分享到:

通过载体DHFR基因的弱化提高抗体在CHO细胞中的表达

在基因工程抗体的真核表达系统中,cH0细胞是目前最常选用的丁程细胞。使用二氢叶酸还原酶(dihydrofolate-一ductase,DHFR)缺陷的cH0细胞株(cH0/【)HFR‘),通过I)HF’R/氨甲喋呤(methotraxate·,MTx)扩增体系,[1f明显提高工程抗体的表达量,因此对这一体系的优化具有重要意义。。…。我们通过基因工程抗体技术,构建了抗人膀胱癌人一鼠嵌合抗体真核表达载体pDHI.-BDI,并在DH}、R缺陷型cHO细胞中表达丫嵌合抗体(ch—BDI)。通过对该抗体功能的初步鉴定,发现此嵌合抗体具有较好的特异性和亲和力“。但是在进一步的氨甲喋呤加压扩增过程中,抗体表达量的提高不理想。因此,我们对pI)HI.一BDI载体进行了,一系列的改造,对DHFR基因的表达进行了不同程度的弱化,观察其对DHFR/MTx扩增体系的作用。结果证明,这一方案可以有效地增强表达细胞对MTx的敏感性,提高抗体表达的水平。1材...  (本文共4页) 阅读全文>>

中国人民解放军军事医学科学院
中国人民解放军军事医学科学院

全抗体在CHO细胞的高效表达

治疗用基因工程抗体有巨大的社会和经济效益。然而其用量大,这使基因工程抗体的高效表达成为其临床应用的最重要的先决条件之一。目前上市的和处于临床研究的基因工程抗体绝大部分是在CHO细胞中表达的。表达载体系统是获得高表达抗体细胞株的关键。因此,研究表达载体的构建及各个元件对高效表达的影响有理论和现实意义。首先用载体pSwD3-hc和pDNHG-hc在CHO细胞中进行了抗人肝细胞肝癌全抗体的表达研究,发现该抗体表达水平较低。随后以载体pDNHG-hc和pIRESdhfr为基础,通过对二氢叶酸还原酶基因dhfr的不同弱化方式,构建了双顺反子表达载体pIRESdhfr-hc和pDl1-4。根据各载体在相同条件下转染CHOdhfr-的克隆形成率的比较,得出各载体中dhfr基因的弱化程度由强到弱的顺序为pDI4,pDI3,pDI2,pIRESdhfr-hc,pDIl。我们认为载体pDI2和pIRESdhfr-c中dhfr基因的弱化程度适合于外源...  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>

《食品与生物技术学报》2017年05期
食品与生物技术学报

人血清白蛋白-白介素-2融合蛋白在CHO细胞中的表达

白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)又称T细胞生长因子,是Morgan[1]等人用丝裂原、刀豆蛋白刺激T淋巴细胞时产生的一种因子。IL-2在机体免疫应答中具有重要的作用,在临床上用于肿瘤、肝炎、免疫缺陷性疾病的治疗。但IL-2相对分子质量小,体内半衰期仅为6.9 min[2],多次高剂量注射可能造成不良副作用[3],给患者带来很大的困扰,限制了其在临床上的应用[4]。人们通过白蛋白融合技术增加药物相对分子质量的方法来延长药物半衰期[5]。关波等人通过HSA融合技术在毕赤酵母中成功表达了具有生物活性的融合蛋白IL-2-HSA,该融合蛋白在体内半衰期的延长至13.24 h。但在毕赤酵母中表达融合蛋白时,产物存在不均一、过度糖基化和降解等问题,在生产应用中受到很大限制[6]。目前中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO细胞)已经成为表达重组蛋白药物最为理想的宿主之一[7],CHO...  (本文共5页) 阅读全文>>

《化工管理》2017年27期
化工管理

Plackett-Burman和响应面法优化CHO细胞无血清培养基中关键营养成分

中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary,CHO)是目前生产重组蛋白的主要宿主细胞,广泛应用于药物生产领域。CHO细胞表达系统能很好的指导蛋白质的正确折叠,提供复杂的糖基化等修饰和加工;其表达蛋白的理化性质、分子结构及生物学活性等接近天然的生物蛋白分子[1]。CHO细胞无血清培养基是在DMEM/F12基础上添加生长因子、氨基酸、维生素和微量元素等组成[2],能减少生产难度也能稳定产品质量。本研究目的是开发CHO细胞无血清培养基用于表达VEG-FR-FC融合蛋白,其作用为抑制肿瘤部位的血管新生而达到治疗目的。本实验以细胞生长状态和表达量为评价指标,通过Plackett-Burman法筛选关键成分再使用响应面法优化其中含量[3-4]。1材料和方法1.1实验材料1.1.1细胞CHO细胞,表达VEGFR-FC。1.1.2试剂DMEM/F12基础培养基购自Gbico公司;营养物质购自Sig-ma-Aldrich公司。1...  (本文共2页) 阅读全文>>

