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抗反馈抑制的天冬氨酸激酶基因在钝齿棒杆菌中的表达

自1957年Kinoshita等[1]从土壤中分离到谷氨酸棒杆菌(Corynebacteriumglutamicum)用于生产谷氨酸以来,人们对利用棒杆菌发酵生产氨基酸进行了广泛的研究。由于赖氨酸是人和动物的第一必需氨基酸,在医药、食品、饲料等领域有着广泛的用途,因此利用棒杆菌发酵生产L-赖氨酸一直是该领域研究的热点之一。天冬氨酸激酶作为赖氨酸生物合成途径中第一个关键酶,对产物积累有至关重要的作用,其活性受途径末端产物赖氨酸和苏氨酸协同反馈抑制[2]。在细胞内,赖氨酸的结构类似物S-(α-氨乙基)-D,L-半胱氨酸(AEC)可与L-苏氨酸协同反馈抑制天冬氨酸激酶活性。因此通过筛选抗AEC的菌株,可以得到解除对天冬氨酸激酶反馈抑制的突变株,从而提高天冬氨酸激酶活性,增加产物赖氨酸的积累。C.crenatumAS1.542是我国研究者自行分离得到的棒杆菌,钝齿状,不产芽孢。其突变株C.crenatumCD945为高丝氨酸缺陷型,具有...  (本文共4页) 阅读全文>>

《生物工程学报》1989年01期
生物工程学报

质粒pXZ10145DNA转化棒杆菌原生质体的研究

棒杆菌属中有许多菌是重要的工业生产菌株。在这类细菌中建立分子克隆系统有很大意义。利用重组DNA技术不仅可以进行定向改良菌种,而且还可以阐明棒杆菌的遗传体系及其代谢调控机制。目前国外许多公司和实验室采用重组DNA技术对氨基酸生产菌株进行分子克隆研究,以达到选育高产菌株的目的‘”。近几年国内也开展了这方面的研究〔2’3’,但由于缺乏合适的棒杆菌载体受体系统,所做工作多以大肠杆菌为受体。 我们通过对谷氨酸棒杆菌1014消除质粒后,再转化该菌获得了只含单一质粒pXzlo145的菌株1014一6T。从中提取质粒,然后以消除质粒的1014一6菌株为受体,进行质粒转化最佳条件的研究。同时成功地对钝齿棒杆菌(C.erenQtum)Bg进行转化,在棒杆菌中建立了转化系统。为进一步研究该类菌基因工程打下了基础。材料和方法 (一)曹株和质拉 1.谷氨酸棒杆菌1024(eor夕nebae- teriu琳91“ra沉ieu机1014)由上海工业微生物研究...  (本文共7页) 阅读全文>>

《生物工程进展》1989年04期
生物工程进展

氨基酸发酵工业的发展近况

一、概述 氨基酸广泛应用于食品、医药、饲料等部门·自‘””7年日本首创用微焦j物发酵法工业生产L一各氨酸以来,各种氨基酸发酵的研究开发蓬勃发展起来,现在大部分燕基举均可用微生物方法生产了,氨基酸丁业巳成为新兴的工业部门,据估计1985年世界市场的销售额已超过25亿美元,表1汇总了氨基酸的产量和生产方法。 进木80年代,基因工程、细胞融合、微生物或酶的固定化、生化工程与生物反应器等新技术的并发应用又进一步推动着氨基酸发酵工业的发展. 近年来,氨基酸发酵的研究开发趋势是,主流转向有关DNA重组技术的研究,而且与细胞融合技术及常规突变技术相结合的研究盛行起来.也就是说,融合各种先进技术的研究发展迅速.同时,就酶法而言,人们既注重寻找作用于合成底物的新酶,又更有效地利用巳知的酶.即研究克服已知酶的缺点(如研究耐热性酶、对底物有抗性的酶等)以及借助已知酶对底物结构类似物的作用来生产含氟氨基酸等非天然氨基酸的方法.今后在廉,价合成底物,用熏...  (本文共10页) 阅读全文>>

