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质粒转染对细胞生物学特性的影响

基因转移技术不仅广泛用于实验性研究,而且也是进行基因治疗的主要方法。实现肿瘤基因治疗的关键是基因高效导入和体内使用安全[1]。质粒DNA与重组病毒相比,具有操作简单,可容纳的插入片段大,整合和扩散的危险性小,易于制备等特点,因此质粒作为非病毒类基因载体用于基因治疗的研究也在逐年增多[2,3]。当基因被克隆后,可以通过转染技术将克隆基因导入各种不同类型的细胞内进行分子生物学方面的研究和实施基因治疗。由于转染DNA在宿主细胞染色体内整合具有随机性,转染后的细胞与转染前细胞在生物学特性方面有时会产生很大的差异。由于空质粒载体转染常被用来进行实验对照[4,5],但其自身对细胞生物学特性的影响研究尚少。本实验通过表达质粒DNA稳定转染,分析了质粒DNA转染对乳腺癌细胞系生物学行为的影响。1材料及方法1.1主要材料人乳腺癌细胞系T47D来源于美国典型培养物保藏中心(ATCC),细胞在含10%胎牛血清的RP-MI1640培养液中培养。转染试剂...  (本文共4页) 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

转基因克隆法制作人溶酶体β-葡萄糖苷酶奶山羊乳腺生物反应器的研究

人溶酶体β-葡萄糖苷酶(human lysosomal acidβ-glucosidase, GlcCerase)是糖蛋白降解途径的主要外糖苷酶,参与糖蛋白的回收利用。该酶减少或缺失会导致葡萄糖脑苷脂不能有效降解,在各器官中大量沉积,从而使机体发生广泛的病理变化,临床上称为“戈谢病”,酶替代法是目前该病的主要疗法。人体来源的GlcCerase获得极为困难,应用哺乳动物细胞和转基因植物表达系统生产重组人GlcCerase虽然已经有一些成功的报道,但也面临许多难以克服的问题,如在CHO细胞表达重组人GlcCerase,生产成本过于昂贵;在转基因植物中表达,存在重组蛋白质中糖链结构的改变以及下游加工处理困难等限制。如果应用转基因动物乳腺生物反应器生产重组人GlcCerase,在得到天然活性较高产品的同时,将极大地降低生产成本,具有其它表达系统所不能代替的优势。然而,显微注射法的高成本、低效率长期以来制约着转基因动物研究的发展,体细胞转...  (本文共167页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

乏氧/辐射双敏感启动子介导shTRAIL联合放射治疗肺癌的体外抑瘤效应研究

乏氧/辐射双敏感启动子介导shTRAIL联合放射治疗肺癌的体外抑瘤效应研究肿瘤的治疗通常采用手术、放疗和化疗,但是都存在局限性。肿瘤基因治疗的提出为肿瘤治疗提供了新的思路,研究者试图将基因治疗与手术、放疗和化疗中的一种或多种联合应用,提高治疗的效果。基因治疗是针对癌基因的激活和抑癌基因的失活,采用已知的基因片段导入、转移和重组等技术来消除激活的癌基因和增殖肿瘤中抑癌基因的功能,以此改变细胞的生物学特性,提高细胞对药物或者其他因素的敏感性,增强宿主抗肿瘤特性,控制肿瘤的生长。由于肿瘤部位为乏氧区域,肿瘤细胞辐射抗性较强,放射治疗方案受限。近年来,研究者考虑将基因治疗和放疗联合应用,进行肿瘤基因-放射治疗。主要是通过辐射敏感启动子介导下游基因在辐射条件下高效表达,既可以达到辐射杀伤,又可以实现基因治疗,一般辐射敏感启动子应用较多的是早期生长反应因子1(early growth response genel, Egrl)。为了提高乏氧...  (本文共142页) 本文目录 | 阅读全文>>

华南理工大学
华南理工大学

bFGF基因转染成骨细胞的生物学性质及成骨研究

许多研究结果表明碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)直接与成骨细胞联合植入体内能明显促进骨形成过程,这对临床治疗骨折、骨缺损、骨坏死等骨科疾病有一定的效果。但是bFGF在体内易降解,因此bFGF和成骨细胞联合植入时直接外源给予bFGF需反复多次注射,造成使用不方便、易感染,而且bFGF浓度不易控制,影响疗效。因此本课题设计基因治疗与骨组织工程学相结合的方法以改变外源性加入bFGF蛋白的不足之处,即将成骨细胞经bFGF基因转染后进行体外扩增,并进一步研究其体内外成骨能力,得出如下结果:应用PCR技术从克隆载体PBR322-bFGF载体上扩增获得bFGF cDNA基因,采用基因重组技术将bFGF cDNA克隆至真核表达载体pcDNA3.1和pEGFP-C3上。重组质粒分别经双酶切、PCR分析及序列测定验证了插入片段的正确性后,用脂质体介导重组质粒pcDNA3.1-bFGF和...  (本文共114页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国口腔颌面外科杂志》2006年01期
中国口腔颌面外科杂志

bFGF基因转染对骨髓基质细胞生物学特性的影响

骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)来源于骨髓的成纤维集落单位,是一种具有多向分化特性的细胞群,在成骨条件下可定向分化为成骨细胞表型;碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblast growth factor,bFGF)是一种能广泛促进来源于中胚层和神经外胚层细胞增殖的生物活性物质,在体内含量甚微,但具有广泛的生物学效应。bFGF可显著刺激髓源性BMSCs增殖,诱导向成骨细胞分化;bFGF在骨细胞发育及修复中具有重要作用。虽然转基因BMSCs的应用具有广阔的前景,但仍有许多问题需要进一步研究,如转基因细胞的生物学特性,转基因细胞表达细胞因子的生物学效应,转基因细胞体内移植后的修复效果等。可以肯定,这些方面的研究将是骨缺损修复研究领域的重要课题。利用基因转染技术将编码bFGF的基因片段转染至BMSCs中,有可能对上述问题的解决提供新的思路和方法,本实验探讨了bFGF基因转染对BMS...  (本文共5页) 阅读全文>>

南方医科大学
南方医科大学

肿瘤相关蛋白RalB和STARD7对肝癌细胞生物学影响的实验研究

肝癌是一种严重威胁人体健康的恶性肿瘤,其发病率在所有恶性肿瘤中据第3位。肝癌在东南亚地区具有较高的发病率,中国广东、台湾两地是肝癌的高发地区。肝癌的发病机制目前仍不是特别清楚,一般认为与病毒侵袭、化学污染物的接触、环境及饮食习惯、遗传易感性及其他方面的因素有关。目前临床对于肝癌的治疗方法以手术治疗为主,配合放疗和化疗,但是由于肝癌诊断较为困难,发现时多为晚期,因此治疗效果并不十分显著。恶性肿瘤的基因诊断与治疗是近年来研究和开发的热点,同时发现一些相对于恶性肿瘤的诊断及治疗靶标,但是由于肝脏器官体积较大、功能复杂,因此迄今为止,还并没有发现针对于肝癌的诊断及治疗靶标。RalB是小G蛋白Ral(Ras like)家族的成员之一,Ral家族由RalA和RalB组成。Ral是Ras超家族的一个成员,具有参与介导许多不同细胞外信号活化的潜能。Ral蛋白与Ras具有55%的氨基酸同源性,其作为辅助因子并活化,从而参与肿瘤基因Ras诱导的细胞...  (本文共158页) 本文目录 | 阅读全文>>