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免角膜细胞的原代培养实验研究

随粉医学科学的发展,角膜病的研究也早已进入了基础医学研究的领域。近几年来,世界上许多学者对不同种组织的角膜上皮、基质和内皮细胞进行了多种方法的培养,并获得成功I,l一,,其中包括人、兔、猫等。但在我国开展这种工作甚少。许多角膜病的基础科学研究首先需要在体外建立细胞培养的模型,故将我们对兔角腆组织的上皮、基质和内皮细胞的原代培养方法和结果报告如下。 材料和方法 一、琼醋平板的制备 琼醋粉39(来自美国FMC Co.,Roekland,ME)加入10oml生理盐水在小烧瓶内加热溶解并高压灭菌。在琼醋冷却成型前,取24孔组织培养板一块(来自美国Costar,Cambridge,MA),在净化工作台内将溶化的琼醋液注入2’孔组织培养平板的每个孔内,注入的琼醋掖平距孔面约2~3mm,平放在净化工作台内冷却,使其自然形成一个湿润的凹面,加盖后置4℃冰箱保存备用。 二、组织培养液的制备 细胞培养液是用美国生产的RPMI一1640谷酞胺粉剂20...  (本文共5页) 阅读全文>>

《潍坊医学院学报》1990年01期
潍坊医学院学报

人角膜细胞的原代培养实验研究

角膜细胞的体外培养是现代角膜病基础学研究的重要方法之一,尤其是角膜内皮细胞的培养更为重要,它对研究角膜的生理学,病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段。另外,角膜内皮细胞的培养成功,也为内皮细胞移植开拓了广阔的前景。目前我国的角膜细胞培养技术还处于初始阶段,但有良好的发展前途,我们在对角膜细胞的病毒学和免疫学研究中,大量地应用了角膜上皮、基质和内皮细的原代培养,现把我们对人角膜三种细胞的实验室培养技术和细胞形态学观察结果报告如下:材料和方法 一、琼脂平板的制备 琼脂粉3以来自美国FMcco.Rock-land,ME)加1 00ml生理盐水在小烧瓶内加热溶解并高压灭菌.取24孔组织培养板一块(来自美国c昭“甘,ombr五dge,MA),在净化工作台内将溶化的琼脂液注入每个孔内.注入的琼脂液平面距孔面约2~3~,待其冷却后自然形成一个湿润的凹面,加盖后保存备用。 二、细胞培养液的制备 用美国生产的Rp加且一1640谷酞胺粉剂...  (本文共4页) 阅读全文>>

《九江学院学报(自然科学版)》2017年02期
九江学院学报(自然科学版)

真皮成纤维细胞原代培养及生长曲线检测

成纤维细胞为真皮结缔组织中数量最多的细胞,在皮肤创伤修复过程中发挥重要作用[1]。各种创伤因子刺激成纤维细胞,促进其增值、合成以及分泌。成纤维细胞可合成细胞外的纤维、基质和蛋白多糖,为新生的血管和增生的细胞提供支架,有利于表皮再上皮化,促进伤口愈合[2]。在组织形成阶段,成纤维细胞被激活并转化为肌—成纤维细胞,肌一成纤维细胞可表达《-平滑肌肌动蛋白。这些激活的肌_成纤维细胞还能够合成细胞外基质,并且最终取代临时的细胞外基质,肌一成纤维细胞促进伤口收缩。在创伤愈合的后期,即组织重构阶段,肌一成纤维细胞经过凋亡,数显着地减少,并转变为静态表型,不表达£?-平滑肌肌动蛋白[3]。体外成功培养真皮成纤维细胞是研究皮肤创伤修复的重要工具,如何建立一种简单实用的培养方法,仍是皮肤创伤修改过程中建立真皮成纤维细胞培养模型的关键环节。该研究在总结他人实验方法的基础上,采用胰酶消化■与组织块贴壁的方法获得纯度较高、活力较好的C57乳鼠皮肤成纤维细...  (本文共3页) 阅读全文>>

