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重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳酸链球菌表达载体的构建

目的:构建重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳酸链球菌表达载体,为进一步研究人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在乳链菌的表达及其治疗价值奠定基础。方法:实验于2005-04/2006-03在南方医科大学南方医院消化病研究所完成。①载体pNCSF的构建:将质粒集落刺激因子及含有P59启动子、USP45蛋白信号肽的pNBC1000质粒分别加入BamH Ⅰ和Pst Ⅰ进行双酶切,并用Apa Ⅰ、Sac Ⅰ进行双酶切鉴定,重组质粒命名为pNCSF。②SDGFP的TA克隆及载体pNCSFGFP的构建:将经过优化适合在乳链菌表达的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因克隆于含有P59启动子、USP45蛋白信号肽的pNBC1000载体,得到重组质粒pNCSF;同时设计上下游引物经PCR扩增增强  (本文共4页) 阅读全文>>

《医学研究通讯》1987年01期
医学研究通讯

昆虫核多角体病毒作为表达载体研究的国内外新进展(兼谈DNA重组技术的几个关键问题)

(一)在近十年有关昆虫病毒核型多角体病毒(NPV)分子生物学研究的基础上,1983年美国科学家Smith等首先利用苜宿Y纹夜蛾多角体病毒(AC NPV)作为表达...  (本文共1页) 阅读全文>>

《中国兽医科技》1988年06期
中国兽医科技

昆虫核多角体杆状病毒表达载体在生物医学及兽医学中的应用

核多角体杆状病毒(NPV)是寄生于昆虫类动物的一类DNA病毒。分类上属于杆状病毒科杆状病毒属。属下包括苜蓿银纹夜蛾NPV(AcNPV)和家蚕NPV(BmNPV)等若干种群。特别是AcNPV,它作用目标特异,不感染脊椎动物、不感染...  (本文共3页) 阅读全文>>

《国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册》1989年03期
国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册

用酵母制备的乙型肝炎疫苗

将一段人工合成的编码HBsAg 226个氨基酸的基因(adw亚型)克隆到酵母表达载体pGPD中,构建成pGPD-1(HBs)。HBsAg基因的5′未端被一种化学合成的DNA片段所取代,此片段在含有表达载体pGPD-1(...  (本文共1页) 阅读全文>>

郑州大学
郑州大学

tPA乳腺特异性表达载体的构建及其瞬时表达

血管栓塞性疾病是当前危害人类健康导致死亡的主要原因之一。目前,国产正式应用于临床溶栓治疗的纤溶酶原激活剂主要有尿激酶(Urokinase,UK)和链激酶(Streptokinase,SK),而尿激酶和链激酶的溶栓效率有限且因无纤维蛋白结合特异性,易发生治疗性出血。组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,tPA)是人体内生理性纤溶酶原激活剂,与尿激酶和链激酶相比,人tPA与血栓基质有很高的特异性亲和力。tPA能在血栓局部激活纤溶酶原,使其转化成具有生物活性的纤溶酶,后者可水解血栓的基质—纤维蛋白,使凝血块溶解,血管再通,并且不引起血纤溶酶原的系统性激活,因而大大降低了治疗过程中出血的危险,是一种用于治疗急性心肌梗死等血栓性疾病的特效药品。tPA除了参与体内溶血和凝血的平衡调控外,还与其它一些重要的生理与病理过程密切相关,如组织再造、细胞迁移、排卵、补体激活、激肽产生、肿瘤侵袭等。正...  (本文共121页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
扬州大学

表达人组织激肽释放酶鸡输卵管暂态生物反应器的研究

为了构建鸡输卵管特异表达载体,根据已经发表的鸡卵清蛋白基因5′-和3′-调控区序列设计两对引物,用高保真PCR法从中国狼山鸡基因组DNA中分别扩增出长度各为3.0kb的卵清蛋白基因5′-和3′-调控区,将扩增产物克隆入pGEM-T载体,部分序列测定结果证明与国外发表的鸡卵清蛋白基因相应区域同源性为100%。将鸡卵清蛋白基因5′-和3′-调控区插入粘粒载体pHC20,获得的鸡输卵管特异表达载体命名为pOV1。为了证明构建的载体能有效驱动目的基因在鸡输卵管上皮细胞中表达,将绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因通过Xho Ⅰ位点克隆入pOV1载体,将获得的重组载体pOV1EGFP与脂质体或多聚阳离子(PEI)包裹后,分别转染产蛋鸡输卵管上皮细胞和成纤维细胞,转染后48 h在荧光显微镜下观察报告基因的表达,结果证明pOV1载体能有效驱动EGFP报告基因在输卵管上皮细胞中表达,而在鸡成纤维细胞中不表达。为了进一步优化pOV1载体的结构,用限制...  (本文共110页) 本文目录 | 阅读全文>>