荣誉证书和 奖章,并首次出口到国外。 众所周知,面包在哈萨克斯坦 是人们主要的食品之一。酵母作为 面包生产不可替代的重要添加成 分,其市场需求量很大。据专家评 估,哈国面包业每年对酵母的需求 在25000一27000吨之间。阿拉木图 酵母厂的产量只有6000吨,其产 品完全不愁销路,发展前景也很 广。但问题并不那么简单,该厂埋 怨来自俄罗斯、中国和土耳其的产 品给其造成的压力过大。这些国家 生产的酵母通过各种渠道大量涌 人哈国,其中正规进口的为4000~ 5000吨。另有15000一16000吨则 是通过走私及其它“黑色”和“灰 色”的渠道进人哈国。除此而外,俄 罗斯、中国、土耳其的生产厂家还 对哈酵母生产企业实行“贸易战”, 他们的主要武器就是价格,将自己 产品的价格压得很低,使消费者认 为进...  (本文共1页) 阅读全文>>