江南大学
江南大学

钝齿棒杆菌精氨酸生物合成基因簇的研究

L-精氨酸是人体代谢的一种重要氨基酸。随着人们对它研究的深入,发现精氨酸在食品和医药等方面有广泛的应用前景。本文以我国氨基酸生产常用的菌株钝齿棒杆菌A.S.1.542和本实验室保存的经亚硝基胍诱变的钝齿棒杆菌A.S.M2(精氨酸的产量能达2mg/mL)为研究对象,首次报导了钝齿棒杆菌A.S.1.542生物合成精氨酸的相关基因的信息,并与钝齿棒杆菌A.S.M2的相应基因进行了比较;同时,通过基因敲除技术分析了精氨酸生物合成中的一个调控基因argR的功能,并构建表达载体pC2-P-argR-T以考察argR基因对钝齿棒杆菌A.S.M2产精氨酸的影响。本文同时采用亲和层析的方法对钝齿棒杆菌A.S.M2产精氨酸关键酶进行了研究。主要研究结果如下:1通过Southern Blotting实验,以谷氨酸棒杆菌ATCC 13032的argB基因为探针,确定钝齿棒杆菌A.S.1.542与谷氨酸棒杆菌ATCC 13032有较高的同源性。据此,本实...  (本文共98页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国医科大学
中国医科大学

cglI基因复合体在钝齿棒杆菌中的功能和行为研究

cglI基因复合体在钝齿棒杆菌中的功能和行为研究目的棒杆菌是工业生产氨基酸的重要菌种。由于发酵生产的规模化和连续性,生产中极易遭受噬菌体污染,严重影响企业生产过程,并给生产企业带来严重经济损失。生产中通常采用改进生产工艺,改善卫生条件,控制生产环节等措施预防噬菌体污染,虽然污染程度有所减轻,但仍时常发生。国内外一直采用菌株诱变的方法筛选抗噬菌体菌株,试图解决生产中的噬菌体污染问题。由于诱变获得的突变株存在生长缓慢,或其它生理性状改变,或生产能力下降,或只针对个别噬菌体有抗性,并易于产生回复突变等问题。所以,很难得到能用于生产的突变株。因此,噬菌体污染问题一直威胁着氨基酸的发酵生产。本文利用基因工程技术,在研究cglI基因复合体在大肠杆菌中克隆的有效方法基础上,通过将含有源自谷氨酸棒杆菌的限制修饰系统cglI基因复合体导入钝齿棒杆菌构建重组菌株,以探索cglI基因复合体用于构建抗噬菌体基因工程菌的可行性,以期从根本上解决氨基酸生产...  (本文共84页) 本文目录 | 阅读全文>>

南昌大学
南昌大学

钝齿棒杆菌精氨酸生物合成关键酶分析

L-精氨酸是人体代谢的一种重要氨基酸。在食品和医药等方面有着广泛的应用前景。本文比较了的钝齿棒杆菌A.S.M2诱变菌和2株工程菌钝齿棒杆菌A.S.M2.sp、钝齿棒杆菌A.S.M2△argR发酵过程中L-精氨酸产量及其与各生长因素之间的关系,分析argR基因在钝齿棒杆菌精氨酸生物合成途径中的作用。采用偶联有L-精氨酸的Sepharose-4B亲和层析柱分离生物合成途径中受L-精氨酸反馈抑制的关键酶;并通过SDS-PAGE分离纯化各关键酶;将各纯化蛋白组分进行MALDI-TOF-MS分析,分析结果与蛋白组数据库进行比对。主要研究结果如下:(1)测定了钝齿棒杆菌A.S.M2,钝齿棒杆菌A.S.M2.sp,钝齿棒杆菌A.S.M2△argR三株菌的L-精氨酸生产曲线、菌体生长曲线、碳源消耗曲线、发酵液pH值变化曲线,结果显示钝齿棒杆菌A.S.M2.sp的L-精氨酸产量最高时达到85mg/mL,推测argR基因在钝齿棒杆菌L-精氨酸生物合...  (本文共62页) 本文目录 | 阅读全文>>