《昆明医科大学学报》2017年07期
昆明医科大学学报

小鼠颅底软骨联合细胞的体外原代培养

颅底是支持颅面部骨骼生长和建立空间位置关系的骨性平台[1],而颅底软骨联合(The cranial basesynchondrosis)则是颅底的生长中心,以软骨内成骨的方式实现颅底的纵向生长[2].日益增多的研究显示,颅底软骨联合的生长发育异常与颅面畸形的发生存在紧密联系[3].因此,研究颅底软骨联合的生长发育特征和调控机制对深入理解颌面畸形的发生和矫治机理具有重要意义.颅底软骨联合的生长发育主要决定于软骨细胞的代谢和功能状态,而基于细胞培养技术的体外实验是观察特定因素对细胞生物学作用和相关机理较为直观而可靠的研究途径.建立颅底软骨联合细胞体外培养细胞系则是开展相关研究的基础,但目前相关的研究报道尚不多见.笔者以小鼠为供体,对颅底软骨联合细胞的体外原代培养方法及其基本生物学特征进行了实验研究.1材料和方法1.1实验动物产于SPF级实验动物饲养房的1 d龄C57小鼠活体6只(莱斯克生物科技公司,上海).1.2主要试剂和仪器II型...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国血吸虫病防治杂志》2017年04期
中国血吸虫病防治杂志

猫肠上皮细胞的原代培养及cDNA文库的构建

弓形虫(Toxoplasma gondii)是人畜共患寄生虫,危害为孕妇感染可造成胎儿死胎、畸形、流产和弱人类普遍易感,感染率为15%~85%不等[1]。其最大智[2],免疫缺陷病人可引发全身性的急性弓形虫病,症状伴高烧、寒颤、腹泻甚至死亡,且病死率高[3]。由件下取一段小肠,剔除肠系膜,置于盛有无血清的于其复杂的生活史和致病机制,目前尚无有效的药物DMEM液的50 ml离心管内;超净台内将小肠移入9 cm及疫苗可用。弓形虫中间宿主众多且无特异性,能感培养皿中,用PBS(p H 7.2)清洗2~3次,将小肠剪成染几乎所有有核细胞,但只有猫科动物是其终宿主。数段,用眼科剪纵行剪开肠管,先剪成长约2~3 mm目前相关研究主要集中于速殖子对中间宿主入侵、增的小片,PBS(p H 7.2)液清洗2~3次后,用无血清的殖及逃避其免疫等方面,对于弓形虫在终末宿主体内DMEM液再洗2~3次;加入适量的DMEM液,用眼科的生长发育机制了解较少,...  (本文共5页) 阅读全文>>

《牡丹江医学院学报》1999年02期
牡丹江医学院学报

细胞的原代培养

细胞生物学是生命科学四大前沿学科之一。近年来,随着该学科的迅猛发展,涌现出大量引人注目的新成果。许多新的理论、既念被广泛应用于医学领域,对医学的发展起到巨大的推动作用[‘]。动物细胞的原代培养,作为细胞生物学的一项重要实验技术,已成为研究细胞生理、增殖、遗传、癌变和细胞工程等课题的一项强有力的手段卜]。现将具体方法介绍如下:1材料和方法1.1取材取乳鼠肾脏,即容易培养成功的幼体组织进行培养。首先,用颈椎脱位法杀死乳鼠,然后把整个乳鼠浸入盛有75%乙醇烧坏中,置ZS~3S后取出,立即携入超净含,用消过毒的剪刀剪开用碘酒和乙醇再次消毒后的背部皮肤,取出肾脏置于无菌手血中D]。互.2切割用灭菌Hanks液冲洗两遍,用消毒后的眼科剪刀将组织剪开工。。~3m。左右小块,然后加3。k~5。IHanks液,冲洗组织块到发白为止,移入到无菌离心管,静置数分钟,弃土消「’。1.3消化吸取0.25%胰酶10ml加入离心管,与组织块混匀,加上管口塞,...  (本文共2页) 阅读全文>>

《细胞与分子免疫学杂志》197S年10期
细胞与分子免疫学杂志

Ⅱ型肺泡上皮细胞的分离、纯化及原代培养(摘要)

Ⅱ型肺泡上皮细胞的分离、纯化及原代培养*(摘要)曾庆富钱仲裴蒋海鹰(湖南医科大学病理学教研室,长沙410078)本文报道了Ⅱ型肺泡上皮细胞(简称Ⅱ型细胞)的分离、纯化、鉴定和原代培养方法。选用SD大鼠,冲洗净肺内血液,肺泡灌洗尽量清除肺泡腔内巨噬细胞。经气管肺内灌注胰弹性蛋白酶消化肺组织后剪碎、过滤,每只大鼠可...  (本文共1页) 阅读全文>>