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人胰岛素原基因在转基因小鼠乳汁中的表达

人胰岛素 (insulin)是由 A和 B两条多肽链组成的蛋白质激素 ,A链由 2 1个氨基酸残基组成 ,B链由 3 0个氨基酸残基组成 ,共有 3个二硫键 ,在体内其 A链的 N端和 B链的 C端通过 C肽 (由 3 1个氨基酸残基组成 )连接成胰岛素原 (proinsulin)。糖尿病是一种高发的老年性疾病 ,胰岛素是治疗糖尿病的特效药 ,因此有很大的需求市场。目前 ,市场上销售的胰岛素主要是动物脏器的提取品 ,基因工程产品的产量和质量还不能令人满意 ,因而可通过动物乳腺生物反应器来生产稀有的、用其他方法不易得到的、有生物活性的多种药用蛋白质。到目前为止 ,已在动物乳腺中表达的人类蛋白质主要有α-1 -抗胰蛋白酶[1] 、血红蛋白 [2 ] 、纤维蛋白原 [3] 、α-乳清蛋白 [4] 、红细胞生成素[5] 、γ-干扰素 [6]、乳铁蛋白 [7]、转糖酶 [8]、组织纤溶酶原激活物 [9]、血清白蛋白 [10 ]、超氧化物歧...  (本文共4页) 阅读全文>>

《南通大学学报(医学版)》2005年01期
南通大学学报(医学版)

人胰岛素原C肽基因高效表达载体的构建

糖尿病是一种常见的代谢内分泌疾病。随着患病人数的迅速增加 ,糖尿病已成为严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题 ,影响糖尿病患者生命和生活质量的主要危险因素是糖尿病慢性并发症。胰岛细胞分泌多种激素 ,除胰岛素以外其他激素对于预防糖尿病急、慢性并发症的发生也起着至关重要的作用。近年来研究表明 ,C肽是防止糖尿病并发症的一种关键物质 ,可有效改善和延缓 1型糖尿病的慢性并发症[1] 。1 材料与方法1 .1 材料 1 .1 .1 质粒和细菌 克隆载体 PUC1 8购于大连宝生物工程有限公司 ,表达载体 p MAL- c2 E购于美国纽因伦公司 ;宿主菌 TOP1 0和感受态细胞 BL2 1( DE3)分别购于北京天为时代生物技术公司和美国纽因伦公司 ,大肠杆菌 BL2 1 ( DE3)基因型为 F-,omp T,hsd SB( Rb-,m B-) ,dcm,gal,λ( DE3) ,plys S,Cmr。1 .1 .2 主要试剂 限制...  (本文共3页) 阅读全文>>

《生物化学与生物物理学报》2003年10期
生物化学与生物物理学报

人胰岛素原C肽固相合成的改进

Idoy等[1] 报道人胰岛素原C肽有改善I型糖尿病鼠血管神经病变的功能 ,Johansson等[2 ,3 ] 给予C肽联合胰岛素治疗可使糖尿病人减少尿白蛋白排泄率 ,改善肾功能和自主神经功能障碍。体内外数据显示 ,C肽可能在胰岛素分泌物的调节中起作用。高鑫等[4,5] 研究结果显示 ,人胰岛素原C肽可防止糖尿病鼠所致肾小球细胞外基质积聚导致系膜扩张 ,改善糖尿病肾病变之形态与功能作用 ,这为探索糖尿病慢性并发症的治疗提供了新的途径。糖尿病病人由于并发血管神经病变致残致死 ,目前尚无有效药物。国内外研究显示 ,人胰岛素原C肽具有治疗糖尿病血管神经病变的潜在价值。我们曾报道了用固相法以BOC谷氨酰胺α羧基偶联PAM树脂合成人胰岛素原C肽[6] 。本实验利用谷氨酸γ羧基与MBHA树脂 (4 甲基二苯甲基胺 )偶联作固相逐步合成法制备了人胰岛素原C肽 ;同时也用固相法合成了人胰岛素原C肽类似物即C端延伸一个赖氨酸的人胰岛素原C肽K ...  (本文共4页) 阅读全文>>

