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免角膜细胞的原代培养实验研究

随粉医学科学的发展,角膜病的研究也早已进入了基础医学研究的领域。近几年来,世界上许多学者对不同种组织的角膜上皮、基质和内皮细胞进行了多种方法的培养,并获得成功I,l一,,其中包括人、兔、猫等。但在我国开展这种工作甚少。许多角膜病的基础科学研究首先需要在体外建立细胞培养的模型,故将我们对兔角腆组织的上皮、基质和内皮细胞的原代培养方法和结果报告如下。 材料和方法 一、琼醋平板的制备 琼醋粉39(来自美国FMC Co.,Roekland,ME)加入10oml生理盐水在小烧瓶内加热溶解并高压灭菌。在琼醋冷却成型前,取24孔组织培养板一块(来自美国Costar,Cambridge,MA),在净化工作台内将溶化的琼醋液注入2’孔组织培养平板的每个孔内,注入的琼醋掖平距孔面约2~3mm,平放在净化工作台内冷却,使其自然形成一个湿润的凹面,加盖后置4℃冰箱保存备用。 二、组织培养液的制备 细胞培养液是用美国生产的RPMI一1640谷酞胺粉剂20...  (本文共5页) 阅读全文>>

《潍坊医学院学报》1990年01期
潍坊医学院学报

人角膜细胞的原代培养实验研究

角膜细胞的体外培养是现代角膜病基础学研究的重要方法之一,尤其是角膜内皮细胞的培养更为重要,它对研究角膜的生理学,病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段。另外,角膜内皮细胞的培养成功,也为内皮细胞移植开拓了广阔的前景。目前我国的角膜细胞培养技术还处于初始阶段,但有良好的发展前途,我们在对角膜细胞的病毒学和免疫学研究中,大量地应用了角膜上皮、基质和内皮细的原代培养,现把我们对人角膜三种细胞的实验室培养技术和细胞形态学观察结果报告如下:材料和方法 一、琼脂平板的制备 琼脂粉3以来自美国FMcco.Rock-land,ME)加1 00ml生理盐水在小烧瓶内加热溶解并高压灭菌.取24孔组织培养板一块(来自美国c昭“甘,ombr五dge,MA),在净化工作台内将溶化的琼脂液注入每个孔内.注入的琼脂液平面距孔面约2~3~,待其冷却后自然形成一个湿润的凹面,加盖后保存备用。 二、细胞培养液的制备 用美国生产的Rp加且一1640谷酞胺粉剂...  (本文共4页) 阅读全文>>

《河北医科大学学报》2011年10期
河北医科大学学报

兔角膜上皮细胞体外原代培养和鉴定

角膜细胞成分培养是现代角膜病研究和治疗的基础,近年来,随着研究深人,对角膜细胞成分培养提出了更高要求。以往的培养方法复杂,对细胞损伤较大,导致活力降低,为此我们改良了体外原代培养兔角膜上皮细胞的方法,以建立一种简单、经济、实用的兔角膜上皮细胞培养方法,现报告如下。·1 1 18·河北医科大学学报第32卷第10期材料与方法1.,实验材料,.1.1实验动物:健康新西兰白兔6只,雌雄不限,体质量2.0一2.skg。眼部经裂隙灯显微镜检查显示屈光间质透明,无眼前节病变。1,1.2主要试剂和仪器:DMEM/F12(Gibco,一JsA),胎牛血清(美国GIBCO),eOZ培养箱(HealForeeHF12lUV),倒置相差显微镜(OLYMPUSCKX41,JaPan),广谱角蛋白单克隆抗体PCK(BosTER公司)。1.1.3培养液的制备:采用DMEM/F12、10%胎牛血清、100 x 10,u/L青霉素和100 x 10,u/L链霉素...  (本文共4页) 阅读全文>>

《眼科新进展》1999年02期
眼科新进展

同一猴、兔眼角膜细胞成分原代培养的实验研究

角膜细胞成分培养为现代角膜病基础和临床研究的重要方法之一,尤以角膜内皮细胞培养更为重要。它已被广泛应用于角膜病理生理学、药理毒理学、免疫学、角膜l叫皮、上皮细胞移植以及分子生物学的研究‘-‘。以往角膜细胞培养方法均为在同一角膜片上仅获单一角膜细胞成分的培养.这不利于节省材料.也不便于研究同一个体角膜细胞成分间的相互作用。近年来,随着研究的深人,对角膜细胞成分的培养提出了更高要求。我们在进行角膜分于生物学研究过程中,探索了一种以同一角膜为材料分别培养角膜上交、基质和内皮细胞的方法,现将其培养方法和细胞形态学观察结果报告如下。l材料和方法1.回细胞培养液的制备回.回.回上皮细胞和内皮细胞培养液采用DMEM/F12—l:1的混合液(Gibco,USA),内含10mmol·l。-’HEPES、200ml。·l。-’胎牛血清(Gibco.USA),100/10‘U·I-‘青霉素、100mg·l。链霉素、2.sing·I。-‘二性霉素B,p...  (本文共5页) 阅读全文>>

《牡丹江医学院学报》1999年02期
牡丹江医学院学报

细胞的原代培养

细胞生物学是生命科学四大前沿学科之一。近年来,随着该学科的迅猛发展,涌现出大量引人注目的新成果。许多新的理论、既念被广泛应用于医学领域,对医学的发展起到巨大的推动作用[‘]。动物细胞的原代培养,作为细胞生物学的一项重要实验技术,已成为研究细胞生理、增殖、遗传、癌变和细胞工程等课题的一项强有力的手段卜]。现将具体方法介绍如下:1材料和方法1.1取材取乳鼠肾脏,即容易培养成功的幼体组织进行培养。首先,用颈椎脱位法杀死乳鼠,然后把整个乳鼠浸入盛有75%乙醇烧坏中,置ZS~3S后取出,立即携入超净含,用消过毒的剪刀剪开用碘酒和乙醇再次消毒后的背部皮肤,取出肾脏置于无菌手血中D]。互.2切割用灭菌Hanks液冲洗两遍,用消毒后的眼科剪刀将组织剪开工。。~3m。左右小块,然后加3。k~5。IHanks液,冲洗组织块到发白为止,移入到无菌离心管,静置数分钟,弃土消「’。1.3消化吸取0.25%胰酶10ml加入离心管,与组织块混匀,加上管口塞,...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中山医科大学学报》1988年01期
中山医科大学学报

成年大鼠鼻咽及鼻腔上皮组织原代培养及生物学特性初步探讨(简报)

作者用wistar大白鼠鼻咽及鼻腔上皮组织为材料,用较高浓度小牛血清的1640加MEM混合培养基分别原代培养上述组织。现将初步结果简单介绍于下。 用上述培养基可培养出生长较旺盛的成年大鼠鼻咽及鼻腔的上皮样细胞、纤维样细胞,每种细胞无论来自鼻咽或鼻腔组织,经HE染色后在光镜下观察在形态上无区别,(图1,图2,本文附图均见书末插页)。 这些原代培养出的细胞可用低浓度胰酶液除去纤维样细胞并可传代1—5代不等。其生长情况及形态见表1、表2。表1 大鼠鼻咽组织原代培养上皮样细胞生长情况及形态 大鼠鼻咽上皮原代植块培养能传一代以上者为70%。鼻腔上皮原代植块培养能传一代以上者为65%。 大鼠鼻咽组织植块的存活率为91.4±11.6%(艾±SD),鼻腔组织植块的存活率为88.8±13.8%(X±SD)。 大鼠鼻咽及鼻腔上皮组织培养...  (本文共2页) 阅读全文>>