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力竭性游泳对大鼠胰岛 A、B 细胞形态学变化的影响——免疫组化及原位分子杂交结果分析

力竭性游泳对大鼠胰岛A、B细胞形态学变化的影响——免疫组化及原位分子杂交结果分析山东体育学院(济南250063)郑陆提要:采用免疫组化及原位分子杂交技术,本文研究了负重力竭性游泳对大鼠胰岛A、B细胞分泌功能的影响。主要结果发现:力竭状态下,①大鼠胰岛Ins-IR细胞呈色反应强度增加,而Glu-IR细胞呈色反应强度降低,说明B细胞Ins释放被抑制,A细胞Glu释放增多。②大鼠胰岛B细胞内Pro-InsmRNA杂交信号明显减弱,说明Pro-Ins-mRNA转录受到抑制,Ins合成受抑。③Ins-IR和IAPP-IR细胞未呈现相同程度的呈色反应变化,提示B细胞内存在着含IAPP/Ins不同比率的分泌颗粒,可随机体的机能状态需要而分别释放。关键词:免疫组化,原位分子杂交,杂交信号,胰岛A、B细胞,力竭EfectsofExhaustiveSwimmingonMorphologyofIsletAandBcelsinMiceZhengLu,e...  (本文共6页) 阅读全文>>

《解剖学杂志》2005年06期
解剖学杂志

原位分子杂交中脱片问题浅析

核酸分子杂交技术是当今分子生物学研究的重要手段。 原位分子杂交技术是分子生物学和组织化学结合的成果,能 准确定位组织细胞内的特定基因表达。但分子杂交实验操作 步骤繁琐,实验周期长,条件要求高,涉及实验试剂多,常常因 为很小的因素而导致实验失败。原位分子杂交实验中,所有 的操作均是针对载玻片上的目的组织进行的,因此,实验中的 脱片就是常常困扰实验者的一个问题〔‘一3〕。在此.笔者根据 自己的实际操作经验和资料研究,对脱片问题进行简单分析, 以求对实验有所帮助。 载玻片的处理与粘附剂对脱片的影响 实验首当其冲的第一步骤便是组织切片的粘附。一般的 组织化学和免疫组织化学的玻片处理均为:载玻片在沸水加 清洗剂的液体中煮沸30 min左右,自来水清洗干净,人洗涤液 24h,然后,自来水冲洗,蒸馏水冲洗,烘干。用粘附剂挂片,常 用的粘附剂有铬钒~明胶、APES、多聚赖氨酸。在原位分子杂 交中载玻片的处理应在此基础上有更高的要求。这一环节 中...  (本文共2页) 阅读全文>>

《生物工程学报》2002年02期
生物工程学报

电镜原位分子杂交技术及其应用

1 概述1 1 电镜原位分子杂交技术的建立GallG和PardueM(196 9) [1 ] 创立原位杂交 (Insituhybrid ization)技术以来的 30年内 ,该技术在各个领域得到了广泛应用。但在大部分的研究工作中 ,杂交信号都是用光学显微镜进行观察并记录的 ,这样在分辨率上就存在很大的限制 ,为了对检测的特异核酸进行更精确的亚细胞定位 ,以便将组织、细胞和染色体等水平上DNA或RNA定位与超微结构相互联系起来 ,许多学者就试图将其与电镜组织化学技术相结合 ,并由此建立了电镜原位分子杂交技术 (Electronmicrosco picinsituhybridization)。1971年JacobJ等首先进行电镜水平的原位杂交获得成功 ,但是超微结构的保存极不理想[2 ] 。随后很多学者对这一技术进行了改进 ,BinderM等 (1986 )用生物素标记的rDNA探针及UI探针在用LowicrylK4M低温包埋的切...  (本文共4页) 阅读全文>>

《诊断病理学杂志》2001年02期
诊断病理学杂志

HPV6B/11型病毒原位分子杂交检测方法的改进与应用

原位分子杂交与病理免疫组化相比有定位更准确、特异性更强、敏感性更高、无内源性干扰等特点 ,从分子生物学水平为病理诊断、鉴别诊断和预后判定提供了更可靠的指标 ,从而受到广泛重视。然而此项技术又因实验步骤繁杂、技术要求高、耗时长、影响因素多 ,在基层医院推广应用受到一定限制。为此 ,我们对原始操作法的一些主要技术步骤进行了探索性改进。通过 30例标本 2种方法的对比检测 ,其结果准确一致 ,仅需 35h即可完成 ,比原始方法所需时间缩短一倍。应用 2年多来效果较好 ,介绍如下。1 材料与方法1 材料 取我院 1997~ 1999年妇科及泌尿外科疑为尖锐湿疣的标本 30例 ,用 10 %福尔马林液固定。所有标本均经原位分子杂交检测HPV 6B/11型为阳性和阴性的蜡块。杂交试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。采用浙江省临安电子仪器厂生产的YWY781B型医用微波仪及市售电吹风机。1.2 方法 一次性将Dig AP稀释成 1∶5 0 0...  (本文共2页) 阅读全文>>

《滨州医学院学报》1980年10期
滨州医学院学报

原位分子杂交中脱片技术探索

原位分子杂交中脱片技术探索李冰吴照敏马云(病理学教研室滨州市256603)关键词原位分子杂交;技术改进;预防脱片原位分子杂交要求严谨,操作复杂,周期长[1]。操作过程中脱片严重,成功率低[2]。作者使用自制的粘附剂,通过技术改进,使脱片率显著降低,取得良好效果。1材料与方法1.1材料硫酸铬钾—明胶粘附剂;②出血热病毒感染的鼠脑组织石蜡切片(厚度5μm)84张;③阳性对照石蜡切片(厚度5μm)16张;④试剂、烤箱、低温冰箱等。1.2分组①实验组:将硫酸铬钾—明胶粘附剂挂片的出血热病毒感染的鼠脑组织石蜡切片分为8、18、16张三组,每组分别配有2、2、4张阳性对照石蜡切片,分别进行相同条件的三次杂交试验。②对照组:采用同一粘附剂挂片,相同组织切片,同等切片数及阳性对照片分别为10、20、20张三组,进行原位分子杂交试验。1.3方法①杂交试验前的烤片温度由60℃提高至95℃,时间由30分钟延长至40~60分钟。②缩短蛋白酶消化时间或去...  (本文共1页) 阅读全文>>

《临床与实验病理学杂志》1950年30期
临床与实验病理学杂志

原位分子杂交技术一些体会

原位分子杂交技术一些体会贺占国,江泓,张文,郭宏原位分子杂交技术是近几年来发展起来的一项新技术。在基础研究和临床诊断上已开始广泛应用。在临床病理诊断中可为早期诊断、鉴别诊断、判断预后提供重要依据。与免疫组织化学相比,其特异性更强,敏感性更高,已受到病理工作者普遍欢迎和高度重视。然而这项技术实验步骤繁多、周期长、影响因素较多,某一环节操作不当就可能造成整个实验失败。我们对一些主要技术问题进行了实际探索,体会如下。1组织固定用4%多聚甲醛固定组织,DNA及RNA均能获得满意的杂交信号。RNA很容易降解,故标本要及时固定;DNA则较稳定,易保存,用10%福尔马林固定标本也可获得满意结果。2蛋白酶K消化2.1消化处理可在室温中进行,为了比较,固定液均为10%福尔马林。选择固定时间分别为1d、1个月、1年的乳腺癌组织各1块,石蜡切片5μm厚,每块组织连续切片30张。10张切片为一组,以不同的时间用一种浓度的蛋白酶K消化。第1张切片不消化,...  (本文共2页) 阅读全文>>