《北华大学学报(自然科学版)》2002年05期
北华大学学报(自然科学版)

胰岛素原转化酶基因克隆及序列测定

1 材料和方法1 .1 材  料人胰腺组织 :尸解 ;RNA抽提试剂 :Trizol(GIBICO) ;引物合成 :上海内分泌研究所合成 ;逆转录Kit,克隆载体PGEMT AEASY ,测序Kit:Promega;Gold Taqase :PE公司 ;EcoR Ⅰ内切酶 :华美生物公司 .1 .2 方  法1 )RNA抽提 :胰腺组织取出后 ,迅速用液氮冷冻并制成匀浆 ,然后根据操作说明 ,用Trizol提取总RNA ,溶于 2 0 μLDEPC处理的H2 O中 ,通过1 %甲醛琼脂糖凝胶电泳检测RNA .2 )cDNA第一链合成及PC2基因的扩增 :取总RNA 5 μL ;Oligo(dT) 1 5 :0 .5 μg ;Rnasin :2 0u ;dNTP :1mmol/L ;AMV :1 5u ,总体积 2 0 μL ,混匀后 ,2 5℃ ,1 0min ;42℃ ,1h ;99℃ ,5min .PC2基因的扩增 :根据P...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国实用内科杂志》1981年20期
中国实用内科杂志

胰岛素原的临床应用

胰岛素原(PI)于1982年由美国Lily公司研究所首次应用DNA重组技术在生物合成人胰岛素中,同时合成的人胰岛素原(HPI)经动物试验与临床观察证明有降血糖作用,从而引起关注,在国际研究领域中对PI进行了多项观察。1胰岛素原降糖作用与临床应用PI是由86个氨基酸组成的多肽,在胰岛β细胞核内合成为成熟的mDNA,转运到细胞质成为前胰岛素原,储存于高尔基体继续加工形成86肽胰岛素原,再储存在胰岛β细胞的分泌颗粒中,在转化酶的作用下形成51肽胰岛素和31肽C肽,但仍有2%~6%胰岛素原及其中间产物。由于PI生物半衰期较胰岛素长,外周血中PI及其中间产物可达到总的免疫反应性胰岛素的15%左右,在Ⅱ型糖尿病和胰岛素瘤病理情况下这一比例还会提高,甚至达到50%~60%。1983年以来对PI的降糖作用陆续进行了基础与临床研究,发现其有效血浓度介于普通胰岛素与中效胰岛素之间,但其降低血糖效果按同一浓度比普通胰岛素明确降低。更多的基础研究证明,...  (本文共2页) 阅读全文>>

《国外医学.内分泌学分册》1950年20期
国外医学.内分泌学分册

胰岛素原的基础和临床研究

胰岛素原的基础和临床研究上海市内分泌研究所(200025)骆天红综述陈家伦审校摘要:本文综述了人胰岛素原的基本特性、测定方法及其与NIDDM、IDDM、胰岛素瘤、家族性高胰岛素原血症以及心血管疾病的关系。关键词:胰岛素原(hPI);免疫反应性胰岛素(IRI)Steiner等人于1967年发现了胰岛素原(Proinsulin,PI)其分子量约为9000,含有86个氨基酸,是一单链多肽,包含胰岛素的A链、B链以及含有35个氨基酸的连接肽。人、猪、牛的胰岛素原氨基酸顺序基本相同,只是C肽部分有所不同个由于不同种系的胰岛素相差很小,因而常规的抗胰岛素抗体能和不同种系的胰岛素及胰岛素原起交叉反应,同样,抗胰岛素原抗体也能和不同种系的胰岛素及胰岛素原起交叉反应。进入80年代以后,随着单克隆抗体技术的发展,已制备出胰岛素原的特异性抗体,它能特异地识别胰岛素原而不和胰岛素或C肽起反应。1胰岛素的基因结构及其表达与转录后加工人类胰岛素基因位于11...  (本文共4页) 阅读全文>>