分享到:

幽门螺杆菌粘附素基因hpaA研究

幽门螺杆菌(Helicobacter尸州ori,枷)是一种参与多种胃十二指肠疾病的重要人类病原体,被WTO定为一类致癌因子。HP在全世界人群中的慢性感染率大于50%,中国约有6亿人口受累于你感染,大大超过乙肝病毒携带者人数。HP感染最基本的条件之一是粘附定居,其粘附作用具有宿主特异性、组织特异性和明显的部位特异性,不同HP菌株在粘附同一胃粘膜组织时表现出明显的差异,提示脚与宿主之间存在复杂的粘附素和受体系统[’t2]。目前已知的HP粘附素有中性粒细胞激活蛋白(NAP)、神经氨酞乳糖结合原纤维血凝素(N邵H、饰aA)、BabA、公WIS抗原、AIPA和AlpB等。由于HP粘附于胃粘膜上皮细胞在其致病过程中起着关键性的作用,进一步研究枷的粘附机制,明确粘附素、粘附素相关受体及粘附于胃上皮细胞的病理机制,从而合理运用粘附素构建枷疫苗,将对防治饰感染引发的疾病有着重要意义。 Evan尹在研究枷粘附素时,首先发现并纯化出了能与神经氨酞乳糖...  (本文共5页) 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的研制及免疫原性研究

目的:用基因工程技术克隆和表达H.pylori 的hpaA基因,以纯化的重组蛋白为抗原,建立检测血清HpaA抗体的间接ELISA法,探讨以重组蛋白作为抗原在诊断H.pylori感染中的价值。方法:用PCR方法从H.pylori DNA中扩增hpaA基因片段。插入原核表达载体pQE30,转化受体菌DH5a,克隆及序列分析后在大肠杆菌中进行高效表达,表达产物经纯化和Western blot鉴定后,作为抗原,建立检测血清H.pylori HpaA抗体的间接ELISA法,与科研诊断标准比较评价其应用的可行性。结果: 1.重组表达质粒pQE30-hpaA构建成功,序列分析所得序列完整,插入的基因片段全长783bp,与基因文库中的hpaA基因同源性达97.3%;2. SDS-PAGE显示表达产物相对分子量为30 000,表达量占全菌总量的31.67%;3. Western blot显示该蛋白可被病人血清所识别;4.SDS-PAGE分析表达形...  (本文共77页) 本文目录 | 阅读全文>>

第三军医大学
第三军医大学

表达幽门螺杆菌鞭毛粘附素的重组大肠杆菌ghost型疫苗的制备及鉴定

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp) 是一种定植于胃内的革兰氏染色阴性、螺杆状或S 状的微需氧菌,可引发慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡等上消化道疾病,并与胃癌、胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤的发生有关。由于传统的抗生素疗法面临着价格高、耐药性等诸多问题,开发有效的Hp 疫苗成为防治Hp 感染的研究热点。目前研发的Hp 疫苗,多是采用基因工程获得HP 的有效抗原,再辅以佐剂,如福氏佐剂、CT、LT,脂质A,但这些佐剂都只是非特异地加强抗原的免疫效应。而传统的灭活疫苗虽有好的保护作用,但是现用的加热、照射、化学处理等灭活方法,常常引起抗原性的降低和改变。“Bacterial ghost”作为一种新型疫苗或抗原递送系统,是通过控制PhiX174 噬菌体E 裂解基因在细菌中表达得以制备的,其实质是一种无细菌胞浆和核酸的空细菌外膜。据报道,E 裂解基因编码的蛋白在细菌胞壁上可形成穿膜隧道,通过此隧道胞浆成分全部渗出。因为这...  (本文共84页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国生物制品学杂志》2005年02期
中国生物制品学杂志

幽门螺杆菌粘附素基因hpaA的克隆、表达及鉴定

幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)是慢性胃炎和消化性溃疡的重要致病菌 ,与胃癌的发生也密切相关。N 乙酰神经氨酰乳糖结合原纤维样血凝素(HpaA)是Hp的主要粘附素之一 ,它能与多种胃上皮细胞表面受体包括神经节苷脂 (GM3)、硫酸脑苷脂 (SLC)及层粘连蛋白上的唾液酸乳糖成分结合 ,使Hp紧密粘附于胃上皮细胞 ,从而进一步发挥对胃粘膜的损伤作用[1] 。所有Hp菌株均有HpaA基因 ,其核苷酸或氨基酸序列高度保守[2 ] 。Hp感染患者血清中出现的HpaA抗体能与HpaA融合蛋白发生免疫反应[3 ] 。因此 ,HpaA作为Hp疫苗的抗原是非常可行的。本研究应用PCR技术获得HpaA的结构基因 ,构建了高效原核表达系统pET30a hpaA E .coliBL2 1DE3,并用Westernblot鉴定表达产物的免疫原性 ,为制备HpaA粘附素疫苗提供依据。材料与方法1 菌株和质粒幽门螺杆菌ATCC4 ...  (本文共4页) 阅读全文>>

第一军医大学
第一军医大学

幽门螺杆菌粘附素HpaA的克隆、表达及其免疫原性和保护性研究

背景/目的:幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染了世界上一半以上的人口,是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要病原因子,与胃腺癌和胃粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的发生亦密切相关。现有的根除Hp的手段主要是联合应用抗生素,但由于该菌感染的普遍性、耐药菌株的不断增加、较高的花费以及病人的低依从性等,限制了抗菌药物的疗效,进行免疫防治研究十分迫切。鉴于Hp粘附于胃上皮细胞是其定植并致病的前提,阻断Hp的粘附显然可以防治Hp感染。因此本研究的目的是:选择暴露于细菌表面并与Hp定植密切相关的粘附素HpaA为目标,通过基因工程技术获得重组粘附素蛋白rHpaA,分别在体外和小鼠模型中评价其免疫原性及对Hp感染的免疫保护效果,以确定rHpaA在Hp疫苗研制中的应用价值。方法:(1)运用PCR技术从Hp总DNA中扩增出hpaA结构基因,装入pUC19载体并进行序列分析;(2)将hpaA基因亚克隆入表达载体pTrc99A...  (本文共83页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国人兽共患病学报》2007年03期
中国人兽共患病学报

幽门螺杆菌基因hpaA克隆、融合表达和鉴定

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是世界性分布的病原菌,它的感染是目前人类发生率最高的慢性细菌感染之一。已被确认为消化性溃疡和慢性胃炎的重要病因,并与胃癌和胃淋巴瘤的发病密切相关〔1-2〕,近年流行病学调查发现Hp感染还与冠心病、糖尿病、支气管炎等关系密切〔3-4〕。目前,关于幽门螺杆菌的致病机制尚不明了,但Hp能够在胃内定植是其致病的前提,而粘附又是定植的关键。N-乙酰神经氨酰乳糖结合原纤维样血凝素(HpaA)是暴露于Hp细菌表面的鞭毛鞘膜蛋白,也是该细菌主要的粘附因子之一,它能与多种胃上皮细胞表面受体包括神经节苷脂(GM3)、硫酸脑苷脂(SLC)及层粘连蛋白上的唾液酸乳糖成分结合,使Hp紧密粘附于胃上皮细胞,从而进一步发挥对胃粘膜的损伤作用〔5-6〕。研究表明所有Hp菌株均有hpaA基因,其核苷酸或氨基酸序列高度保守;Hp感染病人血清中出现的HpaA抗体能与HpaA融合蛋白发生免疫反应〔7-8〕。因此...  (本文共5页) 阅读全文>>