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ELISA联合RT-nPCR检测慢性丙型肝炎病毒感染者结果分析

HCV感染是一个全球性的重要公共卫生问题,据估计全球约有1.75亿丙型肝炎病毒感染者,高度慢性化是该病的最大特征[1],据报道慢性丙型肝炎患者10年内约有20%发展为肝硬化,肝硬化病人每年约3%发展为肝细胞癌[2,3],严重威胁着人们的健康。并且其感染的主要途径是经血和血制品传播,且感染后病毒血症的长期存在和肝内HCV的活跃复制,是导致丙型肝炎慢性、肝硬化、原发性肝癌的重要原因。目前医院和血站主要通过ELISA/EIA方法检测血清中抗-HCV来诊断可疑感染者和筛选健康献血员,但ELISA法检测抗-HCV的灵敏度在70%左右[4],即抗-HCV检测仍存在一定的漏检[5],正是由于这部分人的存在仍会导致因输血或单采血浆还输血球时的交叉感染而发生HCV感染的暴发流行。为此本研究采用ELISA法和RT-nPCR法同时检测慢性丙型肝炎感染者的血清抗体和HCV RNA的表达,并对比分析其结果,找出解决HCV感染者漏诊的办法,为临床检测和血站...  (本文共3页) 阅读全文>>

《畜牧兽医科技信息》2017年09期
畜牧兽医科技信息

猪戊型肝炎病毒RT-nPCR检测方法的建立及应用

猪戊型肝炎病毒(以下简称为SHEV)一般是正链的RNA病毒,能够使猪感染猪戊型肝炎。现如今,此类病毒在我们国家十分普遍,如果没能将其进行控制,则会造成更大的风险。1资料与方法1.1材料1.1.1设计基因组的序列,再根据其设计两对引物。1.1.2猪的HEV分离株,本实验室将对其进行分离鉴定。1.1.3待检病料从不同地方的化猪场选取50份胆汁和50个肠容物,并将它们的编号设定为D1~D50和C1~C50。1.1.4主要试剂提取试剂RNA的TRNzol和PCR的试剂以及反转录酶和反转录试剂。1.2 SHEV的RNA提取从SHEV的细胞中提取培养物约为200μL,再加上800μL的TRNzol,然后进行约为15s的振荡操作之后,在保持室温的情况下,将其放置3min。之后在加上160μL的氯仿,再次进行15s的振荡操作,同样在保持室温的情况下,将其放置3min。之后再进行4℃12000r/min离心10min左右,再将上部的水全部转移至全...  (本文共1页) 阅读全文>>

《中国比较医学杂志》2014年06期
中国比较医学杂志

树鼩呼肠孤病毒RT-nPCR检测方法的建立及初步应用

哺乳动物呼肠孤病毒(mammalian orthoreovirus,MRV)在分类学上属呼肠孤病毒科(Reoviridae)正呼肠孤病毒属(Orthoreovirus)第一亚群[1]。基因组为10个节段的双链RNA,分为3个大片段(L1~L3)、3个中片段(M1~M3)及4个小片段(S1~S4)。根据红细胞凝集活性MRV分为三种血清型及标准株,分别为:血清1型(T1L,Long)、血清2型(T2J,Jone)和血清3型(T3D,Dearing;T3A,Abney)[2]。MRV具有广泛的宿主谱,牛、羊、马、猪、狗、猫、小鼠、蝙蝠、人及非人灵长类体内都已报道分离到呼肠孤病毒[3-5]。呼肠孤病毒与肺部感染、神经系统感染、消化系统感染密切相关[6]。Reo-3感染可致小鼠呼吸窘迫综合症,肺水肿、肺泡出血、肺纤维化和致死性间质性肺炎等症状,最后显现病毒血症及神经系统感染所致脑炎心肌炎等[7],Reo-3型是国标要求SPF级实验小鼠必检...  (本文共6页) 阅读全文>>

《东南大学学报(医学版)》2004年03期
东南大学学报(医学版)

通用性引物RT-nPCR扩增不同基因型戊型肝炎病毒基因组的探讨

戊型肝炎病毒(HEV)引起的戊型肝炎有流行和散发两种形式,全球分布,病死率较高,在孕妇中可高达2 0 %。HEV基因组RNA有较大的变异性,根据其全基因序列的差异,可将HEV分成4个基因型[1,2 ] 。以往的观点认为HEV基因型的分布有地域性,基因型1型主要分布在亚洲和非洲,2型在墨西哥,3型在美国,4型在中国[1,2 ] 。但近年的研究结果表明,在同一国家或地区可以有不同基因型HEV存在,如中国有1和4型[3 ] ,日本有1、3和4型[4] 等。在用PCR检测HEV时,获得一组特异性好、敏感性高的PCR引物,尤其是能够同时扩增出不同基因型HEV的通用性引物,对HEV感染的临床检验十分重要。为此作者比较了GenBank中不同基因型HEV的序列,在多个保守区设计了4组HEV巢式PCR引物,以此检测已知基因型的HEV标准株和未知基因型的临床标本,筛选出理想的HEV通用性引物。1 材料和方法1.1 引物设计从GenBank提取HEV...  (本文共4页) 阅读全文>>

《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2016年01期
西北农林科技大学学报(自然科学版)

PRRSV经典株和变异株RT-nPCR鉴别诊断方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductiveand respiratory syndrome,PRRS)又称蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductiveand respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种猪群重大疫病[1-2]。1987年,本病首次在美国北卡罗来纳州爆发,随后迅速扩散到世界各地[3]。1996年,我国郭宝清首次从北京地区发病的猪群中分离出PRRSV,从而证实了本病在我国的存在[4]。2006年,首先在我国南方爆发的“猪无名高热”疫情中,农业部最终调查结果表明,猪繁殖与呼吸障碍综合征变异株是该疫病的元凶[5]。2008年,我国农业部规定高致病性猪蓝耳病为一类动物疫病,经典蓝耳病为二类动物疫病,本病成为严重威胁养猪业的重大疫病之一。PRRSV属于尼多病毒目、动脉炎病毒科、动脉炎病毒属的成员,根据病毒的抗原性质、基因组及致病性的差异,PRR...  (本文共6页) 阅读全文>>

《中国兽医学报》2011年01期
中国兽医学报

新型反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别猪瘟强毒和弱毒疫苗方法的建立

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种急性、高度接触性传染病,死亡率高达90%以上[1],该病以出血和稽留高热为主要特征。目前该病主要流行于亚洲、欧洲、南美洲,在家猪和野猪中传播广泛,发达国家采取捕杀政策消灭CSF,给养猪业造成重大经济损失[2-3]。CSFV与其同属的牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)和羊边界病病毒(Border disease virus,BDV)存在一定的抗原交叉性,而且后2种病毒也可自然感染猪,因此血清学诊断上不易将CSFV与其他2种瘟病毒相鉴别[4-5],尤其是近年来猪瘟流行方式和发病特点发生了很大变化,转变为隐性感染和亚病毒感染[6],在临床表现上也趋于复杂化,出现了所谓“非典型猪瘟”、“温和型猪瘟”和“带毒母猪综合征”,在病理剖检上也不同于...  (本文共5页) 阅读全文>>