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短小芽孢杆菌作为芽孢杆菌属基因工程受体菌的研究

自从spizizen‘,,,发现B.,,btilis在一定条件下出现天然感受态以及Taka五as五i助证明噬菌体pBsl可以对B.s动tili:进行普遍性转导以来,通过转化和转导方法对B.切衍衬‘:1“做了广泛的遗传学分析,至1982年已完成了包括270多个基因的环状遗传学图谱山,,并对染色体复制起始及终止区做了定位,从而使B.,二btili’成为革兰氏阳性细菌中遗传背景研究得最深人的一种原核生物。 E.coli作为基因克隆受体的首选菌株被广泛地用于基因工程研究,虽取得了许多重大成果,但该系统存在以下不足之处:E.coli属革兰氏阴性肠道杆菌,是一种潜在的病原菌;在生长过程中不断释放脂多糖性质的热原物质,给产物的分离和纯化带来很大困难;由于其细胞包被的复杂结构,因此无分泌胞外蛋白的能力。E.co石的这些缺点恰恰是B.s“如ilit的优点。因而近年来一些研究者[2,‘川对将B.:动tili,等芽抱杆菌属菌种开发成为重组体DNA分子...  (本文共7页) 阅读全文>>

《遗传学报》1988年06期
遗传学报

短小芽孢杆菌的遗传转导

以噬菌体为媒介进行菌株间遗传物质转移和基因重组早已成为E.。oI‘基因定位和精细遗传分析的重要手段阴。B.;。btili,噬菌体PBsl叫是至今所知的基因组最大的噬菌体,其大小约相当于宿主基因组的10外,其普遍性转导的能力巳成为B.:动tl’li,遗传作图的重要工具[,1。近年来,噬菌体PBsl不仅被用作B.,动,iI行茵株间的孟组质粒的转移,也被用作刀acizz,,属不同种间重组质拉的转移‘目。在B.aoyloli宁,eloci‘,,中,噬菌体PBsl转导似乎已成为导人外源遗传物质的唯一方法[7J。 B.p姗il,:是B.:“句j’li,的一个近缘物种以0J,其中有的菌株同时还是碱性蛋白酶生产菌,有一定的工业价值。但除T Lovett用pBsl和pBpl对B.P,。11,s做过转导研究以外tll.13],尚未见到有关B.p,mil“,噬菌体转导研究的报道。 在B。日““:属的载体受体系统研究中,我们发现B.pomil“,289...  (本文共5页) 阅读全文>>

复旦大学
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短小芽孢杆菌表达系统的优化研究

真菌病害是造成农作物产量损失的重要原因之一,利用天然的或经遗传改良的微生物进行植物真菌病害的防治是当前国际上较为活跃的研究领域之一。本实验室已从水稻叶片上分离出一株附生菌 DX01,经试验证明该菌具有天然拮抗某些真菌的特性,若能进一步将其定向改造成具有更强抗真菌能力的工程菌,作为生物农药的有效组分,从而可以减少因使用化学农药而造成的环境污染,无疑具有重要的理论和现实意义。绿色荧光蛋白(GFP)基因作为标记基因,被广泛应用于环境微生物学方面,由于其表达稳定,容易观测,因此,也可以作为启动子活性的报告基因。为了进一步优化短小芽孢杆菌表达系统,以 GFP 作为报告基因,对克隆自 DX01 菌株的启动子进行了一系列的研究。采用 PCR 技术,亚克隆来自短小芽孢杆菌 (Bacillus brevis) DX01 菌株总基因组中的启动子活性片段 F1,分别构建了大肠杆菌组成型表达载体pUC118-F1gfp 和一个大肠杆菌-短小芽孢杆菌穿梭...  (本文共107页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
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短小芽孢杆菌组成型高效表达分泌系统的建立与应用

利用天然的或经过遗传改良的微生物进行植物病虫害的防治是目前国际上较为活跃的研究领域,尤其是利用植物本身根系和叶围正常存在的微生物进行外源抗病虫害基因的转化,可使外源基因产物持续作用于植物表面,赋予植物抗病虫害的能力,避免或减少因使用化学农药对环境造成的污染。芽孢杆菌是重要的生防微生物,已有越来越多的研究表明,芽孢杆菌对植物的多种病原真菌、细菌和昆虫有抑制效果。本实验室从水稻叶片上分离出一株附生菌——短小芽孢杆菌DX01,它与水稻有良好的亲和性,经实验证明该菌具有天然拮抗某些真菌的特性,为了进一步将其定向改造成具有强抗真菌能力的工程菌,我们对该菌进行了一系列的研究工作。采用PCR技术,亚克隆了来自短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)DX01菌株总基因组的启动子活性片断F1,并构建了大肠杆菌一短小芽孢杆菌穿梭表达载体pHY300-Flgfp,以缺失启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,通过荧光激活细胞分检分析,检...  (本文共66页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

短小芽孢杆菌GBSW19全基因组测序分析及其p450细胞色素酶基因的克隆和表达

芽孢杆菌属(Bacillus spp.)是一种革兰氏阳性菌,好氧或兼性厌氧,可以产生多种次生代谢产物,具有抗病和促生的作用,是一类重要的植物根围促生细菌(plant growth promoting rhizobacteria,PGPR)。本研究表明短小芽孢杆菌GBSW19能够在低温条件下高效降解秸秆;GBSW19处理组秸秆还田后,对土壤的pH,全氮、速效氮、全钾、速效钾、速效磷的含量进行了检测,还探究了 GBSW19在逆境下的生长特性。完成了 GBSW19全基因组测序和生物信息学分析,从GBSW19基因组中成功克隆和表达2个p450细胞色素酶基因。为后续研究奠定了基础,主要研究结果如下:为探究GBSW19菌株在大田中对秸秆的降解效果,于2013年12月进行了田间实验,调查施用菌株GBSW19对秸秆的降解情况,以及对田间土壤的影响;在冬季小麦实验田中,施用菌株GBSW19后作物秸秆在30 d的相对降解率为39.7%,而对照菌为2...  (本文共91页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物工程学报》2002年04期
生物工程学报

短短小芽孢杆菌-大肠杆菌穿梭分泌表达载体的构建

分泌表达作为蛋白质的一种表达形式具有以下优势 :1 产物一般可溶、可正确折叠、有生物活性 ;2 表达产物与胞内蛋白分离 ,毋需破碎细胞 ,利于分离纯化 ,简化工艺。现有原核分泌表达系统不尽如人意。大肠杆菌在进行外源蛋白高效表达时易形成包涵体 ;产物分泌表达水平低 ,且常分泌至周质空间而非胞外[1] 。枯草芽孢杆菌具有良好的分泌性和非致病性 ,但胞外蛋白酶活性高 ,易引起产物降解[2 ] 。短短小芽孢杆菌 (Brevibacillusbrevis,Br .bre vis)具有分泌蛋白能力强和胞外蛋白酶活性低的特点[3 ] ,是分泌表达外源蛋白较理想的宿主。分泌蛋白能力强的短短小芽孢杆菌分泌至培养基中的蛋白质主要是一或二种高分子量的细胞壁蛋白。其细胞壁蛋白基因的转录由 5个串联启动子控制 ,转录功能强 ,且在细胞壁蛋白表达过程中起主要作用的P2 和P3 启动子受时序调节[3 ,4 ] 。细胞壁蛋白的信号肽序列具有一般革兰氏阳性菌信...  (本文共4页) 阅读全文>>