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重组人骨形成蛋白-2对细胞成骨分化的作用

目的进一步探讨rhBMP-2的促细胞成骨分化作用,以期找到合适的成骨分化标志作为rhBMP-2的定量活性测定指标。方法 首先表达制备rhBMP-2,用小鼠股部肌袋包埋法进行诱骨活性实验,然后检测rhBMP-2作用后的骨髓基质细胞(MSC)、NIH3T3和C2C12等3种细胞的碱性磷  (本文共4页) 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

重组pIRES2-EGFP-hBMP_2载体的构建及其对人牙龈成纤维细胞表型的影响

牙周治疗的最终目标是实现牙周组织完全功能性再生,其中包括牙龈、牙周膜、牙骨质和牙槽骨协调一致地、生理性再生。传统的牙周治疗和引导性组织再生技术虽取得一定的临床效果,但总的看来,尚不能达到牙周组织完全再生的目的。组织工程技术引入牙周病治疗的研究领域,为这一目标的实现带来了新的希望。组织工程学研究的主要内容包括种子细胞的来源、生物载体支架的选择以及细胞/载体支架复合体的构建等三个方面。种子细胞的研究是牙周组织工程的重要内容。牙周膜(PDL)细胞是一组具有多向分化潜能的异质性细胞,其中的未分化间充质细胞可分化为成纤维细胞、成骨细胞和成牙骨质细胞,是牙周组织再生的主要细胞。作为种子细胞,PDL细胞具有一定的局限性,它来源有限,须拔除一定量自体牙后才能获得,难以在临床上广泛开展。牙龈成纤维细胞作为牙周组织的组成成分,来源丰富、容易获得、具有很强的生长和自我繁殖能力,在适当的刺激下,可表达成骨细胞表型。人骨形成蛋白2(hBMP2)是BMP家...  (本文共74页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
浙江大学

羟基磷灰石/丝素复合支架负载BMP-2的制备及其生物相容性研究

骨形态发生蛋白2(BMP-2)隶属于转录生长因子p (TGF-p)超家族,具有促进成骨细胞分化、诱导骨组织再生的能力,目前已广泛应用于骨组织工程研究之中。羟基磷灰石(HA)是天然骨组织的主要无机成分,具有骨诱导性,能够诱导新生骨的血管化,促进新骨的形成,且植入体内后不会引起炎症反应,常用作骨修复材料。丝素蛋白(SF)因其良好的生物相容性、降解性及独特的力学性能等,广泛用于生物医学领域。因此,本研究采用原核表达系统进行重组人的骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)的表达,获得了有生物活性的BMP2成熟肽。在此基础上将rhBMP-2与HA及SF复合,制备了负载有rhBMP-2的HA/SF复合支架,并通过体内外实验,研究该材料的生物相容性及对骨缺损修复的影响。本研究主要包括三部分内容:1、重组人的骨形态发生蛋白2的体外表达、纯化及复性通过逆转录PCR方法从人骨肉瘤MG-63细胞中获得rhBMP-2基因,克隆至原核表达载体pET-30a (...  (本文共117页) 本文目录 | 阅读全文>>

福建中医学院
福建中医学院

补骨合剂对大鼠骨髓基质细胞增殖、分化及凋亡的分子调控机理研究

目的:应用体外培养骨髓基质细胞,在细胞和分子水平观察补骨合剂对细胞增殖、分化和凋亡的影响,探讨补骨合剂治疗骨质疏松症的机理。方法:分离SD大鼠骨髓基质细胞,培养后应用MTT法测定补骨合剂对细胞增殖的影响;通过形态学、细胞超微结构观察、碱性磷酸酶、细胞内骨钙素、β转化生长因子1基因表达等指标,对骨髓基质细胞向成骨细胞转化的程度进行探讨;通过形态学、细胞超微结构、流式细胞术检测凋亡细胞周期和线粒体膜电位改变、bcl-2、bax蛋白基因表达等进行观察,对补骨合剂在细胞凋亡过程中的作用进行评价。结果:一定浓度的补骨合剂对体外培养骨髓基质细胞增殖有显著促进作用;可促进转化中的骨髓基质细胞分泌碱性磷酸酶和骨钙素,增强骨形态发生蛋白的活性,促进转化中的骨髓基质细胞表达β转化生长因子1,补骨合剂的这种促进骨髓基质细胞转化作用与密钙息基本相同。补骨合剂的早期应用可以使阻滞于G0/G1期的细胞减少,进入S期进行DNA合成的细胞增多,诱导凋亡的细胞在...  (本文共107页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

pELNS-BMPs与pELNS-wnt3a联合构建表达对成骨细胞系成骨效能的作用研究

目的:骨再生是治疗骨骼系统相关疾病如骨缺损、骨折不连接和治疗骨质疏松的关键环节。组织工程骨有望解决植骨后新骨形成缓慢的问题,其中如何促进种子细胞的增殖和成骨分化成为组织工程技术的关键环节和研究热点。在促进骨形成的众多调节因子中,骨形成蛋白(BMPs)家族在胚胎发育及骨骼形成中扮演着重要的角色,目前较多研究显BMP2,BMP4,BMP6,BMP7,BMP9具有骨诱导活性的;另外,Wnt3a在成骨细胞分化和增殖过程起着重要作用。上述调节因子的联合作用很可能加强诱导成骨分化,但是有关的研究少见报道。利用基因治疗技术可以将成骨诱导因子导入种子细胞,通过持续高水平表达成骨诱导因子促进种子细胞的成骨分化。选择理想的载体,使目的基因靶向、可控并有效地表达,是基因治疗成功的关键。非病毒载体系统的基因转移方法效率较低,其应用受到了很大限制;目前常用的病毒性载体主要有逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒等,存在着只能瞬时表达、基因丢失、细胞恶化风险等不足...  (本文共98页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国组织工程研究与临床康复》2007年46期
中国组织工程研究与临床康复

不同浓度重组人骨形成蛋白2和碱性成纤维生长因子对犬骨髓基质细胞的生物学作用

目的:骨形成过程由骨形成蛋白诱导开始,并受到多种生长因子的综合调控。为建立良好的细胞培养体系和配制含有多种生长因子的活性材料,观察不同浓度的重组人骨形成蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子对犬骨髓基质细胞增殖、成骨分化的影响。方法:实验于2007-05/07在上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔生物工程实验室完成。①实验材料:1岁beagle犬3只。重组骨形成蛋白2,碱性成纤维细胞生长因子(Peprotech)。②实验方法:犬肌注麻醉后,穿刺抽取2mL骨髓,离心制备骨髓基质细胞,进行原代培养。待细胞80%汇合时,胰酶+乙二胺四乙酸消化传代。③实验评估:取传至第3代的细胞,接种后分别加入重组骨形成蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子,各自分为0,25,50,100,200μg/L组。于第1,2,3,4,5,6天倒置显微镜下动态观察细胞形态;MTT比...  (本文共5页) 阅读全文>>