《湖北医药学院学报》2017年04期
湖北医药学院学报

接种重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)出现疑似异常反应1例报道

重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞),英文名称(Re-combinant Hepatitis B.Vaccine),是通过重组CHO细胞表达的乙型肝炎病毒表面抗原(HBs Ag),经纯化加佐剂吸附后制成,疫苗有轻微乳白色沉淀,用于预防乙型肝炎。本疫苗接种后,可刺激机体产生抗乙型肝炎病毒的免疫力,预防乙型肝炎,用于新生儿、儿童、成人预防接种和母婴阻断。我国研制的重组乙肝疫苗(CHO细胞)安全、有效,但由于某些未知原因,接种后,也会出现疑似异常反应情况发生,应当予以关注。本文介绍1例接种后疑似不良反应的案例。1病例受种者,男,2013年10月12日出生,顺产。受种者接种前未发现药物过敏史,既往接种国家免疫规划疫苗(乙肝疫苗第一剂次,华北生物;脊灰疫苗第一、二、三剂次;百白破疫苗第一剂次,2014年11月13日)及替代疫苗(乙肝疫苗第二剂次,葛兰素史克;b型流感嗜血杆菌疫苗,北京绿竹)均无疫苗接种异常反应史,家庭成员未发现遗传病史。此次接种...  (本文共2页) 阅读全文>>

《环境卫生学杂志》2015年05期
环境卫生学杂志

纳米氧化铜作用于CHO细胞的细胞毒性实时动态研究

纳米铜是代表性的金属纳米材料之一,已作为商业化产品进入市场多年。在生物医学领域中有望代替铜化合物或微米铜材料而得到广泛应用。然而,已有研究表明纳米粒子具有的小尺寸、大比表面积及高表面活性等特征使其具有潜在危害性[1]。先期研究证明,纳米铜在体内、体外试验中均显示出不同程度的毒性作用[2-3],体外研究表明能显著降低多种细胞活性[4]。随着对纳米氧化铜研究的逐渐深入,细致准确地测定其细胞毒性及精确的IC50值对于深入研究其毒性作用及相关机制十分重要。本研究选用常见的中国仓鼠卵巢细胞株(chinese hamster ovary CHO)作为研究对象,该细胞由于其强大的生命力、本身很少分泌内源蛋白及表达复杂生物大分子的理想宿主等特点在生物工程、药学及毒理学等体外研究中被广泛使用。实时监测不同剂量纳米氧化铜作用于CHO细胞后,观察在连续时间点所产生的毒性效应变化,对于纳米氧化铜体外毒性效应及机制研究具有普遍意义。在体外实验中,基本都以...  (本文共6页) 阅读全文>>

《中国生物制品学杂志》2007年11期
中国生物制品学杂志

不含硫柳汞重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的免疫原性及稳定性

自20世纪30年代以来,硫柳汞一直被用作生物制品的防腐剂[1]。尽管目前尚无理由证明含硫柳汞防腐剂的疫苗不安全,但是世界各国专家均认同“去除硫柳汞,疫苗更安全”。有报道称,硫柳汞在高剂量时可以导致神经毒性和肾毒性[2]。近年来,包括美国儿科学会在内的多个学术组织呼吁在疫苗中应尽量减少或不加硫柳汞。1999年6月8日美国儿科协会和美国公共卫生署联合发表声明,决定在婴儿疫苗中减少硫柳汞的使用[3]。因而,在新研制的儿童疫苗中去除硫柳汞已显得非常重要[4]。本文在现有重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的基础上,制备出不含硫柳汞的乙肝疫苗,并观察其免疫原性和稳定性,现将结果报道如下。材料与方法1.实验材料重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)原液由本室制备;4~5周龄雌性BALB/c小鼠、清洁级小鼠和豚鼠由本所实验动物室提供;乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒(放射免疫法)购自北京北方生物技术研究所。2.不含硫柳汞重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的制备取...  (本文共3页) 阅读全文>>