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原发性肝癌中N-ras、c-myc癌基因的表达研究

N-ras、c-myc癌基因的表达异常与肝癌发生的关系已有较多的报道并引起了关注[‘”j,但有关上述两基因在原发性肝癌中表达的定位研究尚不很多,癌与非癌肝组织中的表达率也有不同报道。本文应用点杂交和原位杂交实验对肝癌高发区原发性肝癌中N-ras、c-myc癌基因的表达、分布和定位进行了研究。材料与方法一、标本:启东肝癌研究所1993年~D94年肝脏部分切除的原发性肝癌34例,肝血管瘤1例,共35价标本。二、探针:随机弓l物法标记地高辛N-ra。第1外显子cDNA(0.skb)、c-myc第3外显子DNA(1.4kb)探针并大致确定探针的浓度。王、点杂交实验:取上述液氮保存的癌与非癌肝组织交界处的新鲜标本50mg经匀浆、PronaseE消化、酚/氯仿抽提纯化、无水乙醇沉淀核酸并溶于TE缓冲液中,取样品10pl点样进行点杂交,杂交液中分别含有N-ras探针vsng/ml和c-mgc探针vsng/ml。杂交后经洗膜、封闭、Anti-l...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国实验血液学杂志》1998年02期
中国实验血液学杂志

骨髓增生异常综合征患者N-ras基因突变的连续观察

ras基因突变与肿瘤的发生密切相关,在白血病患者中突变发生率很高。骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)为造血细胞恶性增殖性疾病,近半数病人进展为AMI,。因此,研究MI)S发展为AM[,过程中N—ras基因变化有助于了解ras基因突变与白血病发生之间的关系及MDS发病机制。本研究应用PCR技术,结合地高辛标记寡核苷酸探针杂交法,连续观察了MDS患者中N—ras基因突变的情况。材料与方法 病例来源 MI)S患者均在本院1986—1996年间确诊,19例共40例次。取患者病初与病情进展或转为白血病时室温下贮存的瑞氏染色的骨髓涂片。根据:FAB分型,在19例中最初诊断为RA有7例,RAEB8例,.RAEB—t 4例,其中男性10例,女性9例,平均年龄51.8±14.3(26—79)岁。正常对照1例由本院门诊骨髓室提供。 DNA提取 用高压灭菌新手术刀片从1—2张(约4 cm2)骨髓涂片上刮取血...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国医师杂志》2003年S1期
中国医师杂志

急性髓细胞性白血病N-ras癌基因表达的意义

ras癌基因是最早被确定的由点突变方式激活而致细胞癌变的原位癌基因 ,ras癌基因突变在白血病的发病机制中具有重要作用 ,N -ras癌基因是急性髓细胞性白细胞 (AML)最常被检测到的基因异常 ,为此 ,本文检测AML中N -ras的变化 ,报告如下。1 材料和方法1·1 病例和方法 选择本科住院的AML 10例 ,FAB分型M1- 2例 ,M2 - 2例 ,M3- 3例 ,M5 - 3例。取患者静脉血 5ml,肝素抗凝RPM16 40稀释 ,置于淋巴细胞分离液上 (比重 1.0 77) ,180 0rpm离心 15min ,分离出单个核细胞层 ,用RPM16 40悬浮制成悬浮液。1·2 RT -PCR方法 细胞悬液用酚 -氯仿抽提后乙醇沉淀 ,6 5℃烘箱烘干 ,采用美国华美生物工程公司PCR扩增试剂盒 ,美国PE公司生产的 96 0 0型扩增仪 ,经逆转录cDNA与DNA扩增 ,琼脂糖电泳后 ,中短波紫外线下 ,在 2 5...  (本文共1页) 阅读全文>>

《实用肿瘤学杂志》2001年04期
实用肿瘤学杂志

妊娠滋养细胞疾病N-ras基因的表达及临床意义

性细胞百分比,而着色强度则以多数阳性细胞呈现的染色特性计分。所得数据采用产与秩和检验。 表l原位杂交结果判定标准阳性细胞百分比(%)计分着色强度计分0‘..1八乙内」无弱中强01,工八j4 人类肿瘤的发生与癌基因有关,N一二基因在许多肿瘤中都有扩增与过度表达。妊娠滋养细胞肿瘤(Gestation叔TroplloblastiC Tlllllor,cTr),为一组起源于胎盘绒毛滋养细胞的特殊疾病,近二十年来,G件的诊断和治疗有了突破性进展,但其发生的原因,至今不明。本研究采用原位杂交技术,研究癌基因N一二在妊娠滋养细胞肿瘤发生、发展中的作用及其与妊娠滋养细胞肿瘤临床分期、预后的关系。1材料与方法1.1标本来源组织标本来源于湖北省各大型医院1993一1997年间妊娠滋养细胞肿瘤石腊包埋组织块,其中葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌各18例,葡萄胎来自清宫组织,侵蚀性葡萄胎和绒癌为手术切除的子宫标本,取组织前均经病理确诊。1.2探针标记癌基因N...  (本文共2页) 阅读全文>>

《南京医科大学学报》2000年05期
南京医科大学学报

多发性骨髓瘤患者中N-ras基因突变的检测及其意义

多发性骨髓瘤 (multiplemyeloma ,MM )是以骨髓中浆细胞恶性克隆增生为特征的一种疾病。患者虽有贫血、骨损、高钙血症、免疫缺陷等共同的临床表现 ,但在病程进展、疗效、预后等方面却表现各异。产生这种异质性的原因可能是由于恶性克隆分子遗传学的异常 ,包括各种肿瘤基因的突变。本文应用聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR) 单链构象多态性 (singlestrandconformationpolymorphism ,SSCP)银染法 ,对 14例MM病人的N ras基因突变进行了检测 ,并结合临床探讨突变的意义。1 资料和方法1.1 病例选择14例MM患者 ,其中男 11例 ,女 3例 ;年龄 4 1~81岁。诊断标准依照文献 [1]。1.2 试剂引物 外显子 1引物 (扩增N ras基因第 12、13密码子 ) :N12 ,13A 5′CTGGTGTGAAATGACTGAG T 3...  (本文共3页) 阅读全文>>

《环境与健康杂志》2007年12期
环境与健康杂志

二羟环氧苯并芘对人支气管上皮细胞N-Ras基因表达的影响

苯并(a)芘的代谢衍生物——7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(BPDE)具有强致癌性,其与人类肺肿瘤的发生关系密切[1]。原癌基因的激活是导致肿瘤发生的重要因素,其激活方式主要有点突变和基因扩增等。Ras癌基因是早期发现的可以导致正常细胞发生恶性转化的原癌基因之一。目前大量的研究都是关注K-Ras和H-Ras基因点突变与肺癌的关系[2-4],尚缺乏N-Ras基因表达扩增方面的研究。N-Ras基因编码P21蛋白,在正常状态下只有5%的P21处于活化状态。但N-Ras基因表达扩增可以导致其编码蛋白质发生量的改变,从而使信号通路加强,加速蛋白合成、细胞生长、增殖和分化等[5]。本研究拟通过比较经BPDE转化人支气管上皮细胞与正常对照细胞之间N-Ras基因在转录及翻译水平表达情况的差异,探讨N-Ras基因异常表达在BPDE转化人支气管上皮细胞中的致癌机制,为肺癌的治疗和预防提供进一步理论依据。1材料与方法1.1仪器与试剂1.1.1主要...  (本文共4页) 阅读全文>>