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一种聚阳离子转基因载体及其合成方法

公开号:CN101338318公开日:2009.01.07申请(专利权)人:林李家宓;汤谷平;姚宏一种新型的纳米聚阳离子转基因载体,是环糊精-聚乙烯亚胺-叶酸三元组装式结构的纳米聚阳离子载体,以环...  (本文共1页) 阅读全文>>

山西医科大学
山西医科大学

MPP穿膜结构域的结构模拟、特征分析及MPP介导的转基因载体体系的构建和转导研究

经典细胞学理论认为:生物大分子(蛋白质,核酸)不能直接通过自由扩散的方式进入细胞,被细胞摄取。然而,近7年来,已经有实验证明:在一些穿膜多肽介导下的蛋白质和核酸以一种非受体依赖方式、非经典内吞方式直接穿过细胞膜进入细胞。1988年,Frankel等发现免疫缺陷病毒(HIV)中有一种转录调节蛋白TAT,它能进入细胞核,激活HIV-1的启动子,从而促进HIV的扩增。最初,研究人员的焦点集中在TAT对HIV的启动作用。但是,随后的研究发现,TAT蛋白本身具有一种极其特殊的生物学活性,它可以直接穿过细胞膜、细胞核膜并瞄着于特定基因调控区内。而且介导穿膜的氨基酸序列和调节转录的序列相同。接着Daniele发现Antennspedia基因编码的一类同源蛋白质也能以类似方式穿过细胞膜。2000年,郭勇等发现果蝇的周期调节蛋白Period 1也具有类似的生物学功能,并把这类肽命名为细胞膜穿透肽(membrane penetrating pept...  (本文共165页) 本文目录 | 阅读全文>>

《温州医学院学报》2012年05期
温州医学院学报

一种斑马鱼肝脏特异表达转基因载体的制备方法

转基因载体的构建是开展基因功能和转基因动物模型构建研究的基础。传统转基因载体的构建方法主要是通过分子克隆手段将组织特异性启动子、目的基因连入到真核表达载体中来实现的,为了便于观察目的基因的表达,往往还会在目的基因的末端融合表达报告基因。该方法尽管能实现目的基因在动物组织中的特异表达,但存在以下几个缺点:首先,转基因效率较低,不利于得到稳定的转基因品系;其次,在特异启动子下表达的两个融合蛋白,目的蛋白的生物活性可能受到影响;最后,还常需考虑融合蛋白中后一种蛋白的移码突变。为了克服传统方法中的不足,本研究拟以斑马鱼肝脏作为靶器官,根据脂肪酸结合蛋白只在斑马鱼肝脏组织中表达的特性,并结合Tol2转座子能够实现目的基因在基因组中高效整合的特点,通过multi-site gate-way技术建立一套快速制备斑马鱼肝脏特异性表达转基因载体的方法并在斑马鱼中验证其表达。1材料和方法1.1斑马鱼的养殖斑马鱼(Danio rerio)为野生型AB...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国现代医学杂志》2006年02期
中国现代医学杂志

与排异反应相关基因克隆及其反义转基因载体构建

诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)与心脑血管缺血后的损伤密切相关[1 ̄4],与移植后的肾脏、肝脏缺血性损害等密切相关[5,6]。近年的研究表明,iNOS高表达与移植后的脏器排异反应密切相关[7,8]。目前的研究表明此基因高表达与肿瘤的血管形成及转移等也密切相关[9,10]。在本室前期实验过程中,发现转染FGFR基因可抑制移植的动脉血管硬化[11]。大量实验表明,iNOS在移植的动脉血管中呈高表达,可诱导移植排斥反应。转染iNOS反义基因,抑制移植的动脉血管中iNOS的表达,从理论上应该可以抑制移植的动脉血管硬化。为证实这一预测,观察诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)在移植物排斥反应中的作用,笔者采用RT-PCR技术从HVEC血管内皮细胞株中克隆了iNOS cDNA片段,并构建了iNOS反义转基因载体。笔者的研究为进一步调查iNOS在抑制移植物排斥反应中的作用奠定基础。1材料与方法1.1材料人的血管内皮细胞株HVEC与培养基皆购自细胞...  (本文共4页) 阅读全文>>

《国外医学(肿瘤学分册)》2002年05期
国外医学(肿瘤学分册)

阳离子多聚物转基因载体的研究进展

基因治疗成功的关键是如何有效地将基因释放到靶细胞而又较少地产生副作用 ,即载体效率、靶向性和安全性的问题。转基因载体主要分为病毒载体系统和非病毒载体系统。其中 ,病毒载体较有效 ,是目前基因治疗的主要手段 (占报道载体的 80 %以上 )。但病毒载体有些缺陷 ,包括安全性、免疫原性、对靶细胞有一定毒性、非导向性、有限的携带能力 ,生产和包装问题、重组复杂以及高成本 ,必须进一步改造[1] 。非病毒载体是病毒载体的重要补充途径 ,尽管转染效率低 ,但由于免疫原性低、安全性高引起关注。非病毒载体包括裸DNA肌肉注射、脂质体、阳离子多聚物 (polyca tions、cationic polyelectrolytes、polyamines或 poly mers)载体以及复合载体等 ,其中后两者进展较快。现主要综述近年来阳离子多聚物载体的研究进展。1 阳离子多聚物载体的构成阳离子多聚物载体 ,其结构一般包括靶向配体、阳离子多聚物骨架、核...  (本文共4页) 阅读全文>>

苏州大学
苏州大学

含双荧光报告基因的转基因载体的应用

绿色荧光蛋白与红色荧光蛋白自发现以来,就因易于检测、荧光稳定、无毒害、种属通用性、易于构建载体、可进行活细胞定位定时观察等特性而得到广泛应用。其应用领域涉及生命科学的各个领域,包括研究基因表达的调控元件、增强子捕获、蛋白定位、研究基因表达的时空特性和空间定位、发育分子机理、筛选药物、临床检验、转基因动物和植物的筛选标记以及对病毒颗粒定位、蛋白质相互作用等方面。因此我们构建了含双荧光报告基因的不同转基因载体分别用于不同目的的转基因实验。首先,为了探索团头鲂β-actin启动子在家蚕BmN细胞和家蚕体内的活性,将转基因载体pigA3GFPAβdsRed和辅助质粒混合,通过脂质体介导转染BmN细胞和利用精子介导法导入家蚕受精卵,48 h后,可以观察到同时发绿色荧光和红色荧光的家蚕细胞,7天后,可观察到蚕卵具有绿色荧光和红色荧光,表明来自团头鲂的β-actin启动子在家蚕BmN细胞中具有活性,随着稳定转化细胞的传代,绿色荧光稳定存在,而...  (本文共120页) 本文目录 | 阅读全文>>