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增强型绿色荧光蛋白逆转录病毒载体的构建和表达

逆转录病毒载体被广泛用作对造血细胞进行基因转移的工具 ,转导方法的改进有赖于应用可快速分析并被高效选择的基因标志。为此 ,我们克隆了增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因 ,并构建可表达EGFP的逆转录病毒载体LGSN ,通过脂质体转染和交互感染方法建立高滴度的逆转录  (本文共5页) 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

逆转录病毒载体介导的胸苷激酶靶向治疗肿瘤的研究

癌症是一种死亡率极高,发病率逐年递增的疾病。由于传统化疗、放疗、手术疗法的效果仍不够理想而且副作用较大,基因治疗作为一种新型的治疗手段正日益受到重视。人的端粒酶催化亚单位(Human telomerase catalytic subunite,hTERT)是端粒酶的核心成分,是迄今发现的一个最为广泛的肿瘤新标志物。在生理条件下,正常人细胞大都没有hTERT活性;而在85%~90%左右的人肿瘤细胞中hTERT活性较高,并且其活性高低与肿瘤的恶性程度相关,这预示着端粒酶可以作为肿瘤基因治疗的理想靶点。本实验克隆了端粒酶催化亚单位核心启动子(hTERT)和血管内皮生长因子增强子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)及治疗基因胸苷激酶(Thymidine Kinase,TK),构建复合转录调控序列[VEGF]hTERT。并利用绿色荧光蛋白表达载体对[VEGF]hTERT复合转录调控序列的转录活...  (本文共177页) 本文目录 | 阅读全文>>

湖南农业大学
湖南农业大学

病毒载体介导家鸡多能细胞系的转基因技术研究

为建立家鸡的高效基因转移技术,本文从种蛋开窗技术的改进、用慢病毒表达载体将绿色荧光蛋白(GFP)基因转染种蛋内囊胚细胞和原生殖细胞、逆转录病毒载体转染睾丸细胞、人促红细胞生成素(hEPO)基因家鸡输卵管组织特异性表达载体的构建等方面进行了研究,结果如下:1改进了种蛋开窗工具、开窗方法以及封口方法,使该方法更简单实用,制作效率提高了2倍以上,便于在实践中推广应用,并已申报国家发明专利(申请号CN200710034253.0,公开号CN101020898)。为解决目前因外源基因的随机整合,需要大量实验样本才能使转基因家鸡研究获得成功等问题奠定了基础。2家鸡种蛋自身含有禽胚胎干细胞(BCs)或原生殖细胞(PGCs)。采用Gateway技术构建了含绿色荧光蛋白(GFP)基因的pLenti6/v5-DEST-GFP慢病毒表达载体,转染体外培养的BCs,获得了约70%的表达效率。转染体内囊胚,孵化13d时,PCR检测阳性率为64.7%。转染...  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京工业大学
北京工业大学

慢病毒介导siRNA和细胞内抗病毒因子对HIV抑制作用研究

随着人类免疫缺陷病毒(HIV)在全球蔓延,HIV感染已成为严重危害人类健康的疾病。高效抗逆转录病毒疗法能够显著地改善AIDS患者的症状,但需要终身用药,药物带来累积性毒性,一旦药物治疗失败就会产生耐药性病毒株。另一方面,现今还未找到一个完全有效的疫苗。随着对控制HIV机制的了解,很多研究者开始将注意力集中在基因治疗,将它作为单独的或者是辅助的治疗方式。RNA干扰技术通过靶向于结构蛋白或者是调节蛋白,已经有效地应用于HIV的基因治疗。由于siRNA在体内不稳定,很快就被降解,体外合成和质粒介导的RNA干扰持续时间较短,不适用于长期抑制基因表达。通过慢病毒载体表达编码siRNA的shRNA在转录水平下调HIV病毒基因从而抑制病毒复制成为基因治疗HIV一种重要的方式。将抗病毒基因导入到干细胞的方式对基因治疗达到长期治疗效果提供了希望。在筛选出针对HIV-1的tat、vpr和rev特异性siRNA的基础上,本研究分别构建了含有相应shR...  (本文共141页) 本文目录 | 阅读全文>>

《陕西农业科学》2007年01期
陕西农业科学

绿色荧光蛋白及其应用的研究进展

来源于水母A equorea v ictoria的绿色荧光蛋白(green fluorescen...  (本文共3页) 阅读全文>>

《生命的化学》2013年04期
生命的化学

点亮希望之光——绿色荧光蛋白的发现和发展

绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)是一种在当今生命科学和医学研究中被广泛使用...  (本文共5页) 阅读全文>>

《畜牧与饲料科学》2009年10期
畜牧与饲料科学

绿色荧光蛋白及其带来的科学革命

绿色荧光蛋白(GFP)的发现极大地推动了现代生物学的发...  (本文共3页) 阅读全文>>