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家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)表面蛋白提取法研究

微孢子虫(Microsporidia:Prozoan)是一个大的生物群体,其分类、种类鉴定多以形态、生活史、寄生部位以及宿主域等决定。但有的即使是超微结构下区分也较困难,许多学者试图以蛋白质差异进行区分。1974年,FowlerandReeves[1]以SDS-PAGE分析微孢子虫的疏水性和亲水性蛋白质,发现疏水性蛋白质较稳定,而亲水性蛋白质则依试验条件不同而异,如宿主的改变、感染温度及时间等均可影响结果。1978年,KnelandZam[2]利用血清学原理分类微孢子虫。1985年,河原火田勇[3]也根据血清学将感染家蚕的Nosema属的微孢子虫分为bombycis型,M11型、M12型。1975年,knel[2]用微量电泳及等电聚焦分析了微孢子虫的总蛋白质差异。StreetandBriggs[4]用SDS-PAGE分析4种Vairimorpha属微孢子虫的总蛋白质,发现每种微孢子虫的蛋白质谱带都不完全一致,可重复而不受宿主及饲...  (本文共3页) 阅读全文>>

沈阳农业大学
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柞蚕微孢子虫EST分析、孢壁蛋白NpSWP1基因克隆及柞蚕免疫应答研究

柞蚕(Antheraea pernyi Guerin-Meneville,1855)属于鳞翅目大蚕蛾科,是一种重要的泌丝昆虫。我国年产柞蚕茧约7×104t,占世界野蚕丝总产量的90%以上。柞蚕微粒子病的病原物为柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi Wen et Ding),是柞蚕生产中的唯一检疫性病害。该病广泛分布于我国柞蚕产区,给柞蚕生产带来了严重的经济损失,近年来柞蚕微粒子病的发生和蔓延呈现出上升趋势,已成为制约柞蚕产业发展的重要因素之一。因此,开展柞蚕微孢子虫的系统分类学研究、基因信息的获取、孢壁蛋白基因的克隆及柞蚕感染微孢子虫后相关基因表达量的应激变化等研究,对于更深层次了解柞蚕微孢子虫的生物学特征、保障柞蚕产业的健康发展具有重要意义。本研究对Percoll纯化的柞蚕微孢子虫进行了光学和电子显微镜的观察;通过提取柞蚕微孢子虫的总RNA,采用SMART法构建全长cDNA文库,并对EST进行分析;通过微管蛋白基因构建系统...  (本文共129页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
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家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)休眠孢子和发芽孢子转录组、蛋白质组定量差异分析及NbRBL蛋白功能的初步研究

微孢子虫(Microsporidia)是一类专性细胞内寄生的真菌生物,因其广泛的寄生性,特殊的生物进化分类地位与侵染机制而备受关注;目前已有超过187个属的1500多种微孢子虫被发现。家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)是一种最早发现的微孢子虫[1],它可以特异性侵染家蚕,并造成养蚕业严重的经济损失。家蚕微孢子虫可以利用发芽方式侵染宿主细胞;作为孢子侵染过程的第一步,发芽亦是家蚕微孢子虫由休眠状态向侵染状态转变的过程。目前对家蚕微孢子虫发芽过程有关分子生物学层面的变化及发芽对侵染过程影响的研究较少。为了研究家蚕微孢子虫发芽过程分子生物学机理,设计进行了相关实验并取得主要研究成果如下。1、采用Illumina Hiseq 2000测序平台,对家蚕微孢子虫休眠孢子(Non-germinated spore,NGS)和发芽孢子(Germinated spore,GS)进行转录组学测序与分析。获得NGS组和GS组共计64 42...  (本文共132页) 本文目录 | 阅读全文>>

江苏科技大学
江苏科技大学

家蚕微孢子虫感染BmN细胞的蛋白质组学及其海藻糖酶的研究

微孢子虫是一类专营细胞内寄生的单细胞真核生物,具有广泛的宿主域。家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)引起的家蚕微粒子病是蚕桑业中的重要病害之一,给蚕业生产带来重大损失。近年来,宿主与病原体之间相互作用的研究已成为热点,家蚕作为家蚕微孢子虫的宿主,其对微孢子虫侵染的应答反应机制的研究有助于我们深入了解家蚕应对病原入侵的策略。家蚕微孢子虫作为家蚕的病原,其侵染机制一直受到人们的广泛关注和研究,微孢子虫的发芽过程作为侵染的重要一环,对其研究具有重要意义。微孢子虫内渗透压的增加是孢子发芽的先决条件,有报道认为,微孢子虫水通道蛋白和海藻糖酶有可能是促使微孢子虫内渗透压增加的关键蛋白。因此,本论文就宿主家蚕细胞对微孢子虫侵染应答的蛋白质组学和家蚕微孢子虫海藻糖酶的功能开展研究,主要结果如下:1.基于iTRAQ技术家蚕微孢子虫侵染BmN细胞的蛋白质组学分析利用家蚕微孢子虫体外感染增值体系,以感染和未感染家蚕微孢子虫的BmN细胞为研究...  (本文共95页) 本文目录 | 阅读全文>>

西南大学
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家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)孢壁蛋白SWP5的研究

微孢子虫(Microsporidia)是广泛分布于自然界的真菌类、细胞内专性寄生的真核微生物,具有广泛的宿主,包括无脊椎动物和脊椎动物。近10年来由于艾滋病患者后期临床治疗问题,加速了病原微孢子虫致病侵染机制、诊断和药物设计的研究。家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)最早发现于1857年,是专性寄生于经济昆虫家蚕的病原微生物,它所引发的家蚕微粒子病给世界养蚕业造成巨大危害,包括中国、印度和泰国等。揭示家蚕微孢子虫的侵染机制,攻克微粒子病这一蚕丝业的顽症,一直是世界蚕业界的重点和难点研究领域。微孢子虫的孢壁主要由蛋白质和几丁质构成,对孢壁蛋白的鉴定和功能研究是揭示微孢子虫侵染机制的主要方向。因孢壁结构的特殊性和研究手段的局限性,有效分离和鉴定孢壁蛋白的工作相当困难,其相应的功能研究进展缓慢。迄今为止,国内外已鉴定的微孢子虫孢壁蛋白仅有11个,其中兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon cuniculi)4个,小肠...  (本文共140页) 本文目录 | 阅读全文>>

西南大学
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家蚕微孢子虫孢壁蛋白的分离及主要组分的表达谱分析

微孢子虫(Protozoan:Microsporidia)是一类细胞内专性寄生的单细胞真核生物,广泛寄生于无脊椎动物和脊椎动物,包括人类;是经济昆虫、鱼、兔、产毛动物、啮齿类及灵长类的常见病原。自19世纪发现家蚕微孢子虫以来,不断有新的种类被鉴定,目前已发现有超过150个属,1 400多个种。微孢子虫的孢壁蛋白是微孢子虫最直接地与宿主接触的部分,很可能在感染宿主的过程中扮演着重要的角色。本研究在家蚕微孢子虫孢壁蛋白前期研究的基础上,建立了一种新的孢壁蛋白的提取方法,分析了不同方法提取蛋白样品的LC-MS/MS质谱数据,并对三个孢壁蛋白的表达谱进行了分析。主要研究结果如下:1.纯化孢壳后提取孢壁蛋白(GDGC)法的建立根据孢子发芽后弹出原生质团的特性纯化孢壳并结合沸水浴法建立了GDGC法(Germination & Density Gradient Centrifugation),即将发芽后的空孢壳经两次梯度密度离心纯化收集,然后...  (本文共80页) 本文目录 | 阅读全文>>